经典方剂二至丸补肝益肾作用研究

目的二至丸由墨旱莲、女贞子2味药配伍而成,具有补腰膝、壮筋骨、强肝肾、乌髭发的功效,是补益肝肾的经典代表方。本研究以二至丸为研究对象,以雌雄激素样作用为切入点,阐明二至丸体内药效物质基础,揭示二至丸治疗肝肾阴虚证的化学活性物质和生物学基础,为临床精确使用二至丸提供科学依据,诠释中医“异病同治”科学内涵。方法采用LC-MS、LC-NMR-MS等技术对分离得到的二至丸中化合物进行鉴定,明确二至丸口服吸收入血的化学物质及药动学特征;基于高内涵筛选及报告基因技术确认二至丸及入血成分雌雄激素样活性;利用与肝肾阴虚症状表现类似的动物模型,围绕骨、脂肪及前列腺等组织研究二至丸中雌雄激素样活性成分的作用特点及靶点。结果①基于UHPLC/Q-Orbitrap-MS建立一种同时靶向与非靶向扫描技术,结合离线全二维色谱,从二至丸中在线分离监测7大类共270个化学成分。研究了墨旱莲中7种入血成分的体内代谢过程,结果发现其均符合一室开放药动学模型,大部分在1 h左右血药浓度达到峰值。同时其入血成分最终鉴定4大类共85个代谢产物。②对272个来源于包含二至丸的化合物进行筛选,发现33个化合物在10μmol·L^(-1)浓度下明显促进雌雄激素受体核转位,其中山奈酚、齐墩果酸具有选择性雄激素受体调节剂样作用。③二至丸具有抗骨质疏松作用,其作用的分子机制与降低破骨细胞及脂肪细胞分化;升高成骨细胞分化以及调控肠道菌群有关。④二至丸抑制雌激素不足导致的肥胖。通过AMPK信号通路调节细胞能量稳态平衡,并且作用于雌激素受体以间接调节过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α),从而干预线粒体结构与功能,调节适应性产热,参与脂代谢。⑤二至丸抑制良性前列腺增生(BPH)。二至丸显著减少BPH平滑肌细胞层厚度,下调PCNA表达,显著增加ERβ和MMP-1的表达,有效降低睾酮、E2、DHT、AR、前列腺特异抗原(PSA)、ERα、SRD5A1/2、芳香化酶、p-ERK、α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_(1)和p-Smad3的表达,缓解BP的生物学进程。结论补益肝肾经典方剂二至丸及其成分具有植物雌雄激素样作用;二至丸的植物雌雄激素样作用是其抗绝经期骨质疏松症、绝经期激素不足导致的肥胖症及抑制良性前列腺增生等作用的生物学基础。

疏肝导浊方对脂肪肝家兔的AST、ALT、ALP、NO、SOD和MDA的影响

[目的]观察疏肝导浊方对脂肪肝家兔肝功能及抗氧化作用的影响。[方法]采用高脂饲料喂饲家兔6周,诱导形成脂肪肝模型,实验分组为疏肝导浊方高、中、低(8、4、2g/kg)剂量组、东宝肝泰对照组、模型组和空白对照组,检测各组肝功能、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平。[结果]模型组肝功能、SOD明显下降(P<0.05),MDA明显增加(P<0.01);疏肝导浊方中、低剂量组SOD明显升高(P<0.05)。[结论]疏肝导浊方可有效提高脂肪肝家兔的抗氧化作用。

制何首乌肝损伤的化学物质及中药多糖或寡糖配伍干预研究

目的制何首乌(Polygoni Multiflori Radix Praeparata,PM)是常用的补益肝肾中药,近年来由何首乌及其制剂引起的肝损伤受到广泛关注。本研究旨在探索制何首乌造成免疫特异质肝损伤的化学物质和配伍减毒机制。方法本研究以脂多糖(Lipopolisaccharide,LPS)诱导免疫特异质体质,利用中药组分敲除技术,筛选制何首乌特异质肝脏损伤的化学物质;选择多种具有免疫调节作用的中药多/寡糖,探究其与制何首乌配伍后的减毒作用。结果在LPS诱导的免疫应激动物模型中,PM醇提物造成免疫特异质肝损伤。PM提取物中敲除蒽醌类成分后,其肝损伤作用明显降低;而PM中分离的蒽醌类成分能引起动物免疫特异质肝损伤。肉苁蓉多糖、褐藻寡糖、壳寡糖与制何首乌配伍,均能减轻制何首乌造成的免疫特异质肝损伤,抑制多种炎症因子表达。结论免疫特异质体质是导致制何首乌肝毒性的重要因素,蒽醌类成分是造成其肝损伤的主要物质基础,肉苁蓉多糖、褐藻寡糖、壳寡糖能减轻PM造成的特异质肝损伤。

药物溶出/吸收仿生系统研究丹酚酸B缓释片释放规律

目的:应用药物溶出/吸收仿生系统(drug dissolution/absorption simulating system,DDASS)研究丹酚酸B缓释片的体外释放规律,为中药活性成分缓控释制剂的设计提供新技术。方法:分别采用DDASS法和我国药典收载的桨法对丹酚酸B固体制剂进行体外释放度试验,高效液相色谱法定量,SPSS软件对累积释放度进行释放模型拟合。改进DDASS装置使研究对象从药物固体粉末或颗粒剂扩展到片剂、胶囊剂等多种剂型,分别评价丹酚酸B缓释片DDASS改进前、后和桨法中释放规律的相关性。结果:丹酚酸B原料药及其缓释片在改进前DDASS模型中释药过程符合Weibull方程;而丹酚酸B缓释片在改进后DDASS模型中释药过程符合一级动力学方程,与桨法评价结果一致。DDASS改进前、后与桨法释药规律相关性水平r值分别为0.7884(r5,0.05<r前<r5,0.001)和0.9982r后>r5,0.001)。结论:丹酚酸B缓释片释药规律研究显示改进后DDASS法与桨法之间存在更为显著相关性。较之桨法,DDASS法模拟了一个连续动态的、更接近人体消化道环境的释药过程,表明该法评价药物固体制剂释药特性研究的合理性,为药物剂型设计研究提供了新的技术平台。

小鼠灌胃大枣提取物后血清和海马组织中cyclic AMP的含量变化

目的:观察小鼠ig给予大枣提取物(0.35g·kg-1)后24h内血清和海马组织中cyclicAMP(cAMP)含量随时间的变化规律,初步阐明大枣提取物抗抑郁作用可能的机制。方法:首先采用高效液相色谱法测定大枣提取物种cAMP的含量,再使用健康ICR小鼠,单次ig给予大枣提取物后在0.5,1,2,4,6、8,12,24h股动脉取血,分离海马组织,采用荧光ELISA法测定血清和海马组织中cAMP浓度。结果:大枣提取物中cAMP的平均含量为1.54%。血清中cAMP浓度在0.5h达最大值,在8h内逐渐减少,在8～12h又明显升高,此后又开始降低。而海马组织中cAMP浓度在前6h之内缓慢升高,6～8h内明显升高,24h达最大值。结论:大枣提取物中可能同时存在具有磷酸二酯酶抑制作用的物质,能够在6～12h内抑制磷酸二酯酶的活性,增加cAMP的浓度,这可能是大枣提取物抗抑郁的作用机制之一。