DTX2通过Notch2/Akt轴促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨DTX2对结直肠癌(CRC)细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组(DTX2-shRNA)、敲低空载组(neg-shRNA)、未转染组(con)、过表达空载组(pcDNA)及过表达组(pcDNA-DTX2),利用qRTPCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测DTX2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响,并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-DTX2和Notch2 siRNA,检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果CRC细胞中DTX2 mRNA和蛋白表达量,敲低组中明显降低(P<0.01),过表达组中明显升高(P<0.01)。划痕和Transwell侵袭实验提示,CRC细胞迁移侵袭能力,DTX2 shRNA显著低于con和neg-shRNA(P<0.01);pcDNA-DTX2显著高于con和pcDNA(P<0.01)。Western blotting检测提示,Notch2、NICD、p-Akt及MMP-2蛋白平均表达水平,与con和neg-shRNA相比,DTX2 shRNA明显降低(P<0.05);与con和pcDNA相比,pcDNA-DTX2明显升高(P<0.05),而这些蛋白在con、neg-shRNA及pcDNA间的平均表达水平无明显差异(P>0.05)。回复实验提示,siRNA-Notch2可扭转pcDNA-DTX2增强的CRC细胞迁移侵袭的能力(P<0.01),相应蛋白水平的变化也具有统计学意义。结论DTX2通过Notch2/Akt轴促进CRC细胞迁移侵袭的能力,DTX2可能成为CRC的新型生物学指标。

显微镜辅助下精准切除术在裸鼠非局部晚期结肠癌中的应用

目的探讨显微镜辅助下结肠区段切除术(MALC)在裸鼠非局部晚期结肠癌(NLACC)模型中的技术可行性和肿瘤学安全性。方法利用已被荧光素酶标记的鼠源性CT-26结直肠癌细胞株建立BALB/c裸鼠NLACC模型。1周后,将NLACC模型随机分成MALC组和假手术组(每组10只),MALC组施行显微镜下结肠区段切除术,而假手术组在显微镜辅助下仅进行开关腹手术(MAOCS)。模型制作后,定期用小动物活体成像系统(IVIS)监测模型体内肿瘤细胞的行为学变化。术后第3周处死所有裸鼠,比较两组模型建模情况和评估手术的近期疗效。结果BALB/c裸鼠NLACC模型制作的成功率为100%(20/20)。两组裸鼠术中无1例死亡。术后MALC组的裸鼠无结肠原位肿瘤的复发,而假手术组结肠原位肿瘤的质量和体积呈进行性增长趋势。除此之外,MALC组在血性腹水(0 vs 40%)、局部侵袭(0 vs 100%)、肠梗阻(0 vs 100%)、淋巴结转移(0 vs 10%)发生率上均明显低于假手术组(P<0.05)。影像学分析提示,MALC组裸鼠体内的肿瘤细胞的生物发光信号即ROI值(region of interest value)显著低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MALC模型在技术层面上可行,且其在裸鼠NLACC中的近期肿瘤学行为上安全可靠,但其远期肿瘤学行为仍有待于进一步研究。