脂肪干细胞生长特性研究

研究了脂肪干细胞在一个月连续培养中的生长增殖特性,及经长期连续培养后细胞的干细胞特性,同时探索了细胞周期蛋白表达与生长增殖特性之间的关系。分别采用CCK-8试剂盒与血细胞计数板来检测细胞活性与细胞数随时间的变化;用流式细胞仪检测细胞的死活情况;采用流式细胞仪和组织化学染色分析经一个月连续培养后细胞的干细胞特性;流式细胞仪和western blot分析不同时间段的细胞周期分布和细胞周期蛋白的表达。结果表明,脂肪干细胞在一个月的连续培养过程中始终保持很高的细胞活性和增殖能力。并且连续一个月培养后,仍然保持其干细胞特性。细胞周期蛋白A的增量表达,促进脂肪干细胞从S期向G2/M期过渡,使G2/M期细胞比率增加,处于分裂状态细胞含量增加,此时细胞处于快速增殖状态。因此,可以通过延长脂肪干细胞的传代培养时间来为细胞治疗提供更多高质量的移植用干细胞。并且在脂肪干细胞长期连续培养过程中,细胞周期蛋白A通过调节细胞周期分布而影响着细胞的生长增殖。

基于RAPD标记对71个柞蚕品种的聚类分析

采用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)的方法,在DNA分子水平上对我国不同地区、不同化性的71个柞蚕品种进行聚类分析。从140条RAPD随机引物中筛选出28条可稳定扩增条带的多态性引物,共扩增出92条多态性条带,占总扩增带数的29%;采用非加权组平均法(unweighted pair-group method with arithmetic means,简称UPGMA)聚类法对试验结果进行分析,构建了71个柞蚕品种的亲缘关系,结果显示,各个地区与不同化性的柞蚕品种之间亲缘关系没有明显区别,遗传类型相互混杂。

柞蚕核型多角体病毒基因组编码的VmiRNA筛选及功能分析

[目的]VmiRNA不仅可以控制自身基因,还可调节宿主的稳定表达,研究VmiRNA的功能有助于从分子水平说明核型多角体病毒与柞蚕的寄生关系,从而改进对病毒的防控措施。[方法]利用生物信息学及实时定量PCR等分子生物学相关技术,对柞蚕核型多角体病毒编码的miRNA及其作用的靶标基因进行研究。[结果]经预测和筛选得到了Ap NPV编码的miRNA MD217,与其有关的宿主靶基因14种,主要参与细胞组成、生化过程以及分子功能等途径,涉及到生物体细胞内一些催化、免疫反应等过程;实时定量PCR结果表明,MD217在病毒感染后上调表达,脂肪体组织内的靶基因MAPKK7表达水平与MD217的表达呈正相关。[结论]miRNA MD217在病毒感染后诱导表达,推测很可能降低了宿主免疫系统的防御能力,并同时影响靶基因MAPKK7的功能表达,从而避免了在免疫应答过程中的免疫清除。

壳聚糖支架材料在组织工程中的应用与未来

背景:壳聚糖作为功能性高分子材料已被广泛应用于生物医药领域,是具有传感功能、反馈功能和响应功能的智能材料。目的:综述近年壳聚糖支架材料在组织工程不同领域内的应用,并着重介绍壳聚糖作为支架材料所具备的优势和劣势。方法:以"组织工程,支架材料,壳聚糖;tissue engineering,scaffold,chitosan"为关键词,检索CNKI、PubMed数据库2000至2016年的文献,将所有文章进行初步筛选后,对保留的文章进一步详细分析、归纳并总结。结果与结论:壳聚糖支架生物相容性好,能在体内降解,同时能携载许多不同的生长因子,目前已在神经组织工程、眼角膜组织工程、牙周组织工程、软骨组织工程、骨组织工程、皮肤组织工程、心肌组织工程等方面有了广泛应用。但随着科技的进步,组织工程支架有利于组织修复的机制仍然存在许多争议。将壳聚糖与其他材料复合可形成仿生程度越来越高的人工细胞外基质,拓宽了壳聚糖的应用范围。

转录因子KLF5调控宫颈癌细胞上皮-间充质转化的分子机制

上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。为了探究Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)调控宫颈癌细胞发生EMT过程的分子机制,首先在宫颈癌HeLa细胞瞬时转染Flag-KLF5质粒进行KLF5过表达,并通过MTT法、细胞划痕和Transwell实验证实,KLF5可以显著地抑制HeLa细胞的侵袭和迁移能力。然后采用Western-blot和实时定量PCR技术检测HeLa细胞中EMT相关基因的表达水平,结果显示E-cadherin表达升高,N-cadherin和MMP9表达降低;而且,E-cadherin基因的上游调控因子如SNAI1、SLUG、ZEB1/2和TWIST1等的mRNA表达下降。进一步开展对比研究,在SiHa细胞中用siRNA沉默KLF5基因,再次验证了KLF5对EMT相关基因表达水平的影响。随后构建不同长度的SNAI1启动子截短体,用荧光素酶报告基因实验检测KLF5对SNAI1启动子活性的影响,结果显示KLF5可以抑制SNAI1启动子区域的活性,并且在HeLa细胞中过表达SNAI1基因后,可显著地促进细胞的EMT过程。以上结果表明,KLF5可通过调控SNAI1基因的表达来调节宫颈癌细胞的EMT过程,进而抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。

1-磷酸鞘氨醇促进间充质干细胞向心肌分化

为研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)对脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)和脂肪间充质干细胞(Adipose derived mesenchymal stem cells,AD-MSCs)向心肌分化的影响,探索其适宜的作用时间和浓度,将UC-MSCs和AD-MSCs接种到培养板,用添加不同浓度S1P的心肌细胞培养液诱导两种干细胞向心肌分化,诱导时间分为7 d、14 d和28 d。采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白,α-肌动蛋白(α-actin)、缝隙连接蛋白(Connexin-43)以及肌球蛋白重链(MYH-6)的表达,并通过共聚焦显微镜和荧光显微镜进行观察;采用MTT分析细胞的活性;膜片钳检测分化细胞的钙瞬变(此为心肌细胞的功能性指标)。结果表明,S1P与心肌细胞培养液协同作用,能够促进UC-MSCs和AD-MSCs向心肌细胞的分化。并且,随着S1P浓度的增加,促分化作用增强,但细胞活性降低。S1P在心肌细胞培养液中的适宜作用时间为14 d,适宜作用浓度为0.5μmol/L。而且联合心肌细胞培养液可以使UC-MSCs和AD-MSCs的心肌分化细胞产生钙瞬变,具有类似心肌细胞的功能性。S1P能够与心肌细胞培养液协同作用,促进UC-MSCs和AD-MSCs的心肌功能性分化。

急性髓系白血病发病机制的研究进展

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是白血病中最常见的类型。传统治疗以联合化疗为主,而患者完全缓解率和长期无病生存率均较低。随着研究的深入,发现AML主要的发病机制包括融合基因、信号通路、白血病干细胞(leukemia stem cells,LSCs)以及骨髓微环境的改变等。该文旨在总结目前AML发生、发展机制的研究进展,并探讨其未来可能的治疗研究方向。

急性髓系白血病免疫治疗方式及研究进展

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种侵袭性血液学恶性肿瘤,是由血液和骨髓中未成熟的白血病细胞积累引起的。目前的标准治疗方案是以大剂量的常规化疗进行诱导缓解,待取得完全缓解(complete remission,CR)后再进行后续治疗,以达到强化和维持治疗的作用,但此种治疗方法的预后及生存率仍不理想。对于不适合强化治疗方案的患者以及复发或难治性疾病患者,迫切需要用于替代的免疫治疗策略。在过去几年里,免疫疗法的进步使癌症治疗发生了革命性的变化。新的免疫治疗方法正在进入肿瘤学的主流,为AML的预后及生存率提供新的武器,并在AML的治疗中越来越显示出其相较于传统治疗的优势。该文将对造血干细胞移植(hematopoietic stem cell,HSC)、嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy,CAR-T)、单克隆抗体药物、自然杀伤细胞(nature kill cell,NK)、树突细胞(dendritic cells,DC)疫苗这5种目前主要的免疫治疗方案的研究进展及相关分子机制进行综述。

基于迈克尔逊干涉仪测液体折光度实验改进方法

本文提出了一种新的方法和思路去测量液体以及透光固体的折射率的一种方法 ,应用迈克尔逊干涉仪,以及比色皿等实验装置,通过光敏传感器自动测量迈克尔逊试验仪上光圈的吞吐数目,其次将得到的数据输入进Labview虚拟程序框图中,达到自动化测量液体的折射率的一种新方法。本文从测量的原理和方案操作角度进行了详细的说明,并且做了相关的实验操作获得了大量的有效的数据。本文也对这些相关数据进行了合理的分析,提出了新型测量方案的优势和缺陷。同时结合实际情况,我们对测量方案的前景提出了一些可行的观点和猜想。