754例Ⅰ期-Ⅲa期可手术切除非小细胞肺癌患者EGFR和KRAS基因突变状态及其临床意义

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和KRAS基因是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)重要的分子靶点,但目前研究主要集中在晚期NSCLC组织和血浆标本的EGFR检测,早期NSCLC组织样本中EGFR和KRAS突变特征尚不清楚。本研究将探讨I期-IIIa期NSCLC EGFR和KRAS基因突变与相关临床病理特征的关系。方法采用突变扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)PCR方法检测北京协和医院病理科提供的754例I期-IIIa期NSCLC组织样本的EGFR和KRAS基因突变状况,分析基因突变率及其与临床病理特征的关系。结果 EGFR和KRAS基因热点突变的突变率分别为34.5%和13.1%,其中有3例样本具有EGFR和KRAS基因的双突变。EGFR基因在女性中的突变率高于男性(39.5%vs 29.4%,P=0.076),在腺癌中的突变率(38.7%)高于鳞癌、腺鳞癌、大细胞癌(P<0.01),但仍明显低于其他研究报道的亚裔晚期腺癌突变率(-50%)。KRAS基因突变在男性中的突变率高于女性(16.6%vs 9%,P=0.048),且在腺癌中的突变率也高于其他类型,但差异不显著(P=0.268)。与KRAS基因突变阳性组相比,EGFR基因突变阳性组在年龄分布上有年轻化的趋势(P=0.031,5),在性别分布上有显著性差异(P<0.01)。结论 I期-IIIa期NSCLC EGFR基因突变率较晚期患者低,且EGFR和KRAS基因双突变的发生率为0.9%。

辽西奶牛乳房炎优势病原菌的分离鉴定及药敏试验

采集辽西地区5个城市的临床型奶牛乳房炎奶样89份,采用形态学观察和基因分析法进行了细菌的分离鉴定,结果显示优势病原菌依次为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌。应用生物梅里埃药敏试剂盒测定所分离的乳房炎主要病原菌对常用抗生素的药物敏感性,结果表明金黄色葡萄球菌敏感率较高的药物有米诺环素、呋喃妥因、喹奴普汀、克林霉素,而耐药率较高的药物有青霉素、苯唑西林、万古霉素、红霉素;大肠杆菌敏感率较高的药物有头孢西丁、替卡西林,而耐药率较高的药物依次为阿莫西林、头孢噻吩、环丙沙星、复方新诺明;无乳链球菌对氨苄西林、万古霉素、利福平、替考拉宁敏感率高达100%,四环素、链霉素次之,而对青霉素、环丙沙星耐药率较高;依据上述结果,青霉素和环丙沙星应为临床治疗奶牛乳房炎的淘汰药物。该结果为针对辽西地区防治奶牛乳房炎采取科学合理的防治措施提供了可靠依据。

BCR-ABL融合基因检测试剂盒质控品的建立

目的:建立BCR-ABL融合基因质控品,评价人类BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能。方法:根据人类BCR-ABL e1a2和e14a2型融合基因m RNA序列,设计覆盖断裂点序列,合成目的融合基因序列。用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ对含有目的融合基因的质粒和表达载体进行酶切,连接酶切产物。将连接产物转化DH5α感受态细胞,筛选单个阳性菌落进行验证。将正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液。用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测。结果:PCR结果和测序结果表明成功构建人类BCR-ABL融合基因e1a2和e14a2型假病毒质粒;荧光RT-PCR结果表明构建的e1a2和e14a2型假病毒质粒能够表达目的 RNA,并且能被市售试剂盒正确检出,可以作为RNA质控品。结论:本研究建立人类BCR-ABL融合基因RNA质控品,用于评价BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能,为BCR-ABL融合基因相关白血病的临床诊断及靶向治疗提供指导。