重构猪SLA-I单链复合体及其口蹄疫病毒VP1蛋白限制性表位的筛选

目前,没有研究猪SLA-I类复合体限制性表位的系统.为了构建猪的SLA-I类复合体,研究其相应重要病毒的限制性表位,亚克隆猪主要组织相容性复合体重链基因SLA-2胞外区和轻链基因β2m成熟肽区,利用一富含甘氨酸和丝氨酸的Linker(G4S)3连接两个基因,通过SOEPCR体外构建了猪可溶性的单链复合体SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],计算机方法设计3类口蹄疫病毒VP1蛋白的T细胞表位,经化学合成,分别命名为PepⅠ(FMDV/VP126—34)、PepⅡ(FMDV/VP1157—165)和PepⅢ(FMDV/VP145—53),用以结合单链复合体蛋白SC-SLA-I.酸洗脱结合质谱法测定SC-SLA-I结合表位,同时设定非相关蛋白和多肽的对照试验.结果显示,Pep Ⅰ和Pep Ⅱ均能和SC-SLA-I结合,而Pep Ⅲ及非相关多肽不能结合,对照蛋白MBP的肽结合试验显示阴性.结果表明,多肽Pep Ⅰ和Pep Ⅱ属于SLA-I类限制性表位.

氧固醇诱导巨噬细胞J774A.1的凋亡依赖于NF-κB的活化

目的:探讨7-酮基胆固醇(7-KC)作用小鼠巨噬细胞J774A.1后,NF-κB的活化与细胞凋亡的关系。方法:细胞经7-KC处理后,通过形态学观察,MTT检测法,DNA电泳,流式细胞术检测细胞凋亡水平。用Westernblot和免疫组织化学方法检测NF-κB活化情况,采用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制实验检测NF-κB活化对7-KC诱导的细胞凋亡的影响。结果:7-KC能抑制小鼠巨噬细胞的生长并促进细胞凋亡,同时能诱导小鼠巨噬细胞NF-κB的活化,且NF-κB特异性抑制剂PDTC能显著抑制7-KC诱导的细胞凋亡。结论:7-KC能通过活化NF-κB途径诱导巨噬细胞发生凋亡。