在临床药学专业药理学进行PBL教学的实践探索

目的：目前临床药师的工作还主要是以处方分析为主，审查药物的合用、配伍禁忌、用法等，主要体现了其“药学”特色，而并没有充分体现出“临床＂特色，因此临床思维的培养是临床药师培养和继续教育中需重点加强的内容。以案例为载体的PBL教学是培养医、药学人才临床思维的重要的教学方法，可尽早培养临床药学专业人员的药学思维和临床思维的结合。

青年教师提高药理学教学能力的几点体会

随着我国医药高等院校招生规模的扩大和教学改革的深入，学生规模和层次急剧增多，教学任务繁重，越来越多的青年教师走上讲台，成为教学工作的主力军。其中多数（尤其是专业课教师）来源于本专业毕业的硕士或博士，一般都没有经过师范类系统培训，更缺乏教学实践经验。与此同时，青年教师也是医药高等院校科研的生力军。正承受着前所未有的压力^[1]。如何利用有限的精力和时间尽快提高教学能力，成为一名合格的大学教师，不仅是个人成长的需要，更是高校教学实践的紧迫需求阁。本文从药理学教学的实践出发，探讨提高医药高等院校青年教师教学能力的一些体会。希望能与同行共勉。

案例教学法在药理学课程中的应用探讨

针对药理学课程教学中案例的选择、专业的相关性、案例在教学过程中的作用等方面对案例教学法在药理学教学中的应用进行分析,总结应用案例教学法时对教师的要求,展望案例教学法的发展前景。

留学生药理学实验教学的探索与实践

为提高留学生药理学实验教学质量,我们通过高质量的教学准备,严格的管理制度,采用启发式等教学方法及在对留学生尊重理解的基础上加强互动与沟通以充分调动其积极性,不断探索实践,逐渐形成较成熟的教学模式,使留学生药理学实验教学取得良好的效果。

突出创新能力与医学人文素质培养的药理学教学实践探索

创新能力与医学人文素质培养对于培养高素质的医学人才十分重要。在药理学教学实践中,我们着重于将创新能力和人文素质的提高融入教学过程中。学生不但学习了知识,而且提高了各种能力,尤其是具有临床思维的创新能力。此教学实践有利于培养技术精湛、医德高尚的医学人才。

四物汤对小鼠化疗所致贫血的恢复作用及其机制

目的:探讨四物汤对小鼠化疗所致贫血的恢复作用,并阐明其作用机制。方法:24只小鼠随机分为对照组(n=8,不给药)、模型组(n=8,给予5-氟尿嘧啶)和四物汤组(n=8,给予5-氟尿嘧啶+四物汤)。于给药15d后,眼静脉取血,显微镜下观察红细胞形态和数量;应用全自动血细胞计数仪检测3组小鼠外周血红细胞数和血红蛋白水平;采用双染标记法对红细胞表面标志性抗原进行抗体结合并染色,采用流式细胞术检测3组小鼠外周血和脾脏标记的红细胞数。结果:与对照组比较,模型组小鼠外周血红细胞数明显减少(P<0.05),细胞皱缩;与模型组比较,四物汤组小鼠外周血红细胞数量明显增加(P<0.05),细胞变圆。与对照组比较,模型组小鼠血红蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,四物汤组小鼠血红蛋白水平明显升高(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,模型组小鼠外周血CD71/Ter119表达水平明显降低(P<0.01),各象限红细胞数量降低(P<0.01);与模型组比较,四物汤组小鼠外周血CD71/Ter119表达水平明显升高(P<0.01),各象限红细胞数量升高(P<0.01);与对照组比较,模型组小鼠脾脏血CD71/Ter119表达水平明显降低(P<0.01),各象限红细胞数量降低(P<0.01);与模型组比较,四物汤组小鼠脾脏血CD71/Ter119表达水平明显升高(P<0.01),UL象限红细胞数量降低(P<0.01),UR和LR象限红细胞数量升高(P<0.01)。结论:四物汤可以促进小鼠化疗贫血损伤的恢复,促进红细胞数量增加,改善细胞形态表现,提升外周血血红蛋白水平,促进外周血和脾脏红细胞表面标志性抗原表达量增加。

日本七鳃鳗富含半胱氨酸RGD蛋白Lj-RGD1抑制血小板聚集及抗血管新生功能

Lj-RGD1来源于日本七鳃鳗口腔腺,富含半胱氨酸并具有RGD(Arg-Gly-Asp)模体.为了验证Lj-RGD1是否具有抑制血小板聚集、抗血管新生等去整合素样典型功能,本文对七鳃鳗Lj-RGD1进行了克隆表达及活性测定.提取七鳃鳗口腔腺中总RNA进行RT-PCR扩增,获得Lj-RGD1的420bp cDNA.对其进行克隆、表达及组氨酸亲和层析纯化后,获得分子量为16.9 kD的可溶性蛋白rLj-RGD1.活性测定结果显示,rLj-RGD1呈剂量依赖方式抑制ADP诱导的兔血小板聚集,IC50为12.3μmol/L;血管新生抑制实验结果表明,rLj-RGD1能够诱导ECV304细胞凋亡,抑制ECV304细胞增殖和管状物形成,并呈剂量依赖性方式抑制鸡胚胎绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)血管新生.由此可见,Lj-RGD1具有去整合素样生物活性,在血栓或血管异常新生类疾病治疗中具有应用前景.

日本七鳃鳗RGD毒素肽Lj-RGD2的克隆、表达及其抗血管新生活性

日本七鳃鳗口腔腺分泌蛋白Lj-RGD2毒素肽分子质量为8 kD,是含有2个RGD(Arg-Gly-Asp)模体序列的多肽.为了探讨其是否具有RGD毒素蛋白的功能,对其基因进行了克隆和表达,并对其重组蛋白进行了抗血管新生活性研究.从日本七鳃鳗口腔腺中提取mRNA,以自行设计的引物进行RT-PCR扩增,以获得Lj-RGD2基因;将获取的目的基因与pET23b载体连接,经转化、克隆、阳性转化子的筛选鉴定;将含组氨酸标签的pET23b-Lj-RGD2转化BL21菌中诱导表达;经亲和层析纯化,获得可溶性重组rLj-RGD2蛋白,并对重组rLj-RGD2蛋白的抗血管新生功能进行了研究.结果显示,rLj-RGD2蛋白的IC50为1.77μmol/L,并以剂量依赖方式抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖;rLj-RGD2蛋白还能抑制ECV304细胞对人工基质膜Matrigel的黏附、以BFGF(basicfibroblast growth factor)为趋化剂的迁移及侵袭.鸡胚绒毛尿囊膜CAM(chick chorioallantoic membrane)血管新生实验结果表明,rLj-RGD2蛋白能以剂量依赖方式抑制BFGF诱导的CAM血管新生.由此可见,rLj-RGD2蛋白具有RGD毒素肽的活性特征,其有望成为一种抗血管新生基因工程新药.

磷酸肌酸的脑保护作用研究

[目的]建立小鼠脑缺血、脑缺血再灌注模型以及细胞缺氧缺糖模型,研究损伤时磷酸肌酸(PCr)对脑的保护作用及其机制。[方法](1)小鼠尾静脉注射PCr后,进行双侧颈总动脉结扎,以4 h为限记录小鼠的生存时间;濒死小鼠断头取脑组织,测定丙二醛(MDA)含量。(2)小鼠尾静脉注射PCr,夹闭两侧颈总动脉,夹闭30 min后复灌注30 min,断头取脑,测定MDA含量。(3)用含连二亚硫酸钠(Na2S2O4)的无糖Earle’s液诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞建立缺氧缺糖损伤模型。用MTT法检测细胞活性;通过检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量来研究PCr对PC12细胞缺氧缺糖损伤的保护作用,以相同浓度的肌酸作对照。[结果]PCr能延长颈总动脉结扎小鼠的平均生存时间,降低脑缺血、脑缺血再灌注小鼠脑组织MDA水平,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)。在缺氧缺糖PC12细胞损伤模型中,PCr能提高细胞的存活率,PCr浓度为5 mmol/L及以上时,培养液中LDH水平与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),其作用与同浓度肌酸相比差异无显著性意义。[结论]PCr对缺血小鼠脑组织及缺氧缺糖培养条件下的PC12细胞均具有一定的保护作用。

HCBP12融合蛋白的表达、纯化及多抗制备

目的:构建丙型肝炎病毒核心抗原结合蛋白12(HCVCore binding protein,HCBP12)原核表达载体,在大肠埃希菌中进行表达、纯化HCBP12融合蛋白并制备兔抗HCBP12多克隆抗体。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HCBP12基因片段,插入至原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-HCBP12,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得HCBP12融合蛋白的可诱导性表达,并通过SDS-PAGE电泳、Western Blot免疫印迹分析和证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗HCBP12多克隆抗体。以纯化HCBP12为抗原,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果:HCBP12融合蛋白表达成功。SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达。成功获得了融合蛋白纯品及兔抗HCBP12多克隆抗体。ELISA法表明多克隆抗体效价>1512000,Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论:成功表达、纯化HCBP12融合蛋白,并获得高特异性、高效价兔抗HCBP12多克隆抗体,为研究HCBP12蛋白的生物学功能及丙肝的临床治疗提供了重要的实验工具。

20-羟-二十烷四烯酸对血管内皮细胞的作用研究进展

20-羟-二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)是花生四烯酸的细胞色素P-450代谢途径的一个重要代谢产物。近年来研究发现20-HETE对血管内皮细胞发挥重要的生理和病理生理作用。20-HETE可激活内皮细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleoti-de phosphate,NADPH)氧化酶系统和核因子-кB(nuclear factor-кB,NF-кB)通路发挥氧化应激和促炎作用;20-HETE可介导血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的解离、降低NO的生物利用度及诱导血管紧张素转换酶,调节血管的舒张和收缩功能;20-HETE还可促进内皮细胞的增生而促进血管新生。但国内对20-HETE研究甚少,因此本文对近年来国际上关于20-HETE对血管内皮细胞的研究作一综述。

腺相关病毒介导的pdx-1基因表达促进糖尿病大鼠肝脏细胞向胰岛素产生细胞转化的研究(英文)

目的:胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,pdx-1)是胰岛发育和分化过程中重要的转录因子。本实验旨在研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的pdx-1基因的表达是否可以诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,以进一步为糖尿病的细胞替代疗法提供信息。方法:门静脉途径注射AAV-pdx-1或AAV对照载体到大鼠体内。6周后,用RT-PCR和免疫细胞化学法检测肝脏中胰岛素的基因表达及测定大鼠血糖、体重的变化。结果:AAV-pdx-1治疗组明显提高了糖尿病大鼠肝脏中胰岛素的基因表达和胰岛素阳性细胞数,改善了糖尿病大鼠的高血糖状态及增加了体重。结论:AAV-pdx-1可诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,缓解了糖尿病状态。其分化的机制及分化的肝脏细胞亚群需进一步实验研究,以提高分化效率。

四君子汤通过Fas受体诱导小鼠膀胱癌细胞凋亡

目的:探讨中药四君子汤对小鼠膀胱癌BTT739的抗肿瘤作用机制。方法:小鼠膀胱癌细胞接种于T739小鼠皮下,动物抽签法随机分为三组,对照组:生理盐水每次0·15mL,每日2次灌胃;四君子汤小剂量组:四君子汤每次0·15g,每日1次灌胃;四君子汤大剂量组:四君子汤每次0·3g,每日2次灌胃。每组小鼠接种24h后分别给药;用药14d后应用电镜、流式细胞分析技术检测各组小鼠膀胱癌细胞凋亡,流式细胞仪检测肿瘤细胞膜Fas与FasL受体的表达。结果:电镜下可见四君子汤大剂量组小鼠肿瘤组织特征性凋亡细胞的出现,而其他组未出现上述征象;流式细胞仪检测四君子汤大剂量组肿瘤细胞的凋亡峰值为(20·11±1·32)%,四君子汤小剂量组及对照组为(9·33±1·62)%和(5·91±1·84)%,经比较差异有统计学意义,P=0·0001;四君子汤大剂量组肿瘤细胞Fas与FasL的表达为(12·47±0·51)%和(21·3±0·49)%,较其他两组明显增加,P=0·0002。结论:在本实验条件下,大剂量组四君子汤可以诱导小鼠膀胱癌细胞凋亡,死亡受体Fas及FasL的表达增加,可能是四君子汤诱导肿瘤细胞凋亡的重要信息传导途径。

基于微信平台的PBL联合分组教学模式研究

目的采用微信平台建立群组,探讨在内科学教学中新的基于问题的学习(PBL)教学模式。方法选取大连医科大学第一临床学院2014级临床医学专业学生62人,分为研究组(32人)和对照组(30人)。研究组采用微信平台PBL联合分组教学模式,对照组仅采用PBL联合分组教学模式。通过客观理论考试与主观考核评估教学效果。结果研究组学生客观理论测试总成绩[(90.40±3.86)分]明显高于对照组[(84.20±4.05)分],差异有统计学意义(P<0.05),主要体现在病例分析方面。研究组学生主观考核总成绩[(92.8±2.15)分]也明显高于对照组[(85.6±3.60)分],差异也有统计学意义(P<0.05),主要体现在知识扩展、逻辑推理、诊疗思维、相互协作能力方面。结论基于微信平台的PBL联合分组教学是有效的教学模式。

关于案例式教学法在医学基础教育中应用的思考

案例式教学法在医学基础教育中正逐渐得到重视,但还处于探索阶段,本文在近期案例式教学实践的基础上从：（1）案例式教学法在医学基础教育中的学科相对性;（2）案例是理论性和实践性的统一体,教学案例还应注重真实性与适用性的统一;（3）避免将案例式教学形而上学,建立多元化的案例教学模式等。三个方面加以讨论,以进一步提高案例式教学法的效果,达到全面发展的素质培养目标。

葡萄糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响

目的:目前小鼠胚胎干细胞(mouse embry-onic stem cells,mESC)常规应用高浓度葡萄糖(25 mmol/L)培养基培养,但是在应用干细胞向糖尿病胰岛beta细胞分化的研究中发现,慢性高糖培养可促进干细胞的凋亡、降低细胞分化的效率及分化后胰岛beta细胞对葡萄糖的反应性,因此本研究拟选择合适的较低浓度的葡萄糖以优化胚胎干细胞的培养基、提高胚胎干细胞的生长、分化效率。方法:mESC传代4或12 h后,将传统的25 mmol/L葡萄糖培养基分别换为5、10、15、25 mmol/L葡萄糖培养基培养,均用碱性磷酸酶(AP)染色计数细胞集落形成情况、台盼兰染色测定细胞数目,MTT法测定细胞活力及用4’,6-联脒-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色检测细胞凋亡情况。结果:mESC传代4 h后即调换葡萄糖浓度:(1)各葡萄糖浓度组(5、10、15 mmol/L)与25 mmol/L组相比,集落形成明显减少。(2)各葡萄糖浓度组与25 mmol/L组相比,mESC增殖及细胞活力均受到不同程度明显影响。mESC传代12 h后调换葡萄糖浓度:(1)各葡萄糖浓度组(5、10、15 mmol/L)与25 mmol/L组相比,集落形成无明显变化,且AP染色呈强阳性。(2)15 mmol/L葡萄糖组对mESC增殖及细胞活力均无明显影响。(3)15 mmol/L葡萄糖组与25 mmol/L葡萄糖组细胞核形态正常,均未见明显凋亡。结论:ESC传代12 h后将培养基中传统的高糖(25 mmol/L)降低为15 mmol/L,不影响mESC细胞活力及多能分化潜能和未分化状态。

中药药动学研究中生物分析和实验技术的研究进展

通过查阅文献,综述近年来中药药动学研究中生物分析和实验技术的某些研究进展,包括液相色谱-质谱联用技术、柱后荧光衍生高效液相色谱(HPLC)技术、生物测定技术、细胞生物学技术和微透析技术等,以期为中药药动学的研究提供技术参考资料。

槲皮素对蛋白质非酶糖基化及微血管内皮细胞的作用

目的：槲皮素，化学名为3，3，4，5，7-五羟基黄酮，存在于多种经常食用的食品及多种药用植物中。现有研究已表明槲皮素除具有较好的降血糖、降血脂、改善胰岛素抵抗的作用外，还可抗血小板聚集、降低血压、减少毛细血管脆性、保护血管内皮细胞，因此近年来逐渐受到国内外学者的重视。

高糖联合晚期糖基化终产物对微血管内皮细胞损伤模型的建立

目的：糖尿病微血管病变是糖尿病发生最早的并发症，也是各种慢性并发症的病理基础，成为糖尿病预后的决定性因素。晚期糖基化终产物（advanced glycation end—products，AGEs）对糖尿病微血管并发症的发生和发展起了重要作用。本研究拟在体外培养的微血管内皮细胞建立规范化的AGEs损伤的细胞模型，以为进一步的药物筛选和作用机制研究奠定基础。