植物基因工程疫苗研究进展

可口服免疫(oral immunization)绿色疫苗(green vaccine)研究是植物基因工程与分子医学相结合而发展起来的新的研究方向. 对当前植物基因工程疫苗的研究方法、疫苗的作用机理进行介绍,总结近10年来国内外植物基因工程疫苗研究进展,并对未来发展方向作出展望.

一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究

从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有强烈抗菌活性并具有较广抗菌谱的细菌Q-12菌株。通过形态观察、生理生化实验1、6S rDNA同源性序列分析以及部分特异性基因序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌的最适培养基组成为:葡萄糖5g/L,NH4Cl 1g/L,牛肉膏0.8g/L,氯化镁5g/L。最适培养温度为33℃,最适培养pH为6.0,最适培养时间为40h。

解淀粉芽孢杆菌Q-12抗真菌特性的研究

从土壤中分离到的解淀粉芽孢杆菌Q-12在生长过程中产生的抗菌活性物质,能够强烈抑制镰刀菌、曲霉、青霉、毛霉等能引起食品腐败的真菌。受到抑制的真菌菌丝生长速度明显变慢,并且菌丝的形态发生变化。Q-12的发酵液经过(NH4)2SO4沉淀得到的粗提产物对热稳定,121℃高压灭菌15 min仍能保持很高的活性,易溶于水及极性有机溶剂,经非极性有机溶剂萃取后,保留在水相的活性物质活性变化不大,在较宽的pH值范围内都具有很高的抗菌活性,并且对蛋白酶K、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶不敏感。

培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究

对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定,发现其存在较大差异.梅核品种幼叶黄酮含量最高,为3.32%,大白果品种幼叶黄酮含量最低,为0.84%;梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高,达1.26%,岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低,为0.22%.选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养,研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响.结果表明,在150mL培养瓶中装有50mL培养液,接种量为鲜质量30～40g/L,对培养细胞给予3000～4000lx的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成,以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长.HPLC检测结果显示,银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2.82%.

面向21世纪的基因工程

基因工程将是21世纪最具发展潜力的高新技术。介绍了基因工程及其在基因检测与基因治疗、生物反应器工程、蛋白质工程与代谢工程,基因组计划与生物信息学等相关领域的进展。

菌株MY02发酵培养基的优化设计

以龟裂链霉菌MY02菌株为试材,采用单因子试验与均匀试验相结合的方法,通过二次多项式回归分析,筛选出活性组分SN06最佳发酵培养基配方,并建立了多元二次回归数学模型。菌株MY02优化发酵培养基的最佳配方:淀粉质量分数为2.69%,花生饼粉质量分数为1.39%,(NH4)2SO4质量分数为0.18%,CaCO3质量分数为0.14%,NaCl质量分数为0.16%。根据回归模型计算出SN06理论效价与实测效价相比较,二者非常接近,拟合误差小。

产生多种抗真菌活性物质菌种的筛选分离和鉴定

从堆肥样品中分离出的伯克霍尔德菌(Burkholderia)CF-66株能够抑制若干植物病原霉菌和病原酵母菌,并且显示了广谱抗菌活性.这种抑制作用不需要细胞的接触或活细胞,说明抗菌活性物质应是分泌代谢到细胞外的化合物.通过生理学和生物化学检测及16SrRNA测序,清楚表明:CF-66菌株归属于洋葱伯克霍尔德菌群.以前的研究指出,洋葱伯克霍尔德菌群中的亚门(genomovar)Ⅱ、Ⅲ含有传染性的菌株,但通过species-specificPCR鉴定已证明,CF-66菌株并不属于洋葱伯克霍尔德菌群中的genomovarⅡ、Ⅲ,而归属于洋葱伯克霍尔德菌群genomovarⅤ.

16S rDNA和recA-gene对乳酸菌Ⅱ32的鉴定

对乳酸菌Ⅱ32进行了生化实验.以菌株Ⅱ32的总DNA为模板,采用细菌通用的引物,对其16S rDNA进行特异扩增,并进行序列测定,将测定结果与GenBank DNA数据库中已知菌种的16S rDNA序列通过BLAST软件进行分析比较,初步确定该菌株为戊糖乳酸菌、植物乳杆菌或类植物乳杆菌.采用recA-gene约300bp的特异扩增片段最终确定乳酸菌Ⅱ32为类植物乳杆菌.

氨基酸系列水杨醛希夫碱与四苯基卟啉结合金属离子能力之比较

合成了甘氨酸(Gly-Schiff base)、L-苯丙氨酸(L-Phe-Schiff base)及L-天冬氨酸(L-Asp-Schiff base)3种氨基酸水杨醛希夫碱(AAS)及其4种金属离子Cu2+、Fe2+、Ni2+、Zn2+配合物(MAAS),将四苯基卟啉(TPP)直接加入MAAS的氯仿溶液中,研究其紫外-可见电子吸收光谱.分析了卟啉作为信号转导体系中信号传递中间介质,实现人工细胞信号转导体系中信号传递的可能性.表明Cu2+、Ni2+能够在常温常压下被卟啉从希夫碱上夺取下来,形成金属卟啉配合物.这说明在文中所构建的人工细胞信号转导体系中,加入卟啉分子可以将信号分子Cu2+进行下一步的传递.

产色链霉菌SY20-2与龟裂链霉菌SY20-4的种间原生质体融合

利用卡那霉素（250 μg/mL）、链霉素（1 000 μg/mL）和罗红霉素（150 μg/mL）标记亲本菌株SY20-2、SY20-4,进行种间原生质体融合.试验结果表明,培养基中加入0.5%～1%甘氨酸可以提高菌丝体对溶菌酶的敏感度,有利于原生质体的释放.溶菌酶不仅影响原生质体的形成,而且影响原生质体的再生率,因此在35℃水浴条件下,SY20-2选择酶浓度2 mg/mL,作用时间30 min;SY20-4选择酶浓度4 mg/mL,作用时间40 min,最适于原生质体的再生.以45%PEG（分子量1 000）作助融剂,融合频率为0.124%,选出153个融合子,其中3株重组子的稳定性及抑菌活性较好,重组子C对烟草野火病菌的抑菌活性比对照要好.

核酸外切酶Ⅲ消化双链DNA的缺失测定

测定了 ＥＸＯ Ⅲ在单位时间内所消化双链 ＤＮＡ的碱基对数，即缺失测定．