碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中DNA的探讨

采用碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中的DNA ,达到分离纯化目的 ,回收后的DNA可用于重组、PCR等研究。首先将含有目的DNA的琼脂糖凝胶用NaI溶液融解 ,然后加入CaCl2 和NaHCO3,生成CaCO3沉淀 ,DNA与CaCO3形成复合物 ,通过离心分离出沉淀复合物 ,利用稀酸溶解沉淀 ,再用无水乙醇沉降 ,即可回收目标DNA。利用该方法回收了质粒、毛白杨和转基因羊基因组DNA ,回收率为 2 0 %～ 5 0 % ,OD2 6 0 /OD2 80 为 1 7～ 1 9,最大回收了 2 1kb片段 ,最小回收 2 5 0bp片段 ,回收后的DNA样品进行了PCR扩增和限制性内切酶反应 ,PCR可以扩增出目的片段 ,同时限制性内切酶可以将回收后的DNA切开 ,表明DNA质量良好。利用碳酸钙沉淀法可以回收琼脂糖凝胶中的DNA ,此法简单、易行 ,较为有效。

植酸酶基因在海水小球藻细胞内的表达

为建立海水小球藻外源基因转化系统,使外源植酸酶基因在海水小球藻细胞内获得稳定表达,利用电激法将植酸酶基因与海水小球藻细胞共转化;利用含G418的抗性平板筛选抗性藻株,并对所获得的抗性藻株依次进行PCR检测、Southern杂交分析和植酸酶活性与性质的检测.经过转化处理的微藻细胞在含G418的抗性平板上培养3周后,每个平板有10-30个抗性藻株长出;在这些抗性藻株中,PCR检测的阳性率为40.16%;Southern杂交分析和植酸酶活性检测证明,植酸酶外源基因已经在小球藻细胞中获得正确表达.植酸酶外源基因在海水小球藻细胞内被成功表达.