高效麻风菌基因组DNA库的建立及评价

以构建的噬菌体λｇｔｌｌ为载体，插入平均长度为４ｋｂ的麻风菌ＤＮＡ片段，建立了ＭＬ基因组ＤＮＡ库。重组效率检测表明，阳性重组噬菌体颗粒浓度为６×１０＾４ｐｆｕｍｌ（噬斑形成单位／ｍｌ），且扩增为２．６×１０＾８ｐｆｕ／ｍｌ建立了高重效率和高浓度的ＭＬ ＤＮＡ重组噬菌体颗粒悬液，成为ＭＬ基因组ＤＮＡ库的永久来源。

重组α蛋白抗原的大量制备及纯化方法初探

继从麻风菌基因组 DNA 库中筛选出α1及α2抗原基因克隆后,我们又探讨了α抗原基因克隆在大肠杆菌中高效率表达的条件和高精度提纯的方法。实验表明,pMALc—RI 质粒为重组α蛋白抗原的最佳表达载体;诱导表达高峰为加入诱导剂后4小时;用亲和层析柱法提纯后,200ml 培养液中重组α1及α2蛋白抗原的检测得量分别约为6mg 和10mg,提取纯度为95%。

麻风菌α抗原基因不同表位DNA段的制备及表达

为筛选麻风菌α抗原基因的特异表位,通过限制性内切酶消化法及多引物 PCR 法制备出麻风菌“抗原基因不同表位的 DNA 片段,并对以消化法得到的 DNA 片段进行了初步表达,为确定麻风菌α抗原基因的特异表位奠定了基础。