牛布氏杆菌病和分枝杆菌病二联表位疫苗的构建及其免疫效果评价

为研发一种更安全、有效的防控牛布氏杆菌病和分枝杆菌病的疫苗,运用在线软件ABCPerd和IEBD对牛布氏杆菌外膜蛋白(Omp25)和牛分枝杆菌抗原85A(Ag85A)的B、T细胞表位进行预测分析,设计新的表位基因肽段NewⅠ和NewⅡ,并通过SOPMA和VaxiJen在线软件对NewⅠ和NewⅡ的二级结构与抗原性进行分析。将NewⅠ、Omp25、NewⅡ和Ag85A基因序列依次用自剪切肽T2A、P2A、E2A进行连接,获得串联基因并命名为COE,将COE基因构建至真核表达载体GV658,获得重组质粒GV658-COE;将上述重组质粒转染至HEK293细胞,利用细胞计数(CCK-8)试验评估GV658-COE对细胞的安全性,通过免疫印迹分析目的蛋白的表达情况;将重组质粒以400μg/只的剂量免疫大鼠,检测在第3次免疫后的血清抗体及大鼠脾淋巴细胞中的T细胞亚群占比情况。结果显示:NewⅠ和NewⅡ序列二级结构较稳定,抗原性良好;重组质粒经PCR扩增获得3231 bp大小的目的条带,与预计相符;重组质粒对HEK293细胞无毒性作用;重组质粒在HEK393细胞中可表达出目的蛋白,分别在22.3、17.3、23.9和35.6 kDa处有目的蛋白NewⅠ、Omp25、NewⅡ和Ag85A的表达。三免后,重组质粒免疫大鼠产生的IgG水平均高于空载质粒组和PBS组;与PBS组相比,重组质粒免疫大鼠脾脏中CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞百分比均升高。研究表明,重组质粒GV658-COE能有效激发大鼠的体液免疫和细胞免疫反应,可成为预防牛布氏杆菌病和分枝杆菌病的候选疫苗。

昆虫死亡素thanatin与斑点叉尾鮰β-防御素在毕赤酵母中的表达及其抑菌效果评价

旨在利用毕赤酵母表达系统表达出具有良好抑菌效果的重组抗菌肽。选定昆虫死亡素thanatin基因和斑点叉尾鮰β-防御素基因(命名为defbl),按毕赤酵母偏好性密码子优化后,将用T2A剪切肽连接的共表达基因(命名为TD)及各单基因分别构建至pMD19-T载体上,经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切后亚克隆至表达载体pPICZɑA上,经SacⅠ线性化后电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,通过Zeocin抗性及PCR筛选出阳性菌株,利用1%甲醇进行诱导表达,72 h后收集培养基上清液,冻干浓缩并纯化后,进行Western blot检测及体外抑菌试验、溶血性试验。结果显示,成功构建重组毕赤酵母工程菌株GS115-pPICZαA-thanatin、GS115-pPICZαA-defbl和GS115-pPICZαA-TD,通过甲醇诱导成功获得重组蛋白,纯化后Western blot检测结果显示,thanatin组和defbl组分别在2.3 kDa和7.8 kDa处出现特异性条带,TD组同时出现上述2条带,蛋白大小均与预期相符;3个重组蛋白浓度分别为600、300和700μg/mL;体外抑菌试验及溶血性试验结果显示,各重组蛋白均具有良好的抑菌作用,TD重组蛋白抑菌效果最佳,且所获蛋白均具有较低溶血性。研究表明,利用酵母表达系统成功获得具有良好抑菌效果且溶血性低的重组抗菌肽,相较之下,TD组抗菌肽抑菌效果最佳。本研究结果为后续进一步探索上述抗菌肽的功能及临床应用奠定基础。

硒化壳寡糖对蛋雏鸡抗氧化功能及免疫功能的影响

试验将45只蛋雏鸡随机分为对照组、试验A组和试验B组,分别饲喂基础日粮、添加0.3和0.5mg/kg硒化壳寡糖(以硒计)的日粮;试验期21d。试验结束后测定血清抗氧化功能及免疫功能相关指标。结果表明:试验A组和试验B组蛋雏鸡血清MDA水平、 IFN-γ和IL-2含量均显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);试验A组和试验B组蛋雏鸡血清IL-10含量、 T-AOC和GPX水平均显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结果提示:硒化壳寡糖可以提高蛋雏鸡的抗氧化功能,调节蛋雏鸡的免疫功能。