新型异丁酸锂-L-脯氨酸螯合物的合成、表征及抗躁狂作用

目的新型异丁酸锂-L-脯氨酸螯合物尼布林(IsoLiPro)合成及表征分析,观察其药代动力学及抗躁狂作用。方法采用单一溶剂析晶法制备IsoLiPro,并采用粉末X射线衍射(XRD)、氢核磁共振波谱(NMRS)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)对所得的IsoLiPro进行鉴定和解析;采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测灌胃给药不同时点IsoLiPro和Li_(2)CO_(3)2组大鼠血浆及肾脏、脑组织中锂元素含量,并进行药代动力学分析;蛋白质印迹检测体外培养小鼠海马神经元细胞系细胞经IsoLiPro处理后cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、细胞外调节蛋白激酶(Erk1/2)以及脑源性神经生长因子(BDNF)信号通路蛋白的表达及磷酸化程度;通过旷场行为学实验考察IsoLiPro对苯丙胺诱导的小鼠躁狂样症状的作用。结果各表征结果表明制得的IsoLiPro有别于异丁酸锂和脯氨酸,且相关参数表明其为单斜晶体结构;药代动力学结果表明IsoLiPro在大鼠血浆中存在良好的线性关系,药动学参数优于Li_(2)CO_(3)组;蛋白质电泳结果表明与同浓度Li_(2)CO_(3)组相比,IsoLiPro可显著增加p-GSK-3β、p-CREB、p-Erk1/2和BDNF的表达,差异有统计学意义(P<0.05),表明IsoLiPro具有良好的体外生物学活性;旷场行为学实验结果表明IsoLiPro可有效改善由苯丙胺诱导的小鼠过度运动行为,表现出较好的抗躁狂作用,且作用强于Li_(2)CO_(3)(P<0.05)。结论本研究成功制备新型螯合锂-IsoLiPro,该化合物在药代动力学和抗躁狂作用等方面均优于临床常用的Li_(2)CO_(3)。

逆转录病毒滴度测定新方法的实验研究

[目的]研究一种简便、快速的能获取较高病毒滴度的体外培养方法。[方法]用质脂体转移法将逆转录病毒载体pLXIn转染到包装细胞PA317中,用G418筛选出抗性克隆,扩大培养,再收集上清,并测定病毒滴度。比较不同方法产生病毒的多少,为提高病毒滴度而进一步感染靶细胞奠定良好的实验基础。[结果]改良后的新方法(低温32℃、无CO2条件以及反复冻融法)较常规方法(37℃、5%CO2)可提高病毒滴度至少10倍。PTs,PTas和PLXIn组病毒颗粒数分别提高到1.3×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL、1.5×105CFU/mL。[结论]逆转录病毒滴度测定新方法简便、快捷,能获取较高病毒滴度。

糖化血红蛋白检测在糖尿病诊治中的临床价值

糖尿病是一种很常见的内分泌代谢疾病,其病因和发病机制尚未完全明确,然而它引起的并发症严重危害人们的身体健康。目前糖尿病已经成为威胁人类生命健康的第三大慢性病,不仅发病率高,且呈增长趋势,故糖尿病的早期发现和早期诊断刻不容缓。由于早期糖尿病起病隐匿,缺乏或无典型的临床症状,监测和控制血糖水平对糖尿病及其并发症的诊治非常关键。

免疫印迹法检测胰岛自身抗体系列在糖尿病分型诊断中的应用

目的探讨免疫印迹法检测胰岛自身抗体系列——抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、抗胰岛细胞抗体(ICA)、抗胰岛素自身抗体(IAA)在糖尿病分型诊断中的应用及临床意义。方法应用免疫印迹法联合检测187例糖尿病患者及30例健康体检者血清中的GADA、ICA、IAA。结果应用免疫印迹法检测T1DM组中GADA、ICA、IAA阳性率分别为65.22%、53.62%和28.99%,显著高于T2DM组(P<0.05)及正常对照组(P<0.05);T2DM组GADA、ICA、IAA阳性率分别为12.71%、11.02%和5.93%,与正常对照组比较有统计学差异(P<0.05)。结论免疫印迹法检测胰岛自身抗体系列对于临床糖尿病的诊断及分型具有重要的临床应用价值。

重组人血管内皮抑素联合5-Fu/DDP序贯腹腔注药治疗胃癌恶性腹水的临床观察

目的探讨重组人血管内皮抑素(恩度)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)/顺铂(DDP)序贯腹腔注药治疗胃癌恶性腹水的疗效和不良反应。方法将58例胃癌恶性腹水患者随机分为治疗组(恩度+5-Fu+DDP)、对照组(5-Fu+DDP)两组,判断两组治疗胃癌恶性腹水的疗效、起效时间、生活质量及毒副反应。结果两组治疗胃癌恶性腹水的有效率:治疗组75.0%、对照组51.7%;起效时间:治疗组11.5 d、对照组17.0 d;对生活质量的影响:治疗组生活质量改善明显高于对照组;不良反应:治疗组不良反应与对照组相近。结论恩度联合5-Fu/DDP序贯腹腔注药治疗胃癌恶性腹水具有疗效高、起效时间快,可缩短疗程,提高生活质量,是治疗胃癌恶性腹水的有效方法。

流式细胞术在159例急性白血病免疫分型中的应用

目的探讨急性白血病免疫分型的特点及其临床意义。方法利用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果(1)在119例AML患者中髓系相关抗原CD13(91.59%)、CD117(86.97%)和CD33(84.03%)阳性表达率最高,还有14.28%的AML患者伴有淋系抗原的表达,主要为CD7(14.28%)和CD19(1.68%)。29例B-ALL患者,CD19和HLA-DR全部阳性(100%),其次为CD34(92.03%)、CD22(62.07%)。11例T-ALL患者,CD7表达的阳性率最高(100%),CD3(72.73%)和CD2(63.64%)次之。(2)AML患者中,除大多数AML-M3患者CD34和HLA-DR为阴性表达外,其他亚型患者CD13、CD117、CD33、CD34和HLA-DR均为高表达。结论在流式细胞仪上采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术分析,使得免疫分型的结果更为可靠。

多发性骨髓瘤免疫表型特征及其意义

本研究探讨多发性骨髓瘤细胞的免疫表型特征及其意义。采用流式细胞仪多参数直接免疫荧光技术、CD45/SSC设门,对31例多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞标记CD138、CD38、CD56、CD117、HLA-DR、CD3、CD7、CD13、CD33、CD19、CD20、CD22、CD34进行检测,并辅以瘤细胞的形态学检查。结果表明:形态学检查观察到瘤细胞比例为10%-68%,CD45/SSC设门证实可疑瘤细胞比例为9.72%-67.77%;抗原阳性表达比例分别为CD13861.29%,CD38 100%,CD56 46.15%,CD13 70.00%,CD33 29.03%,HLA-DR74.19%,CD117 33.33%,其余抗原均为阴性表达。结论:CD45/SSC设门技术可以较准确地设定需要分析的多发性骨髓瘤细胞群,与形态学分类瘤细胞的比例相接近;瘤细胞以表达CD138、CD38、CD56抗原为主,部分患者可伴有髓系抗原CD13、CD33、CD117表达,有关这些抗原表达的生物学意义尚待进一步研究。

功能性腹泻脾虚证模型大鼠结肠生长激素促释放激素受体表达的变化

目的:观察功能性腹泻脾虚证模型大鼠结肠组织生长激素促释放激素受体(GHSR)表达的变化,探讨发病机制。方法:高乳糖饲料喂养及小平台站立制备功能性腹泻脾虚证大鼠模型,观察大鼠的一般状态变化及粪便情况。免疫组织化学法,蛋白质印迹(Western blotting)和荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠结肠组织生长激素促释放激素受体的表达情况。结果:功能性腹泻脾虚的模型大鼠出现精神乏力、消瘦及便溏等现象;免疫组织化学结果显示模型组生长激素促释放激素受体的蛋白表达较正常组表达降低;蛋白质印迹结果显示模型组生长激素促释放激素受体的蛋白表达较正常组表达有差异且有统计学意义(P<0.01);荧光定量PCR结果显示模型组生长激素促释放激素受体mRNA的表达较正常组表达有差异且有统计学意义(P<0.01)。结论:成功构建功能性腹泻脾虚证大鼠模型。功能性腹泻脾虚证大鼠结肠组织生长激素促释放激素受体表达下降。推断生长激素促释放激素受体可能与功能性腹泻脾虚证有相关性。

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。

鹿茸健骨胶囊治疗原发性骨质疏松症的临床疗效观察

目的 对鹿茸健骨胶囊治疗原发性骨质疏松症的疗效及潜在的毒副作用进行临床观察。方法 1 5年内分别用鹿茸健骨胶囊和骨疏康治疗原发性骨质疏松症患者各 30例 ,12个月为一个疗程 ,用药前及用药后 12个月分别查血、尿、便常规、肝肾功能及电解质、心电图等 ,同时用QCT测第 2～ 4腰椎的骨密度 (BMD) ,并对患者的腰背酸痛、腰膝酸软等肾虚症状进行评估。结果 鹿茸健骨胶囊治疗组总有效率为 82 14 % ,骨疏康治疗组总有效率为 6 7 86 %。鹿茸健骨胶囊对心、肝、肾无毒副作用 ,对血常规及电解质无不良影响 ,且能改善心肌的血液循环。结论 鹿茸健骨胶囊是一个耐受性良好、安全有效的治疗原发性骨质疏松症的新药。

脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证模型大鼠结肠组织胰高血糖素肽1受体表达的影响

目的:观察脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证大鼠模型的作用及对大鼠结肠组织胰高血糖素肽1受体表达的影响,探讨其作用机制。方法:高乳糖加小平台站立法制备功能性腹泻脾虚证大鼠模型,观察大鼠的腹泻指数和体重变化,比色法检测血清乳酸、淀粉酶、尿D-木糖含量变化。脾虚4号方治疗功能性腹泻脾虚证模型大鼠后,分别用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测大鼠结肠组织胰高血糖素肽1受体的表达情况。结果:功能性腹泻脾虚证模型组大鼠较正常组大鼠的腹泻指数增加,体重增加减缓。模型组大鼠较正常组大鼠的血清乳酸含量升高、血清淀粉酶活力降低、尿D-木糖含量降低。模型组大鼠结肠组织的GLP-1R表达水平较正常组降低且有统计学意义(P<0.01);脾虚4号方治疗组GLP-1R表达水平较模型组升高且有统计学意义(P<0.01)。结论:成功复制功能性腹泻脾虚证大鼠模型。脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证大鼠有一定的治疗作用,脾虚4号方使功能性腹泻脾虚证大鼠结肠胰高血糖素肽1受体表达升高。推断胰高血糖素肽1受体可能与脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证的治疗有相关性。

蒲公英不同萃取物对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩活动的影响

[目的]观察蒲公英的不同萃取物对豚鼠胃窦环行肌自发性活动的影响以筛选蒲公英促进胃肠动力的有效部位。[方法]用蒲公英的不同萃取物与碳末胶液混合后给小鼠灌胃观察蒲公英不同萃取物对胃肠动力的影响;用多道生理记录仪观察蒲公英不同萃取物对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩活动的影响。实验分6组,分别为吗丁啉组(对照组)、正丁醇组、水层组、石油醚组和乙酸乙酯组。[结果]蒲公英正丁醇萃取物的碳末胶液灌胃后在胃肠道内推行距离明显远,为(72.7±4.2)%,与对照组(57.6±4.3)%及蒲公英水溶液组(27.3±9.1)%、蒲公英石油醚组(35.4±10.3)%及蒲公英乙酸乙酯组(35.7±12.1)%相比差异具有显著性意义(P<0.01);1 mg/mL、10 mg/mL和100 mg/mL 3个不同浓度的蒲公英正丁醇提取物对小鼠胃肠推进长度,分别为(51.7±5.3)%、(66.3±4.5)%和(85.0±5.0)%,显示随着浓度的增加其在胃肠道中推进的距离越长;蒲公英正丁醇萃取物明显增强豚鼠胃窦环行肌自发性收缩活动,与对照组及其他萃取物组相比差异具有显著性意义(P<0.01);蒲公英正丁醇萃取物对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩幅度随浓度的增加而增强。[结论]蒲公英正丁醇部分是促进胃肠动力的有效部位。

三色流式细胞术分析急性淋巴细胞白血病免疫分型

本研究探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)各亚型免疫分型的特点及其临床意义。利用CD45/SSC双参数散点图设门方法,对40例ALL进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果显示:采用CD45/SSC双参数散点图设门法能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和原始细胞群。40例ALL中B-ALL26例,T-ALL11例,HAL3例。26例B-ALL中CD19全部(100%)阳性表达,而11例T-ALL中CD7表达的阳性率最高(100%)。伴髓系抗原表达的ALL(My+ALL)比较常见,本实验中共有12例,约达到30.0%,经常累及B淋巴系统(占My+ALL的75.0%);在髓系抗原中以CD13表达阳性率最高;有3例患者为急性杂合性白血病(HAL),发病率为7.5%,且全部为髓系、B系共同表达,其中有2例患者CD34阳性表达,占66.67%。结论:在流式细胞仪上采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术分析,能排除正常细胞的干扰,使免疫分型的结果更为准确、可靠。

慢性淋巴细胞白血病免疫表型及凋亡相关蛋白分析

目的探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫表型和凋亡相关蛋白表达特征及其临床意义。方法应用CD45/SSC设门方案,通过三色流式细胞术对150例CLL患者、105例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者骨髓或外周血进行免疫分型。结果 150例CLL患者均高表达CD19;HLA-DR、CD20、CD5、CD22、CD38、CD23阳性率依次为96.67%、95.33%、84.67%、86.67%、40.67%、60.66%;CD10、cCD79a、CD3、CD25、CD34、ZAP70、FMC7阳性率较低,依次为3.33%、15.33%、4.67%、1.33%、3.33%、11.43%、8.67%。其他抗体均无表达;与B-ALL患者相比,CLL患者CD5、CD20阳性率升高(P<0.05),CD10、CD34、CD22、Ccd79a阳性率降低(P<0.05),CD19、HLA-DR表达率无统计学差异(P>0.05)。CLL患者凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax阳性率分别为74.67%和7.33%。结论 CD5、CD20、CD19是CLL特异性免疫表型,ZAP70、CD38可作为预后判断指标,CLL细胞Bcl-2高表达、Bax低表达,在疾病发生、发展中意义重大。

四磨汤与功能性消化不良模型大鼠胃RhoA及ROCK的关系研究

目的研究四磨汤与功能性消化不良模型大鼠胃RhoA及ROCK的关系,探讨其治疗机制。方法通过碘乙酰胺灌胃、孤养及平台站立剥夺睡眠制备功能性消化不良大鼠模型。观察大鼠的一般状态,通过旷场试验和糖水试验鉴定大鼠模型。采用胃平滑肌肌条收缩实验检测抑制剂 Y27632和四磨汤对胃平滑肌肌条作用。采用荧光定量PCR法检测大鼠胃组织RhoA及ROCK表达情况。结果构建完成功能性消化不良大鼠模型;抑制剂 Y27632干预了四磨汤对胃平滑肌肌条的增强作用;荧光定量PCR结果显示模型组RhoA及ROCK基因mRNA的表达较正常组表达降低且有统计学意义(P<0.05;P<0.01);四磨汤干预后,四磨汤组RhoA及ROCK基因mRNA的表达较模型组表达升高且有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。结论成功构建功能性消化不良大鼠模型。RhoA及ROCK的表达可能与四磨汤对功能性消化不良作用有相关性。

中西医结合治疗功能性消化不良及其与Cajal间质细胞关系的研究进展

功能性消化不良(FD)是临床常见消化系统疾病,具有持续性和反复发作性的特点。关于FD的病因和发病机制尚不明确,胃肠动力障碍是FD发病的主要病理生理基础。Cajal间质细胞(ICC)是胃肠道起搏细胞,也具有信号传导功能,对胃肠动力的发生和调控起重要作用,深入了解ICC与FD之间的关系将为中西医结合治疗FD提供新思路。

阻断核心岩藻糖基化修饰抑制肾小管上皮细胞的间充质转化

目的:探讨阻抑核心岩藻糖基化修饰对肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)过程的影响。方法:利用转化生长因子β1(TGF-β1)建立肾小管上皮HK-2细胞EMT的模型,应用RNAi技术沉默HK-2细胞的α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因表达,光镜下观察FUT8基因沉默后细胞形态变化,免疫印迹及免疫细胞化学方法测定细胞表型标记物蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)的表达变化,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:TGF-β1孵育48 h后,HK-2细胞失去原有的上皮细胞形态,呈现纤维细胞形态,纤维细胞表型标记蛋白α-SMA、FSP-1及N-cad-herin表达明显升高,而上皮细胞表型标记蛋白E-cadherin表达明显下降,同时伴有FUT8基因表达上调,细胞凋亡增加,而提前转染FUT8 siRNA能明显减弱上述这些反应。结论:FUT8催化的核心岩藻糖基化修饰参与HK-2细胞的EMT过程;阻断核心岩藻糖基化修饰,能有效阻断肾小管上皮细胞的EMT过程。

简易的沙眼衣原体扩增及纯化方法的建立

目的建立扩增培养和纯化沙眼衣原体的简化方法。方法采用HeLa细胞培养扩增衣原体,并应用一步法将沙眼衣原体纯化回收。结果获得了具有高感染活性的沙眼衣原体。结论该方法与常规方法相比更简便、快速,同时减少污染机会、不需要超声和超速离心机等设备。

菝葜乙醇提取物对大鼠离体胃肠道平滑肌收缩活动的作用

目的研究菝葜乙醇提取物对大鼠离体胃肠道平滑肌收缩活动的影响及作用机制。方法以大鼠离体胃肠道平滑肌条作为研究对象,用生物功能实验系统记录和观察20、40和80 mg/mL的菝葜乙醇提取物分别在正常条件下及阿托品作用下对大鼠胃肠道平滑肌振幅的影响。结果菝葜乙醇提取物可显著增强大鼠胃肠道平滑肌条的振幅,且随浓度呈升高趋势;而菝葜乙醇提取物对阿托品引起的胃肠道平滑肌松弛效应具有明显拮抗作用。结论菝葜乙醇提取物对大鼠胃肠道平滑肌条的收缩活动具有显著的加强作用。

大黄素对豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动的影响及相关机制

目的:观察大黄素(emodin)对豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动的影响及相关机制.方法:用四道生理记录仪记录豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动;用膜片钳记录豚鼠胃窦环形肌细胞上L型钙电流,观察L型钙电流在大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动中的作用.结果:大黄素在一定的浓度范围内增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动并呈剂量依赖性,给予5、10、15、20、25、50mol/L的大黄素后豚鼠胃窦环形肌自发性收缩的幅度分别为对照组的108.2%±6.2%、150.6%±8.3%、198.2%±7.6%、200.2%±8.6%、160.0%±6.8%、81.2%±6.2%.预先加入10mol/L的硝苯地平,完全阻断大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩活动.10mol/L和20mol/L的大黄素明显增强豚鼠胃窦环形肌细胞上钡电流(IBa),用10mol/L的大黄素灌流开始后200s左右时IBa电流峰值变化趋于稳定,20mol/L的大黄素灌流开始后170s左右时IBa电流峰值变化趋于稳定.加药后IBa电流峰值分别增加到对照组电流最大值的137.88%±5.79%和158.69%±6.11%.结论:大黄素增强豚鼠胃窦环形肌自发性收缩,细胞外钙通过L型钙通道内流入细胞内引起平滑肌收缩是大黄素促进豚鼠胃窦环形肌自发性收缩的作用机制之一.