N-乙酰氨基半乳糖转移酶3高表达细胞株的建立及其对细胞迁移的影响

蛋白质异常糖基化是导致细胞黏附、肿瘤转移和血管生成的重要因素[1-2].N-乙酰氨基半乳糖转移酶3（GalNAc-T3）能够催化N-乙酰氨基半乳糖连接到蛋白质丝氨酸或苏氨酸残基的羟基上,是黏蛋白型O-糖基化修饰的起始糖基转移酶.我们前期的研究成果显示,在低表达GalNAc-T3肺腺癌组织内,肿瘤细胞分化程度较低,预后较差[3].我们利用慢病毒载体,构建高表达GalNAc-T3肺腺癌A549细胞株,观察GalNAc-T3的表达对肺腺癌转移的影响.

短发夹RNA稳定沉默Y盒结合蛋白-1基因的人肺腺癌A549细胞株的建立及增殖能力研究

目的 构建稳定沉默Y盒结合蛋白1（YB-1）基因的人肺腺癌A549细胞株并观察其增殖能力.方法 以脂质体将两种沉默YB-1基因的shRNA真核表达载体转染人肺腺癌细胞株A549,G418筛选稳定转染细胞株.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）及Westem blot法检测YB-1基因表达;噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线.结果 稳定转染细胞株稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）;RT-PCR、FQ-PCR和Western blot法检测结果显示稳定转染组细胞株A549-746与A549-326 YB-1 mRNA和蛋白表达（0.41±0.01与0.39±0.06、0.43±0.10与0.20±0.24、0.49 ±0.06与0.24±0.02）较对照组明显下降（P＜0.05）;噻唑蓝（MTT）检测稳定转染组较对照组生长速度降低（P＜0.05）.结论 成功建立稳定表达GFP,并稳定沉默YB-1基因的人肺腺癌细胞株A549-746和A549-326,沉默YB-1可抑制A549细胞增殖能力.