实验小鼠烧伤后对皮肤解毒酶表达水平的影响

本文旨在通过检测烧伤诱导的大鼠体内烟酰胺降解的改变,探索皮肤本身可能在胰岛素抵抗中起到的重要作用。此实验通过检测与解毒相关的酶的m RNA的表达(包括烟酰胺N-甲基转移酶、醛氧化酶、儿茶酚-O-甲基转移酶、单胺氧化酶A、超氧化物歧化酶2、谷胱甘肽过氧化物酶1、过氧化氢酶和过氧化还原酶1)。进而研究假烧伤大鼠与烧伤大鼠体内的烟酰胺和N1-甲基烟酰胺的清除能力是否有所差异。结果表明,在烧伤大鼠的皮肤中酶均未表达,但假烧伤大鼠均有表达。假烧伤大鼠的烟酰胺的代谢能力大于烧伤大鼠的代谢能力且全层烧伤的大鼠皮肤中检测不到异型生药物代谢酶的表达。烧伤能降低机体对过多烟酰胺的清除能力。

乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位与结构预测

目的利用真核细胞绿色荧光表达系统分析乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位,并用生物信息学方法对其结构进行分析。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入pEGFP-C1载体中,分别转染HepG2细胞与COS7细胞,在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光融合蛋白的细胞内定位,并应用生物信息学技术分析HBVDNAPTP1的结构特征。结果经RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,成功构建HBVDNAPTP1基因的绿色荧光表达载体,转染细胞后,48～72h内细胞质出现明显的绿色荧光信号。结构预测结果表明HBVDNAPTP1无卷曲螺旋区域,有6个疏水区;无特殊二级结构,有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点和3个蛋白激酶C磷酸化位点;不具有跨膜螺旋结构,无信号肽。结论HBVDNAPTP1的亚细胞定位结果与生物信息学分析相符,为进一步研究其生物学功能及其在乙型肝炎、肝细胞癌中的作用机制奠定了基础。

乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1相互作用蛋白的筛选与鉴定

目的筛选并鉴定与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶反式调节蛋白(HBVDNAPTP1)相互作用的蛋白。方法将HBVDNAPTP1基因片段插入酵母细胞表达载体pGBKT7中,转化AH109酵母菌株并获得表达,与含有白细胞文库质粒的Y187酵母菌株配合,利用营养缺陷型培养基筛选阳性克隆。提取单个阳性文库质粒进行酶切鉴定,测序后回复验证其在酵母中的相互作用。利用免疫共沉淀方法进一步验证HBVDNAPTP1与成对免疫球蛋白受体α(PILRα)在体外的相互作用。结果经RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,成功构建HBVDNAPTP1基因的酵母细胞"诱饵"表达质粒,获得了与HBVDNAPTP1具有相互作用的已知功能蛋白4种,分别为PILRα、酶原颗粒蛋白16、羧酸脂酶1、β转导素样蛋白2。免疫共沉淀结果表明HBVDNAPTP1与PILRα在体外存在相互作用。结论获得了4种可与HBVDNAPTP1相互作用的候选蛋白,HBVDNAPTP1可能参与了肝细胞的增殖分化、信息传递和生长代谢。

人类和小鼠的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因超家族

丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)家族是由结构相似,功能多样的蛋白质组成。最初的serpin是根据他们的功能而命名的,其中许多成员不是抑制剂而是伴侣,它们参与储存,运输及其他作用。在所有领域的基因组中,serpin含有36个编码人蛋白质基因和5个假基因。小鼠则有60个serpin的功能基因,其中有许多是直系同源人的serpin基因,一些基因已扩展到多个旁系同源基因。丝氨酸蛋白酶抑制因子(serpins)分布于全身组织;其中大多数在细胞外,也有一些在细胞内。经研究显示,serpins可能对炎症,免疫功能,肿瘤发生,血液凝固,痴呆和肿瘤转移都有作用。根据这些蛋白的特性,可能将会进一步发现疾病的潜在生物标志物和治疗靶点。

ERIC-PCR技术临床应用现状

围绕ERIC-PCR技术特点及其临床应用现状做一综述。ERIC-PCR技术不仅具有分辨率高、敏度性高、重复性高的特点而且还具有成本低、操作简便、快速检测的优势。ERIC-PCR指纹图谱能够反映细菌基因组组成和微生物种群的多样性与群落结构,在临床上有广泛的应用前景。

孕妇围产期肥胖对妊娠期妇女和胎儿的影响

孕期营养对孕妇和胎儿的健康都十分重要,孕期合理营养是保障母婴健康的基础,期间营养状况直接关系着妊娠结局,对孕妇及胎儿的健康亦有重要影响。大量研究显示孕妇肥胖与围生期孕妇及胎儿的不良结局相关。

大鼠电压依赖性阴离子通道1的基因克隆与序列分析

目的克隆大鼠电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法以提取的大鼠心肌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得VDAC1基因片段,连接到pMD19-T克隆载体并测序鉴定。应用生物信息学方法分析VDAC1基因的序列同源性与结构特征。结果成功克隆了大鼠VDAC1基因,与人、牛、小鼠、兔和猪的VDAC1基因具有高度同源性,同源性分别为90.0%、90.6%、96.0%、91.1%和91.0%。VDAC1在体外哺乳动物网状细胞中的半寿期为30h,无卷曲螺旋结构,但有6个亲水区,在225～247aa具有真核细胞线粒体外膜孔道蛋白家族特征性模序结构。结论成功克隆了大鼠VDAC1基因,并应用生物信息学技术进行序列分析,为进一步研究其生物学功能及其在2型糖尿病发病机制中的作用提供了依据和线索。

烟酰胺超载对大鼠血浆内甲基化反应水平的影响

利用长期大鼠高烟酰胺喂养模型,观察烟酰胺超载对血浆内甲基化反应指标的影响。结果发现,高烟酰胺摄入将伴随高甲基供体消耗,并引起血中甜菜碱水平明显降低,直接证明过量烟酰胺会导致甲基库耗竭。这表明过量的烟酰胺可能通过甲基耗竭诱导氧化性线粒体和DNA损伤及DNA甲基化样式的改变。

人鼻咽鳞癌细胞CNE1/R PECAM-1真核表达载体的构建

通过TA克隆技术及二步克隆的方法构建人鼻咽鳞癌细胞CNE1/R PECAM-1的真核表达载体。将已克隆至Pmd19-T Simple载体的PECAM-1基因片段使用Not/HindⅢ酶切,亚克隆至pcDNA3.1/myc-His(-)A载体并双酶切及测序鉴定。成功构建了人鼻咽鳞癌细胞CNE1/R PECAM-1的真核表达载体,为下一步建立人鼻咽鳞癌PECAM1基因过表达细胞系奠定了基础。

鼻咽癌早期诊断的现状及进展

鼻咽癌是我国南部和东南亚地区常见的癌症之一,严重影响人类的健康。由于鼻咽部位较深且位置隐蔽,以致鼻咽癌早期症状和体征不明显,容易漏诊、误诊,延误最佳治疗时机,因此能够早期诊断鼻咽癌,对于提高治疗效果和患者生存率非常关键。

代谢综合征的风险因素—高维生素饮食

代谢综合征的发病已呈全球流行趋势,且发病率仍逐年增加。目前人们普遍接受的观点是代谢综合征是基因与环境相互作用的结果,但二者如何作用尚不清楚。饮食因素与肥胖和Ⅱ型糖尿病(T2D)发病密切相关。最近研究显示,全球肥胖和T2D的快速流行与滥用维生素强化及富含B族维生素的肉食摄入增加有关。加之现代人体力活动减少,经汗排泄多余维生素及毒物的途径明显受限。体内维生素过多引起物质和能量代谢紊乱。越来越多的证据显示,代谢综合征形成的主要因素之一是由于长期高维生素饮食和(或)经汗排出减少的综合结果。针对目前的高能量和高维生素饮食,降低维生素摄入和增加其排出可能是预防代谢综合征的关键措施。

人丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用的研究进展

丝氨酸蛋白酶抑制因子在不同的生命活动调节中均具有重要意义,可调节凝血(血栓形成和血栓溶解)、血管再生、神经生长、激素转运、血压、补体和炎症。不同的丝氨酸蛋白酶抑制因子与对应的不同恶性肿瘤的进展和缓解有一定关联,使之在肿瘤治疗和诊断中具有一定意义。开展对丝氨酸蛋白酶抑制因子介导抗肿瘤活性的疗效和机制的进一步研究,有望发展成为肿瘤治疗的新方法。

人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用研究进展

围绕人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子的结构、主要成员及其抗肿瘤作用做一综述。Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子在机体内发挥重要的生理作用,具有广泛的研究和应用价值。它们在各种肿瘤中有着或高或低的表达,与肿瘤发生、发展相关,可能成为肿瘤治疗的新标靶。

siRNA干扰血小板内皮细胞黏附因子-1表达对人鼻咽癌耐药细胞CNE1/R多药耐药性的影响

目的探讨抑制血小板内皮细胞黏附因子-1(PECAM-1)表达对多药耐药基因1(MDR-1)及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)的影响。方法设计并化学合成针对PECAM-1的三条siRNA序列,命名为si-PECAM1,2,3,脂质体转染法将其转入CNE1/R,采用Semi-qRT-PCR、Westernblot方法检测并筛选出抑制效果最好的si-PECAM序列,将筛选出的si-PECAM转入CNE1/R,采用Semi-qRT-PCR、Western blot方法检测抑制PECAM-1表达前后MDR-1及其编码产物P-gp的变化情况。结果 Semi-qRT-PCR的结果显示,设计三条si-PECAM序列均有效,以si-PECAM3干扰效果最明显(P<0.001),Western blot结果显示与Semi-qRT-PCR的结果一致;转染si-PECAM348h后做Semi-qRT-PCR的结果显示抑制PECAM-1表达后MDR-1表达明显下调(P<0.001),Western blot结果与Semi-qRT-PCR的结果一致,抑制PECAM-1表达后MDR-1编码产物P-gp的表达也明显下调(P<0.001)。结论抑制CNE1/R中PECAM-1表达后MDR-1及其编码产物P-gp的表达均明显下调,提示PECAM-1可能参与X射线辐射诱导人鼻咽癌细胞发生多药耐药。

人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor的基因克隆与序列分析

目的:克隆得到人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因,并应用生物信息学方法进行序列分析。方法:提取HepG2细胞总RNA,RT-PCR扩增Hespintor基因片段,连接至pMD 20-T克隆载体中,转化JM109宿主菌,蓝白斑法筛选阳性克隆菌落,菌落PCR及测序鉴定。利用在线工具软件对Hespintor进行信号肽预测、亚细胞定位、结构域、三级结构、基因染色体定位及组织分布表达分析。结果:人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因全长285bp,共编码94aa,其中1-23aa编码信号肽,符合亚细胞定位于细胞外的预测;53-93aa编码一个典型的Kazal结构域。Hespintor基因的染色体定位于5号染色体短臂3区3带1亚带(5q33.1);正常组织中仅在睾丸有表达,而肿瘤组织中仅在生殖细胞瘤有表达。结论:Hespintor是一个在机体中静止表达的Ka-zal型丝氨酸蛋白酶抑制因子家族的分泌型新成员。

Kazal型人类丝氨酸蛋白酶抑制因子研究现状

在肿瘤的生长、血管生成以及浸润和转移过程中，除了生长因子与抑癌基因突变、细胞周期改变等上游机制的参与外，蛋白酶扮演了最终共同途径的角色，并且在功能性或病理性组织重建过程中起到重要的作用。大量实验证明，

应用ERIC-PCR技术分析多药耐药肺炎克雷伯菌的基因分型

目的分析多药耐药肺炎克雷伯菌的肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)基因分型,为临床诊断和防治肺炎克雷伯菌感染提供依据。方法先利用纸片扩散法检测18株临床分离的肺炎克雷伯菌对17种抗菌药物的耐药性并获得耐药谱型;再利用ERIC-PCR获得18株肺炎克雷伯菌DNA指纹图谱,通过非加权配对聚类分析(UPGMA)法构建分子进化树;最后探讨肺炎克雷伯菌ERIC-PCR基因型与其耐药性及耐药谱之间的关系。结果 18株肺炎克雷伯菌对17种抗生素呈不同程度耐药,对亚胺培南敏感性达100%。18株肺炎克雷伯菌对17种抗生素呈现12种耐药模式,并可分为9种基因型。结论肺炎克雷伯菌耐药性及耐药谱与特定的ERIC-PCR基因型之间存在较高程度的关联。

乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的表达、纯化与初步鉴定

目的构建HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中表达,并对融合蛋白进行纯化。方法利用逆转录-PCR获得乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶(Polymerase)反式调节人类新基因HBVD-NAPTP1,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌进行诱导,并利用组氨酸亲和层析方法对融合蛋白进行纯化。结果 HBVDNAPTP1原核表达载体转化宿主菌后,经0.5 mmol/L IPTG、30℃诱导5 h获得了分子量约为31 kD的HBVDNAPTP1融合蛋白的优化表达,Western blotting证实融合蛋白的特异性。亲和层析纯化后得到较纯的HBVDNAPTP1融合蛋白,每升培养菌液中可获得2.24 mg的纯化蛋白。结论成功获得纯化的HBVDNAPTP1融合蛋白,为今后开展HBVDNAPTP1的生物学功能研究奠定了物质基础。

大鼠烟酰胺超载与氧化应激相关分子水平的关系

目的观察烟酰胺超载与氧化应激之间的关系,以确定烟酰胺在机体氧化性损伤中扮演的重要角色。方法利用长期大鼠高烟酰胺喂养模型,结合Real time PCR和Western blot方法,研究烟酰胺超载对氧化应激相关分子水平的影响。结果在烟酰胺的作用下,NNMT、DNMT1、PARP1、Catalase及P53的表达水平呈现剂量依赖性的提高;同型半胱氨酸代谢酶BHMT、CBS与MTR出现了显著的表达补偿机制;INS1的表达受烟酰胺的影响较小。结论烟酰胺超载会触发氧化应激,这种改变可能全面并直接参与代谢综合征及其临床结局的形成和发展。