海参养殖池中毛蚶生物沉积作用的研究

对毛蚶的生物沉积作用以及对养殖水体中物质的运输的影响进行了研究。实验结果表明,毛蚶能够加速养殖池中悬浮颗粒物的沉积,小个体（壳长2.60~2.85 cm）的生物沉积率为45.9~89.5 mg.ind-1.d-1;中等个体（壳长3.77~3.97 cm）为101.0~167.0 mg.ind-1.d-1;大个体（壳长4.60~5.13 cm）为160.5~230.5 mg.ind-1.d-1。毛蚶的生物沉积量与其壳长、软组织干重分别呈正相关线性关系和指数关系;单位重量的生物沉积量则与壳长和软组织干重分别为负相关的线性关系和幂指数关系。实验还证明：海参养殖池水体的温度及悬浮颗粒物的数量能影响毛蚶的生物沉积作用。

盐藻钙依赖蛋白激酶基因DsCDPK的表达分析

以盐藻总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增了盐藻DsCDPK基因的cDNA序列,将其克隆到pMD^(TM)19-T simple载体上,经测序获得的克隆片段全长1650 bp,与已发表的盐藻DsCDPK(GenBank:JQ964113)的编码区序列同源性达100%。将DsCDPK基因的开放阅读框与质粒pET-32a(+)连接,构建原核表达载体pET-32a-DsCDPK。将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导融合,蛋白在大肠杆菌BL21中得到成功表达。通过SDS-PAGE检测发现,融合蛋白为部分可溶性表达,将上清蛋白经过His柱纯化后获得了纯度较高的可溶性融合蛋白,Western杂交检测显示,融合蛋白能被抗His单克隆抗体特异性识别,初步证明该融合蛋白就是带有His标签的DsCDPK蛋白。采用实时荧光定量PCR方法分析了高盐胁迫下DsCDPK基因的表达模式。试验结果表明,盐藻DsCDPK基因为盐胁迫上调基因,在高盐(3.0 mol/L NaCl)胁迫下,DsCDPK基因表达量显著增加,盐胁迫1 h时表达量达到最高,为正常生长状况(1.0 mol/L NaCl)下的3倍,差异达到极显著水平(P<0.01)。该研究成果为进一步阐明盐藻钙依赖蛋白激酶基因的功能及作用机制奠定了基础。

魁蚶精子的超微结构

应用扫描和透射电镜观察了魁蚶的精子,揭示了其超微结构。扫描结果显示,魁蚶精子全长55μm,由头部、中段和尾部3部分组成。其中,头部长约2μm,最宽处直径为1.5μm。透射结果显示,魁蚶头部包括顶体和精核。顶体位于头部前端,较圆钝,呈倒"V"形,与精核之间有一间隙,精核位于顶体的下方,占头部体积的2/3左右,具有核后窝和植入窝,但是没有核前窝。中段由5个近圆形的线粒体围绕着中心体构成,线粒体横切面长轴直径为0.6μm,短轴直径为0.5μm。尾部细长,由尾丝包被质膜构成,内有轴丝。横切面呈圆形,直径为0.15μm,横切面为典型的"9+2"结构。

AFLP:一种适用于水产动物研究的分子标记技术

本文综述了AFLP分子标记技术的基本原理、技术流程和应注意的问题,并对其在水产动物的研究前景进行了展望。

辛硫磷对刺参幼参的急性毒性效应

研究了静水条件下辛硫磷对刺参幼参(0.8±0.1)g的急性毒性试验,以期为海参养殖环境监测提供理论依据。利用Bliss法,得出辛硫磷对刺参幼参在24、48、72 h半致死质量浓度分别为0.329、0.1970、.141 mg/L,并计算出安全质量浓度为0.021 mg/L。

利用免疫共沉淀联合质谱技术筛选盐藻MAPK的互作蛋白

为进一步探究杜氏盐藻促有丝分裂原活化蛋白激酶(DsMAPK)的功能,采用免疫共沉淀联合质谱技术筛选盐藻MAPK的互作蛋白。将pGS21a-MAPK质粒转入大肠杆菌BL21中表达MAPK蛋白并制备多克隆抗体;将培养至对数生长期的盐藻细胞进行盐胁迫处理,然后提取盐藻总蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting检测;以内源性靶蛋白为诱饵,将细胞总蛋白与MAPK抗体进行共孵育,将经蛋白A/G琼脂糖珠纯化的免疫共沉淀复合物进行质谱检测。结果表明,制备的多克隆抗体特异性良好;筛选出165种特有的差异蛋白。通过GO和KEGG分析发现,这些差异蛋白主要参与了新陈代谢、遗传信息的传递以及信号转导等生物学调控过程。蛋白质互作网络分析发现,直接与MAPK相互作用的蛋白有4种。本研究结果为深入研究杜氏盐藻响应盐胁迫的分子机制提供了参考。

三苯基锡和三丁基锡对海胆的急性毒性研究

采用发育生物学和生态毒理学的模式生物海胆检测两种典型的有机锡化合物三苯基锡(TPT)和三丁基锡(TBT)对水生生物的急性毒性,同时对上述物质对海胆的安全性进行初步评估,以期为有机锡的防控提供基础数据。半静水条件下,通过概率单位法(Bliss)得到TPT和TBT对黄海胆24h,48h,72h,96h的LC50,分别为:25.007、18.743、9.514、6.662μg·L-1和19.850、15.986、7.888、4.916μg·L-1,并计算TPT和TBT对海胆的安全浓度分别为0.666和0.492μg·L-1。结果发现,TPT和TBT对黄海胆均表现为剧毒作用,TBT毒性大于TPT。海胆对上述毒物具有很高的敏感性,结果稳定,重现性好,建议将海胆作为海洋环境中有机锡污染的监测生物。

盐藻钙调素基因的克隆及表达分析

为探究盐藻钙调素基因的结构与功能,利用RT-PCR和RACE技术克隆到盐藻钙调素基因(DsCaM,GenBank登录号:MN428415),并对其进行生物信息学分析,通过qRT-PCR方法检测盐藻钙调素在盐胁迫条件下的表达情况。试验结果显示,盐藻钙调素基因cDNA全长1061 bp,开放阅读框495 bp,编码164个氨基酸。盐藻钙调素为亲水蛋白,该蛋白主要分布在细胞质和液泡内,无跨膜区域,不存在信号肽,蛋白质的二级结构以α-螺旋(56.71%)和无规则卷曲(26.22%)为主,成功构建蛋白质三级结构。系统进化分析表明,盐藻钙调素基因与莱茵衣藻钙调素基因亲缘关系最近。qRT-PCR结果表明,在高盐胁迫下盐藻钙调素基因的表达量显著上调,胁迫6 h时表达量达到最高值,差异达到极显著水平(P<0.01)。该研究成果将为进一步分析盐藻钙调素基因的功能及盐藻应答盐胁迫信号的分子途径提供新信息。

纳米氧化铈暴露下大型溞MAPK基因家族的表达分析

MAPK基因家族广泛参与生物体细胞内的各种生命过程,与生物对环境胁迫的应答相关。然而,在纳米氧化铈(Nano cerium dioxide, nCeO2)暴露下大型溞MAPK基因家族成员的作用机制还不清楚。本文利用BLAST、HMM和SMART等方法在大型溞基因组中鉴定MAPK基因家族成员,分析大型溞各个MAPK基因的理化性质、染色体定位、结构域、保守基序、系统发生关系等,并利用qPCR分析不同浓度、不同时间nCeO2暴露下各个MAPK基因家族成员的表达模式。结果鉴定出14个大型溞的MAPK基因,分布于8条染色体上。MAPK基因家族编码的蛋白质序列长度为361~1546 aa,分子量为38.93~77.02 kDa,等电点在5.3~9.51。12个MAPK蛋白具有S_TKc结构域,4个保守基序。系统发生分析显示,大型溞的14个MAPK基因分别属于4个亚家族,基因序列在进化过程中具有较高的保守性。在50和150 mg/L nCeO2暴露48 h后,大型溞的7个MAPK基因DmMAPK-p38b、DmMAPK4、DmMAP2K4、DmMAP3K4、DmMAP3K7、DmMAP3K11、DmMAP4K5的转录表达水平与对照组相比,极显著上调。结果提示,MAPK基因家族成员与大型溞对nCeO2的胁迫应答调控相关。本研究为评估纳米材料对水生生物的潜在毒性提供科学参考。

纳米氧化铈暴露下大型溞miR-190和MARK2基因的表达和功能分析

随着越来越多的纳米氧化铈(nCeO2)进入水环境,增加了水生生物与nCeO2接触的健康风险。为了研究微小RNA-190 (miR-190)的功能以及nCeO2暴露对大型溞体内miR-190及其靶基因MARK2表达的影响,我们利用miRbase数据库和MEGA7.0软件分析miR-190序列在各物种中的系统发生关系。Targetscan、miRanda和RNAhybrid筛选鉴定miR-190的靶基因。通过GO和KEGG聚类分析揭示miR-190靶基因的生物学作用。qPCR分析nCeO2暴露对大型溞体内miR-190和MARK2转录水平表达的影响。我们发现,14个物种的miR-190序列有16个碱基完全相同,miR-190序列在进化过程中高度保守。miR-190的852个靶基因主要位于细胞膜、细胞质中,富集在细胞内信号转导、DNA模板和转录调控、蛋白质磷酸化等生物学过程,且靶基因参与胞吞作用、ABC转运器和FoxO等细胞内重要的信号通路。在nCeO2暴露24、48 h后,miR-190在大型溞中的转录表达下调,而MARK2的mRNA表达量则明显上升。结果提示miR-190与MARK2在大型溞中的表达存在负调控关系,miR-190可能通过调控MARK2的转录表达来影响相关的细胞生命活动,本研究为解析nCeO2对水生无脊椎动物的毒性效应提供科学参考。

拟除虫菊酯和有机磷农药对三种扇贝稚贝的急性毒性效应

采用静水实验法测定拟除虫菊酯类和有机磷类农药对三种扇贝稚贝的急性毒性效应。结果表明:联苯菊酯对海湾扇贝、栉孔扇贝和虾夷扇贝稚贝24 h的LC50的分别为1.460、1.662和2.909 mg/L;辛硫磷对海湾扇贝、栉孔扇贝和虾夷扇贝稚贝24 h的LC50的分别44.598、182.167和39.334μg/L;马拉硫磷对海湾扇贝、栉孔扇贝和虾夷扇贝稚贝24 h的LC50的分别4.931、40.386和26.242μg/L。海湾扇贝稚贝对供试农药较栉孔扇贝、虾夷扇贝敏感;三种农药的毒性大小依次为马拉硫磷、辛硫磷、联苯菊酯。