阳离子脂质体转染Hela细胞的实验

背景:基因载体是基因治疗中重要的影响因素,阳离子脂质体细胞毒性低,转染效率高,是一种很有前景的基因转染载体。目的:评价两种阳离子脂质体介导基因转染宫颈癌细胞的转染效果,优化它们对宫颈癌细胞的转染条件。设计、时间及地点:以Hela细胞为观察对象,分组设计。实验于2008-03/06在大连民族学院生命科学学院国家民委-教育部重点实验室完成。材料:质粒pGFP-N2购自Clontech公司,Hela细胞由大连民族学院的实验室保存。方法:首先采用DNA延滞实验考察阳离子脂质体与DNA的结合能力,然后用进行细胞转染实验研究脂质体的转染效率,最后通过四甲基偶氮唑盐法考察脂质体对细胞的毒性。主要观察指标:采用DNA延滞实验观察阳离子脂质体Lipofectamine2000和DOTAP与DNA的结合能力,以报告基因(绿色荧光蛋白基因pGFP-N2),分析阳离子脂质体Lipofectamine2000和DOTAP转染Hela细胞转染效率和细胞毒性。结果:Lipofectamine2000和DOTAP与DNA均有很强的结合力;以绿色荧光蛋白基因为报告基因,Lipofectamine2000转染率较高;当Lipofectamine2000与DNA质量比为3∶1时,转染效率最高,约72%,是DOTAP转染细胞最高活性的2.5倍;在最佳转染剂量时,2种试剂的细胞存活率均在75%以上,Lipofectamine2000的毒性相对较小。结论:对Hela细胞而言,Lipofectamine2000较DOTAP具有更高的转染效率和较低的细胞毒性。

表面活性剂对斜生栅藻的生态毒性研究

以斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)为受试生物,采用藻类急性毒标准方法研究十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、十二烷基苯磺酸钠(LAS)和辛基苯基聚氧乙烯醚(TX-100)3种较常用的表面活性剂对藻类的生态毒性。通过斜生栅藻的密度及过氧化物酶活性的测定对其作用机制进行探讨。结果表明,在EC_(50)附近,表面活性剂浓度越大其毒性越强,不同离子型表面活性剂对斜生栅藻毒性从大到小为阳离子(CTAB)、阴离子(LAS)、非离子(TX-100)。表面活性剂毒性作用机制主要是被吸附在藻细胞的磷脂双分子膜结构表面,从而引起膜结构的破坏和功能的丧失,进而导致细胞死亡。

阳离子脂质体基因载体的细胞转染研究

研究阳离子脂质体在不同细胞中的转染效率及毒性。首先采用DNA延滞实验研究Lipofectamine2000、DOTAP转染试剂与DNA的结合能力。然后选用绿色荧光蛋白的质粒pGFP-N2作为报告基因模型和转染试剂制成复合物后转染Hela7、721、HT29细胞,比较多种因素对转染的影响。最后使用MTT比色法分析Lipofectamine2000、DOTAP转染试剂对细胞的毒性。随着复合物中转染试剂比例的增加,Lipofectamine2000、DOTAP与DNA结合能力逐渐增强。Lipofectamine2000在Hela细胞转染最高效率约72%;在7721、HT29细胞转染效率较低,DOTAP在3种细胞的转染效率都很低;在转染效率最高时2种转染试剂的细胞存活率均在90%以上。对商品化的转染试剂研究和讨论以期为阳离子类脂非病毒载体的研究提供参考。

小麦粉中神经酰胺类物质的提取及结构分析

从小麦粉中提取纯化了一种神经酰胺类物质,并对其结构进行了分析。实验以小麦粉为材料,首先用索氏提取法以95%乙醇为溶剂进行粗提,粗提物经石油醚萃取、旋转蒸发仪浓缩后,过三次硅胶柱层析提取,再经二次重结晶纯化,得到白色无定型粉末状神经酰胺类物质。使用高效液相色谱/蒸发光散射检测器(HPLC/ELSD)对其进行纯度检测,用红外光谱(IR)和质谱(MS)对其结构进行鉴定。实验结果分析表明该物质为分子量397.3,分子式C24H47NO3的神经酰胺类化合物。

油页岩残渣制备白炭黑及粒径分布规律研究

采用二氧化碳为潜伏酸化剂代替强酸,结合醋酸的高选择性分离方法,研究以油页岩制油残渣为原料,低腐蚀低能耗条件下制备高品质白炭黑的工艺方法,并揭示工艺条件对白炭黑产品的粒径分布影响规律.经X射线荧光光谱分析、红外光谱分析、X射线衍射和扫描电镜分析,对产物白炭黑进行了表征.结果表明,采用均相化学沉淀法,由残渣碱提取液硅酸钠溶液制备白炭黑的最佳工艺条件为:反应温度50℃,硅酸钠溶液浓度为0.0 274g/mL,CO2流速为20mL/min,表面活性剂聚乙二醇6 000的用量为0.007g/mL,此工艺条件下得到的白炭黑粒径最小,为20nm～30nm,经醋酸分离提纯后的白炭黑纯度为98.4%.

木醋液制融雪剂的自动化装置设计及脱色研究

采用自主设计的木醋液制融雪剂的自动化装置,重点研究了脱色系统的优化,采用膜过滤初级脱色和活性炭精制脱色两部分相结合,可大大降低活性炭用量和脱色成本,提高脱色效率。研究结果表明,优化脱色工艺为先采用膜过滤初级脱色可使吸光度值由3.0降低为1.19,脱色效率60.3%。再用活性炭精制脱色3小时,最终可得到吸光度值为0.03的浅色透明液体产品。活性炭比表面积由208.969 m2/g降低为65.001 m2/g,衰减了68.89%。

阳离子脂质体运载基因的跨膜机制

阳离子脂质体等非病毒载体以其制备简单、低毒性、低免疫原性、可生物降解等优点,成为近年来基因转运中的常用载体。理解阳离子脂质体运载基因的机制对阳离子脂质体的研究具有重要意义。从跨膜机制和信号调控的角度,介绍了脂质体/DNA复合体以特定构象避免细胞外基质中核酸酶的降解,跨越细胞膜进入细胞的过程;阐明了DNA在信号调控的作用下,逃离溶酶体并安全释放的机制;讨论了基因穿过核被膜进入到细胞核的方式,为进一步阐明阳离子脂质体运载基因的分子机制奠定基础。