仿刺参体壁表皮再生组织学和超微结构观察

本研究采用手术方法刮掉仿刺参(Apostichopus japonicus Selenka)体壁表皮,将受伤仿刺参放入海水中饲养,通过光学显微镜和透射电镜观察再生表皮的组织学、超微结构变化.表皮再生开始于手术后24 h,创面中央新生出表皮,结缔组织中出现扩增细胞.再生48 h,创面有新生角质层出现,上皮细胞单层.再生72 h,上皮细胞仍保持单层,角质层形成清晰可见,扩增细胞开始聚集.表皮再生96 h,角质层增厚,达到正常体壁角质层的厚度,角质层表面形成许多突起,上皮细胞达2～3层,扩增细胞聚集成细胞团,从结缔组织中迁移至表皮.再生13 d,扩增细胞团萎缩.再生19 d,组织基本恢复至正常形态,扩增细胞经分化后已均匀分布到新生表皮层,细胞团消失,上皮细胞排列有序,结缔组织结构疏松,质地均匀.

仿刺参内脏再生过程的能量代谢及生化组成变化

通过人工注射KCl(0.35mol/L)诱导仿刺参(Apostichopus japonicus)排脏,将水温控制在(18±0.5)℃条件下对其消化道和呼吸树再生过程中的能量代谢及生化组成进行了研究。结果表明,仿刺参排脏后停止了一切摄食和排粪,16d消化道打通后开始摄食。在整个再生过程中,仿刺参摄食前体质量出现了负生长现象,实验结束时体质量比对照组降低了36.74%。耗氧率和排氨率同对照组相比均有显著变化,耗氧率最低为3.29μg(O2)/(g·h),排氨率最低为0.0556μg/(g·h),再生对仿刺参身体生化组成也有显著影响(P<0.05),实验结束时蛋白质,脂肪和体能值分别减少了15.58%、22.58%和24.71%。结论认为,再生对仿刺参营养物质的利用情况的影响要高于环境因子。

利用差异显示法研究刺参表皮再生相关基因

应用mRNA差异显示法对刺参(Apostichopus japonicus)正常表皮组织和手术后再生的表皮组织的基因的差异表达进行了分析。利用经本实验室摸索改进的mRNA差异显示体系,获得了若干差异片段,将其测序结果在GenBank数据库中比对发现,其中一个差异片段与CD151基因具有较高的同源性,并且采用RT-PCR的方法对差异片段进行了验证。进一步分析表明,该基因可能与表皮的再生密切相关。

镉对中间球海胆精子发生的影响

研究了不同浓度镉离子(0.005、0.1、0.5、1.0 mg/L)对中间球海胆Strongylocentrotus interm edius精子发生的影响。结果显示:在光镜下观察,染毒第6、18 d后,各浓度组中间球海胆滤泡结构完好,生殖细胞发育情况同对照组基本一样;染毒第42 d后,0.5、1.0 mg/L Cd2+浓度组生精细胞排列混乱,滤泡膜破损;染毒第54 d后,各浓度组海胆性腺均出现滤泡解体现象。对染Cd2+54 d的0.5、1.0 mg/L组海胆精巢进行超薄切片观察,可见各级生精细胞亚显微结构变化明显,主要表现为核染色质异常凝集,核膜结构损伤,线粒体空泡化,精子形态畸形等。说明镉能影响中间球海胆的精子发生,导致精子质量下降。

仿刺参横切再生的研究

以旅顺龙王塘海区自然生长的仿刺参Apostichopus japonicus为研究材料,将仿刺参放入含0.54 mol/LMgSO4的海水中麻醉30 min,然后用手术刀从麻醉仿刺参身体的前1/3处、后1/3处和身体中间完全横切,切后放入正常海水中饲育,定期取样观察仿刺参的消化道和体壁形态学的变化。结果表明:仿刺参横切后1 h,体壁伤口便开始收缩,部分个体将体内剩余的消化道由体壁断面处排出体外;切后第6 d,体壁切口基本愈合;切后第20 d,排出消化道的仿刺参开始再生出新的消化道;再生出具有摄食与排泄功能的完整个体大约需要100 d。

刺参疾病防治全攻略

随着刺参养殖业的迅猛发展，养殖的过快发展和不规范运作造成了病害问题目趋突出，出现了多种明显病症和大规模死亡现象，部分养殖区相继出现了刺参肿瘤、烂皮、排脏、不摄食等病害，具有一定的传染性，给刺参养殖业者造成了惨重的经济损失，严重制约了该产业的健康可持续稳定发展。国内对刺参疾病的研究尚属起步阶段，国外对刺参疾病报道也多属调查范畴，本文主要对目前刺参养殖过程中出现的主要疾病进行综合阐述。

仿刺参体壁总RNA提取方法的建立

目的:通过对TRIzol一步法进行改进,建立一种从富含胶原蛋白、多糖及色素的仿刺参体壁提取总RNA的有效方法。方法:样品在液氮中研磨并用TRIzol匀浆后再进行抽提;对TRIzol一步法提取的总RNA进行DNaseⅠ消化和酚氯仿抽提,用2.5mol/L的醋酸钾沉淀,并加入适量糖原(10mg/mL)与RNA共沉淀。结果:琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法以及RT-PCR检测结果表明,改进的方法能够有效去除基因组DNA、蛋白、多糖及色素的污染,RNA的产率提高。结论:制备的总RNA纯度高,完整性好,能够满足mRNA差异显示RT-PCR等分子生物学研究的要求,是一种提取仿刺参体壁及其他富含黏多糖、胶原蛋白和色素的动物组织总RNA的有效方法。