2株海洋细菌对镉的吸附作用

用高质量浓度镉培养液单独和联合培养2株海洋细菌J2和J6,3、7、10、14、17d后,采用原子吸收法分别测定培养液上清液和菌细胞中Cd2+的质量浓度,以确定2株菌对镉的吸附性能;通过测定菌体细胞内半胱氨酸脱巯基酶的活性,初步研究了2株菌对镉的转化作用机理。试验结果表明,2株菌均可将细胞外的Cd2+吸收到细胞内,在培养至第7d时,上清液中Cd2+的含量达到最低值,随着培养时间的增加逐渐趋于稳定,J2和J6菌体细胞中Cd2+的含量分别在培养到第10d和14d时达最大值,联合培养对镉的吸附作用优于单独培养;J2和J6在镉处理后细胞内的半胱氨酸脱巯基酶活性均显著增高,提示Cd2+的吸附与细胞内半胱氨酸脱巯基酶作用产生的S2-有关。

仿刺参EGFR基因的克隆与表达分析

表皮生长因子受体(EGFR)是多种细胞因子的受体,在细胞增殖、迁移及分化中具有重要的作用。应用RACE法首次从仿刺参体腔细胞中克隆出EGFR基因的全长cDNA序列。该cDNA全长3 826 bp,包括821 bp的5'-UTR,281 bp的3'-UTR,开放阅读框2 724 bp,编码907个氨基酸。推导的氨基酸序列55-184aa和365-487aa符合EGFR基因所具有的L1和L2受体结构域,在203-344aa和503-823aa含有EGFR家族特征区域CR1和CR2半胱氨酸富集区,并同为跨膜糖蛋白,在结构上具有一致性。经BlastP与GenBank已知物种氨基酸序列进行同源性比对,仿刺参EGFR基因氨基酸序列与果蝇EGFR相似性为49%,同源性为34%,与斑马鱼EGFR相似性为47%,同源性为34%,与淡水椎实螺EGFR相似性为49%,同源性为31%。据此推断,仿刺参EGFR基因属于EGFR家族成员。利用Real-time PCR技术检测了该基因在仿刺参各组织中的表达,结果显示在肠、呼吸树、表皮、体腔细胞、纵肌中EGFR均有表达,且体腔细胞和表皮表达量较高。结果表明,该基因可能在仿刺参组织发育和再生过程中起到重要的调控作用。

工厂化养殖条件下仿刺参不同生长阶段呼吸代谢的特征研究

于2008年6月—2009年5月对不同生长阶段仿刺参Apostichopus japonicus的代谢率进行了跟踪观测。结果表明,温度对不同生长阶段仿刺参的耗氧率和排氨率均有显著影响（P〈0.05）,相同温度下,体重对耗氧率和排氨率的影响也有规律性。A、B组仿刺参（12 g以下）在12.7~16.2℃下,耗氧率和排氨率缓慢上升;在16.2~22.1℃下迅速上升,并在22.1℃时达到最大值[（37.13±1.33）、（35.38±0.55）μg/（g.h）和（0.55±0.054）、（0.54±0.053）μg/（g.h）];在22.1~26.1℃下缓慢下降。与之相反,其他3组仿刺参（18 g以上）在12.7~16.2℃下其耗氧率和排氨率平稳上升,在16.2℃时达到最大值;在16.2~22.1℃下,迅速下降到较低水平;在22.1~26.1℃下,在较低水平上平稳下降,26.1℃时达到最低值。

迟钝爱德华氏菌eseB抗体制备及免疫检测方法的建立

以重组的eseB蛋白为抗原,通过免疫新西兰兔获得了高效价的免疫血清,并建立快速检测迟钝爱德华氏菌的间接ELISA方法。结果显示,用重组eseB蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价为1∶512000;Western blot检测重组eseB蛋白与多克隆抗体有良好的特异性;通过ELISA检测确定迟钝爱德华氏菌抗原的最佳包被密度为108个/mL,多克隆抗血清的最佳稀释度为1∶16000,确定其检测迟钝爱德华氏菌的最佳灵敏度为104个/mL;对不同来源迟钝爱德华氏菌eseB蛋白进行检测,弱毒株15947和ETV与抗血清反应结果为阴性,提示eseB蛋白的表达与其致病性相关,该方法具有较高的特异性。

海带表面降油细菌的分离鉴定及降油性能研究

用柴油为唯一碳源的培养基选择分离海带表面具有降解柴油性能的细菌;对分离菌株进行了形态学、生理生化特性以及16SrDNA序列分析并测定其生长特性;测定了接菌不同浓度(7×107 cfu/mL、7×108cfu/mL、7×109 cfu/mL)分离菌对柴油的降解率;另外,测定了加入不同浓度葡萄糖(0.5g/L、1g/L、2g/L、4g/L、6g/L、8g/L、10g/L)作用7d后分离菌对柴油的降解率。结果显示:从海带表面分离到2株降油细菌,编号为:HD-4和HD-6。HD-4菌株菌落形态圆形、直径1.5mm、黄色、不透明、边缘整齐,HD-6菌株菌落圆形,直径1.0mm,浅黄色、透明、边缘整齐。两株菌均为革兰氏阴性短杆菌。生理生化特征和16SrDNA序列分析确定HD-4菌株为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.),其16SrDNA同源性为99%;HD-6菌株为交替单胞菌(Alteromonas_sp.),其16SrDNA同源性为98%。2株菌最适生长温度均为15℃。HD-4和HD-6最适生长pH分别为9和8。适宜NaCl浓度分别为2%和4%;在25℃振荡培养(150r/min)7d,接菌量为7×107 cfu/mL、7×108 cfu/mL、7×109 cfu/mL时,HD-4对柴油的初始降解率分别为8.0%,22.1%和27.6%;HD-6初始降解率分别为23.7%、38.8%和43.2%。加入葡萄糖后2株菌的降油率均有所增高,加入4g/L葡萄糖时达最高值,3个接种浓度下HD-4菌株分别为85.4%、82.3%和80.4%,HD-6菌株分别为86.8%、93.7%和89.3%。当接菌量为7×107 cfu/mL,HD-4在葡萄糖含量为4g/L时作用7d,降油率可达到最大值86.72%,HD-6菌株在葡萄糖浓度6g/L达到最大值67.64%。葡萄糖浓度超过4g/L和6g/L时HD-4和HD-6菌株的降油性能有所下降。

双齿围沙蚕消化道降油细菌的分离鉴定及降油性能研究

从采自辽宁大连地区的双齿围沙蚕消化道分离得到3株能利用柴油为唯一碳源的石油降解菌,编号分别为,编号为SC11-32-2,SC11-37,SC11-38。通过形态学和16S rDNA序列比对对菌株进行鉴定,结果显示:SC11-32-2菌株16S rDNA序列与Pseudomonas monteilii同源性为99.9%,SC11-37菌株16S rDNA序列与Vibrio alginolyticus同源性为99%,SC11-38菌株16S rDNA序列与Pseudomonas composti同源性99%。继而测定了不同浓度(10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL)分离菌对柴油的降解率,以及加入葡萄糖后不同浓度(10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL)分离菌对柴油的降解率。结果显示:SC11-32-2菌株在10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL接种量条件下的降油率分别为26.31%、44.52%、51.26%;SC11-37菌株在10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL接种量条件下的降油率分别为7.89%、19.22%、23.36%;SC11-38菌株在10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL接种量条件下的降油率分别为12.32%、27.33%、35.56%;加入终浓度为4g/L葡萄糖后,3株菌对柴油的降解率均有显著提高,SC11-32-2菌株在10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL接种量条件下的降油率分别为87.56%、88.33%、88.62%;SC11-37菌株在10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL接种量条件下的降油率分别为67.88%、69.12%、70.38%;菌株在10~7cfu/mL、10~8cfu/mL、10~9cfu/mL接种量条件下的降油率分别为75.67%、78.35%、79.56%。

辽宁盘锦三角洲翅碱蓬根系及内生细菌群落多样性

【目的】翅碱蓬(Suaeda heteroptera)是一种典型的盐碱指示物,对重金属和石油污染的盐碱土壤有一定的修复作用,但是关于翅碱蓬根系与根系内生微生物之间的关系、微生物的多样性以及根系微生物在生物修复中所起作用的研究较少。本文以盘锦"红海滩"的翅碱蓬为例,研究翅碱蓬根系及根系内生细菌菌群种类和结构。【方法】通过传统的培养方法和非培养的高通量测序方法对翅碱蓬根系土壤样品、根系附着物样品以及根系匀浆样品中微生物群落多样性进行分析。【结果】传统方法共分离得到67株细菌,选择代表菌28株,根据其形态特征和生理生化特征,结合16S r RNA基因序列比对进行鉴定,它们分别属于盐单胞菌属(Halomonas)、海细菌属(Marinobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、副球菌属(Paracoccus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、游动球菌属(Planococlus)、沙雷氏菌属(Serratia)、刘志恒菌属(Zhihengliuella)等。利用高通量测序技术对样品进行多样性分析,其中根系附着物样品的菌群丰度和多样性最高,依次分别为根系土壤样品和根系匀浆样品。3个样品中有效序列群落结构可分为12个门,包括酸杆菌门(Acidobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、绿菌门(Chlorobi)、绿弯菌门(Chloroflexi)、蓝菌门(Cyanobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、浮霉菌门(Planctomycetes)、变形菌门(Proteobacteria)、螺旋体门(Spirochaetes)和疣微菌门(Verrucomicrobia)。根系匀浆样品中蓝菌门为优势门类,占整个菌群的42%,变形菌门为次优势类群,占33%。变形菌门在根系附着物样品中为优势门类,占46%,拟杆菌门为次优势门类,占16%。根系土壤样品中拟杆菌门为优势门类,占整个菌群的37%,次优势类群为变形菌门,占20%。【结论】翅碱蓬根系和内生菌具有丰富的多样性,其根系微生物可能会在重金属和石油污染土壤的生物修复中起一定的修复作用。