鲜切果蔬中4种病原微生物多重PCR检测技术

研发可同时检测鲜切果蔬中的单核细胞性李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157:H7的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。根据单核细胞性李斯特菌inl A基因、鼠伤寒沙门菌inv A基因、大肠杆菌O157:H7 wzy基因、金黄色葡萄球菌nuc基因设计及筛选出4对引物。对多重PCR体系及条件进行优化。该方法对单核细胞性李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157:H7的检出限分别为3.5×10~6、1.6×10~5、2.4×10~5、4.8×10~5 CFU/m L。将优化的多重PCR方法对不同接种量富集后验证,结果表明,经过9 h富集后,该方法检出限为1 CFU/m L。该方法在鲜切莴苣、鲜切黄瓜、鲜切木瓜、鲜切哈密瓜中应用同样可扩增出4条目标菌。因此,利用所建立的多重PCR方法对鲜切果蔬中侵染的病原菌检出限可达到1 CFU/g。该方法相较于传统的培养检测方法具有节约大量的劳力、试剂、时间等优点,检测时间也由原来的5~7 d缩短至9~11 h,对于企业或分析检验中心大批量样品的监测具有指导意义。

1-甲基环丙烯缓释贴纸对模拟运输期间完熟期番茄果实品质的影响

完熟期番茄果实的成熟度高,生理代谢旺盛,不耐贮运。为了减轻高成熟度番茄果实运输过程中的损耗问题,将果实装入纸箱或泡沫箱,并添加1-甲基环丙烯(1-methylcyclopropene,1-MCP)缓释贴纸作为处理,于(30±5)℃条件下进行3 d的模拟运输试验(包含2 h的模拟振动)。以番茄果实的生理代谢、采后品质和相关酶活性为评价指标,分析1-MCP缓释贴纸和包装材料对番茄果实模拟运输期间品质的影响。结果表明,随着模拟运输时间延长,果实品质劣变加剧,包括硬度下降,形成瘀伤、伤呼吸、伤乙烯以及色泽变化。1-MCP缓释贴纸能降低果实的损伤指数、呼吸强度、乙烯生成速率、红色指数a^(*)、丙二醛含量和脂氧合酶活力,保持较高的硬度、亮度L^(*)、抗坏血酸含量,并诱导过氧化物酶和过氧化氢酶活力。此外,主成分分析表明纸箱包装更适合于贮藏环节,泡沫箱包装更适合于运输环节。综上,使用1-MCP缓释贴纸处理以及泡沫箱外包装可以更好地维持完熟期番茄果实运输期间的采后品质,为高成熟度番茄果实的物流配送及品质调控提供了技术参考。

不同预冷方式对甜樱桃模拟物流运输过程中品质的影响

为探究不同预冷方式对甜樱桃模拟物流运输过程中品质的影响,以‘砂蜜豆’和‘8-102’樱桃为试验材料,采用压差预冷和冷库预冷2种预冷方式,预冷后于常温下贮藏96h,模拟物流运输,测定其色差、可溶性蛋白质、花色苷含量以及抗氧化酶活性等多项指标。结果表明,在模拟物流运输贮藏72h内,冷库预冷可以有效维持‘砂蜜豆’甜樱桃的采后品质,但‘8-102’甜樱桃进行压差预冷处理的果实可保持良好状态。由此说明应针对不同品种的果实选择适当的预冷或不预冷方式,才能真正维持果实品质。

光电杀菌技术在鲜切果蔬保鲜中应用的研究进展

鲜切果蔬由于其营养、方便、安全等优点受到广大消费者的喜爱,然而果蔬鲜切后会引发微生物污染、组织软化、褐变和货架期缩短等一系列问题。为了使鲜切果蔬行业得到进一步的发展,对其保鲜技术的研究十分迫切。光电杀菌技术因其绿色安全、成本低廉、操作简单等优势而受到关注。本文主要针对光电杀菌技术中的紫外线、脉冲光、高压脉冲电场和发光二极管处理在鲜切果蔬保鲜中的杀菌机理、杀菌效果及产品品质的影响等进行论述,并对其目前在鲜切果蔬保鲜方面的研究进展进行了总结,以期为光电杀菌技术在鲜切果蔬保鲜中的应用提供参考。

甜樱桃采后病害、贮藏期间品质变化及其防腐保鲜技术

本文详述了甜樱桃在采后发生侵染性病害和生理性病害的原因、发病症状以及对果实产生危害的结果。并介绍了甜樱桃在不同温度贮藏期间感官品质及营养物质变化,针对樱桃自身特性和采后病害分析结果,对现有的适用于樱桃的保鲜技术进行分类总结。最后,总结了目前制约樱桃产业发展的主要问题,并对此提出对策。

蜂房哈夫尼亚菌对粘质沙雷氏菌群体感应信号分子产生与生物被膜形成的调控

以腐败海鲈鱼中分离得到的2?株有群体感应现象的细菌为研究对象,经16S rRNA分子生物学鉴定其为蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei),命名为H. alvei-14;粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)产灵红素,命名为S.marcescens-01。研究不同培养条件下H.alvei-14与S.marcescens-01共培养后其信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl homoscrinc lactones,AHLs)分泌量和生物被膜产生量。结果表明:与H. alvei-14共培养能促进S.marcescens-01分泌AHLs和生物被膜的形成,这种影响可能与菌群间群体感应有关。环境条件的改变是影响细菌分泌AHLs和生物被膜形成的重要影响因子,较高盐浓度、pH值过低或过高均不利于微生物分泌AHLs和生物被膜形成,而限制性碳源及氮源等胁迫环境均可以刺激菌体群体感应系统,促进AHLs的释放和生物被膜的形成。

水产品中人鱼共患细菌性病原分子生物学检测方法研究进展

水产行业是国民经济重要产业之一,水产养殖过程中病原微生物造成鱼类病害频发,人鱼共患病原菌会对人类健康构成威胁,水产品安全问题日益突出。人鱼共患病原菌检测方法对于病害的发现、预防及水产行业的健康可持续发展具有重要意义。人鱼共患病原菌包括人鱼共患细菌性病原和人鱼共患寄生虫病原等。本文对水产品中常见的人鱼共患细菌性病原的种类及其危害性、细菌性病原分子生物学检测方法的原理和应用及成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)基因编辑技术在病原菌检测方面的最新研究进展进行了综述,为研发易携带且简便快速的新型核酸检测方法及产品及水产品中人鱼共患病原菌的检测和防治提供参考和借鉴。

脂质体递药系统的靶向修饰

作为药物递送载体,脂质体(LPs)由于免疫原性低、稳定性好、毒性低和成本低而被认为是有前途的纳米药物递送系统。然而,LPs的靶向递送效果并不理想,往往会对正常的机体细胞造成伤害,因此,如何优化LPs药物,使其具有靶向性仍然是当前研究的重点。本文结合近年来国内外相关研究进展,重点介绍了多肽、抗体、糖类、配体,以及核酸适配体等靶向修饰物对LPs功能的影响,并归纳总结了各种靶向修饰目前存在的优势与挑战,以期对LPs给药系统的进一步研究提供科学参考及新药研发提供理论依据。

基于荧光及可视化逆转录环介导等温扩增检测食源性甲型肝炎病毒的方法开发

目的基于荧光及可视化逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)开发食源性甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的检测方法。方法从美国国家生物技术信息中心中选取世界范围内具有代表性的HAV基因信息,设计LAMP引物,开发了一种荧光曲线RT-LAMP和可视化RT-LAMP检测方法。以HAV质粒为模板,评估方法的扩增效率、灵敏度和稳健性,并与实时荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)进行检出限及实际样品验证比较。结果荧光及可视化LAMP方法检测灵敏度为10.76copies/μL,与实时荧光RT-PCR一致;在95%置信水平下经概率回归分析检出限(limitofdetection,LOD_(95%)),荧光曲线RT-LAMP的LOD_(95%)为17.46copies/μL(7.00~511.29 copies/μL,95%),实时荧光RT-PCR的LOD_(95%)为79.30copies/μL(24.68~3208.71copies/μL,95%);稳健性分析表明方法稳定;与实时荧光RT-PCR比较,检测30份实际样品的验证比对符合率为100%。结论该检测方法经济便捷,可通过肉眼直接观察结果,适合于食品安全现场监测,具有很好的应用前景。

种子粉基体黄瓜绿斑驳花叶病毒标准样品研制及应用

基于国内黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)标准样品缺失的问题,以自然感染CGMMV的西葫芦种子批为原料,经特异性鉴定确认后,制备了西葫芦种子粉基体CGMMV标准样品,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法和实时荧光定量RT-PCR法对其进行确证。结果表明所制备的标准样品性能稳定,经国内8家实验室对样品进行协同定值后,再经Shapiro-Wilk检验均符合正态分布。此外,采用Grubb’s法检验进一步证实该种子粉基体标准样品中含有CGMMV。以上结果表明,该基体标准样品达到了国家标准样品的技术要求,或可用于实验室质量控制及能力验证、检测方法验证等活动。

Akt在中华绒螯蟹免疫中的功能

Akt作为PI3K-AKT信号通路的核心分子,在细胞增殖、代谢、发育和存活等过程中发挥重要作用。本研究采用特异性引物及PCR技术,克隆获得了中华绒螯蟹Akt基因(EsAkt)并进行生物信息学分析,实时定量PCR技术检测了EsAkt在中华绒螯蟹不同组织和不同免疫刺激后的表达水平,免疫荧光技术检测了EsAkt蛋白的细胞定位,双链RNA干扰技术分析了EsAkt干扰后凋亡基因的变化。结果显示,EsAkt分子包含PH结构域、中心催化结构域(S_TKc)和羧基端疏水结构域(S_TK_X)3个保守的结构域。EsAkt在所有被检测的组织中呈现组成型表达,且在免疫相关组织(如肝胰腺、鳃和血淋巴细胞)中的表达量显着高于胃和肠道。EsAkt蛋白主要以弥散状的形式分布在细胞质中。中华绒螯蟹注射脂多糖(LPS)和嗜水气单胞菌后,显著诱导EsAkt转录本的表达,LPS免疫刺激12 h后,EsAkt响应达到峰值,为对照组的4.35倍,刺激48 h后,EsAkt的mRNA表达水平有所降低,但仍是对照组2.62倍。嗜水气单胞菌免疫刺激6 h后,EsAkt响应达到峰值,为对照组的9.05倍,刺激48 h后,EsAkt的mRNA表达量回落到正常水平。双链RNA干扰EsAkt后,EsAkt的mRNA表达量为对照组的0.38倍,而凋亡相关基因EsCaspase-3-like表达水平显著上调,为对照组的2.69倍。研究表明,EsAkt基因在中华绒螯蟹免疫中发挥重要作用,参与了机体对细菌引起的免疫应激过程。本研究丰富了中华绒螯蟹PI3K-AKT信号通路研究的基本资料,为进一步研究甲壳动物免疫防御机制奠定了基础。

基于Cycling探针的实时荧光聚合酶链式反应检测河鲀鱼中掺杂的横纹东方鲀成分

目的开发基于Cycling探针实时荧光聚合酶链式反应(real-time fluorescent polymerase chain reaction,RT-PCR)用于检测河鲀鱼中横纹东方鲀(Takifugu oblongus,T.oblongus)成分。方法基于细胞色素C氧化酶亚型I(cytochrome C oxidase subunit I,COI)基因为靶标设计RT-PCR引物及Cycling探针,开发横纹东方鲀成分检测方法,评价方法的特异性、扩增效率、灵敏度和稳定性。结果横纹东方鲀成分与密切相关的其他8种河鲀鱼、4种其他鱼类物种DNA无交叉反应,具有很好的特异性;方法扩增效率为93.47%;方法重复18次均给出阳性报告的最小稀释点(limitofdetection6,LOD6)为14.64pg/μL(相对应的质量含量为0.1%),95%置信水平条件下检出限为34.41 pg/μL(11.59~119.05 pg/μL,LOD_(95%)),稳定性分析(P=0.152)表明该方法可转移到其他实验室以及在常规分析中使用。结论本研究开发的Cycling探针RT-PCR方法可对河鲀鱼食品中掺杂0.1%的横纹东方鲀成分进行可靠追溯。

基于榛子过敏原2S albumin基因的实时荧光聚合酶链式反应检测方法开发

目的开发一种基于2Salbumin基因的实时荧光聚合酶链式反应检测方法(real-timefluorescent polymerase chain reaction,qPCR)用于检测食品中的榛子成分。方法从美国国家生物技术信息中心数据库中检索并选取具有高特异性的榛子2S albumin基因序列的DNA片段进行引物探针设计,建立一种新的用于检测微量榛子成分的实时荧光PCR方法,并对建立的方法的特异性、扩增效率、检出限和稳健性进行验证。结果本方法对检测目标呈现出高特异性,与其余12种非目标样品无交叉反应。扩增效率为99.42%,相关系数r2为0.9941,两者均符合实时荧光PCR方法验证指南要求。该方法检出限(limit of detection,LOD)为每个反应5拷贝(2.5copies/μL),可检测出食品中含有的微量榛子成分。使用正交实验设计评估该方法具有很好的稳健性(P=0.07),可转移到其他实验室及常规分析中使用。结论基于2S albumin基因组分的qPCR检测方法可用于识别食品中潜在的榛子成分,对于预防榛子过敏及开发减敏脱敏榛子食品研究具有很好的技术支撑。

水产品中哈维氏弧菌等温快速检测方法优化及比较

目的 基于核酸等温扩增技术,建立荧光法、可视化环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)和重组酶聚合酶扩增(recombinasepolymeraseamplification,RPA)快速检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的分析方法,并对方法进行优化和比较。方法 选择哈维氏弧菌toxR基因为特异靶标序列,分别设计了2组LAMP引物、3组RPA引物,对方法进行筛选。优化建立了荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA3种等温扩增方法,对3种方法的特异性和灵敏度进行比较,并用模拟污染样本验证检测实际样品的灵敏度。结果 基于快速提取的哈维氏弧菌基因组DNA,本研究所建立的荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA 3种等温扩增方法均具有良好的特异性,与同属及近属的细菌没有交叉反应。3种方法的灵敏度分别为5.27 fg/μL (1.99 fg/μL~0.93 pg/μL, 95%置信区间)、0.11 ng/μL、1.07 pg/μL;荧光LAMP和普通RPA对模拟污染样本的灵敏度分别为7 CFU/mL和97 CFU/mL。结论 本研究建立优化的3种等温快速检测方法结果准确、操作简单,扩增效率和灵敏度优于文献报道的同类方法,提高了哈维氏弧菌现场快速检测水平。

壳寡糖对中华绒螯蟹非特异性免疫的影响

为了研究免疫增强剂壳寡糖对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)非特异性免疫的影响及机制,实验选用45只(20±2)g附肢完整、个体均匀、健康的中华绒螯蟹,随机分为3组,每组15只,分别注射浓度为0(对照组)、50、200μg·mL^(-1)的壳寡糖0.1 mL,24 h后收集血清和血淋巴细胞,分析免疫酶活力和免疫基因的变化。结果显示,与对照组相比,壳寡糖显著提高了中华绒螯蟹血清中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和溶菌酶的活性,并且显著增加了血清中一氧化氮的含量,降低了血清中丙二醛的含量。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,壳寡糖显著增强了Toll信号通路中EsToll1、EsToll2、EsMyD88、EsTube、EsPelle和EsDorsal的表达,上调抗脂多糖因子EsALF和EsALF3的表达。研究表明,壳寡糖能够提高中华绒螯蟹非特异性免疫和抗氧化能力,开启Toll信号通路,促进抗脂多糖因子的表达。本研究为壳寡糖在中华绒螯蟹中的应用提供理论支撑。

基于《科技文献检索与写作》课程聚焦领域专题前沿问题提升学位论文质量

为充分检验学生当前的学习质量,采用学位论文写作的方法,帮助学生完成对阶段性学习情况的总结。对于《科技文献检索与写作》相关课程而言,通常需要在领域专题前沿问题方面有所聚焦,着重探讨能够有效提升学生学位论文质量的相关对策,致力于培养学生的综合能力,使学生逐渐养成良好的创新精神,以便实现当前的人才培养目标。将学生的学位论文作为认证最终学位资格的关键依据,能够形成对当前教学水平的有效衡量。本文立足于《科技文献检索与写作》课题中的专题前沿问题,探讨能够提升学生学位论文质量的相关对策,全面加强学生的论文写作能力,以供参考。

汉黄芩素和汉黄芩苷对UGT1A1体外抑制活性的比较研究

目的:考察人体尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)的活性受汉黄芩素和汉黄芩苷抑制作用的强弱,并通过体内-体外外推(IV-IVE)方法对汉黄芩素在人体内引发草物-药物相互作用(HDI)的风险进行预测。方法:以混合人肝微粒体(HLMs)及重组表达UGT1A1作为酶源,UGT1A1酶的特异性荧光探针N-3-羧丙基-4-羟基-1,8-萘酰亚胺(NCHN)为底物,对人体UGT1A1酶受汉黄芩素和汉黄芩苷的抑制作用进行评估。通过非线性拟合优度R 2判断出抑制类型,求出半数最大抑制浓度IC 50和抑制动力学常数K i,并对汉黄芩素在人体内引发HDI的风险进行预测。结果:汉黄芩素对UGT1A1催化NCHN-O-葡萄糖醛酸化的抑制作用较为强烈,抑制类型为非竞争性抑制,求得的IC 50和K i值分别为2.53μmol·L^-1和1.60μmol·L^-1,而汉黄芩苷对UGT1A1活性的抑制能力较弱。此外,体外-体内外推(IV-IVE)方法的预测结果表明口服汉黄芩素可引起UGT1A1底物血浆药时曲线下面积增加6.6%~59.6%。结论:汉黄芩素有可能通过抑制UGT1A1的活性引发临床不良HDI的发生,为合理使用含汉黄芩素和汉黄芩苷的中草药与临床药物提供了理论指导。

LED白光处理对采后油麦菜品质的影响

目的研究低强度LED白光处理对采后油麦菜品质的影响。方法采用光照强度为5μmol/(m^2·s)的LED白光于(20±1)℃下持续照射油麦菜7 d,以黑暗条件下贮藏的样品为对照,测定贮藏期间样品的感官评分、腐烂率、呼吸强度,叶绿素、维生素C、总酚及丙二醛(MDA)含量,多酚氧化酶(PPO)、过氧化氢酶(CAT)、叶绿素降解酶(叶绿素酶、脱镁鳌合酶、叶绿素过氧化物酶、脱镁叶绿素酶)活性的变化。结果与对照组相比,在贮藏期间,LED处理可有效维持油麦菜的感官品质,抑制其呼吸强度和MDA含量的上升,维持叶绿素、维生素C及总酚含量,提高抗氧化酶活性,并降低叶绿素降解酶的活性。结论 LED处理可通过抑制采后油麦菜的呼吸强度和叶绿素降解速率,维持非酶抗氧化物质含量和抗氧化酶活性,保持细胞膜完整性,从而延缓其采后衰老,并保持其较好的感官和营养品质。

新型阳离子脂质体制备及应用研究

阳离子脂质体是目前使用最广泛的脂质体之一,作为载药系统,已被广泛应用于临床诊断和治疗。作为纳米型载体,它既可以包载基因/药物,也可以包载诊断试剂,还可以两者同时包载。将阳离子脂质体应用于医药,既可以提高药物的体内稳定性,有利于药物在体内的长循环;又可以缓释药物,延缓肾代谢,降低药物的毒副作用。本文检索了近年来国内外关于阳离子脂质体制备研究的相关文献,分析和归纳了包括固醇衍生物阳离子脂质体、氨基酸/多肽阳离子脂质体以及含糖阳离子脂质体等多种类型的新型阳离子脂质体的制备和应用研究,以便为将来的深入研究提供参考和借鉴。

大孔吸附树脂富集纯化玳玳花总黄酮

目的通过大孔吸附树脂富集纯化玳玳花总黄酮。方法静态吸附实验考察NKA-9、HPD100、HPD400、HPD600、AB-8、D101、X-5、DM301大孔吸附树脂对总黄酮的吸附、解吸能力,通过吸附动力学、热力学探讨吸附机理,在采用动态吸附、解吸实验优化富集纯化工艺。结果AB-8大孔吸附树脂吸附、解吸能力最佳,吸附过程符合拟二级动力学、Langmuir模型,ΔH<0,ΔG<0,ΔS>0。最佳纯化工艺为上样液质量浓度4.90 mg/mL,上样体积流量2 BV/h,上样量7 BV,洗脱剂70%乙醇,洗脱体积流量3 BV/h,洗脱剂用量6 BV,总黄酮纯度从9.87%提高至36.75%,回收率为83.17%。结论AB-8大孔吸附树脂可有效富集纯化玳玳花总黄酮。