IL-2、IFN-γ在弓形虫感染小鼠脾细胞的活性动态

目的 研究小鼠感染RH株弓形虫后脾细胞的IFN -γ、IL - 2活性动态变化。方法 用 2× 10 3 个RH株弓形虫速殖子腹腔接种昆明小鼠 ,分别在感染前、感染后直至小鼠死亡每天随机取 5只鼠脾脏 ,用生物学检测法测定感染前、感染后鼠脾细胞IFN -γ、IL - 2的活性 ,结果用F检验进行统计学分析。结果 感染后第 2d、第 5d、第 7d小鼠脾细胞IFN -γ活性虽有升高 ,但各组均值与感染前比较均无显著性升高 (P >0 0 5 ) ,感染与未感染小鼠的IFN -γ活性无显著性改变 (P >0 0 5 )。鼠脾细胞IL - 2活性在感染前、后有显著性变化 (P <0 0 5 )。感染后第 3d、4d较第 2d、第 5d、第 7d显著性下降 (P <0 0 5 ) ,至感染后第 9d感染鼠全部死亡。结论 RH株弓形虫感染宿主后剌激宿主产生的内源性IFN -γ和高活性的IL - 2不能引起有效的保护性免疫 ,致使虫体大量繁殖 ,小鼠死亡。

PCR技术检测RH株弓形虫组织内感染的实验研究

目的 :建立敏感、特异的聚合酶链反应 (PCR) ,以检测组织内弓形虫感染。方法 :优化PCR反应关键步骤的条件 ,以相同的B1引物扩增相近的病原体判断其特异性 ,扩增倍比稀释的DNA检测其灵敏度 ,并以PCR法检测实验鼠肝、血中DNA的动态变化 ,结果与免疫组化法进行比较 ,评价其检测生物学样本的可行性。结果 :实验建立的PCR技术的灵敏度能达到检测出一个虫体的DNA ,且特异性强 ,不扩增鼠DNA、人DNA、隐孢子虫、卡氏肺孢子虫、鼠疟原虫的DNA。检测实验感染小鼠血、肝脏样本 ,在感染后2天 ,3只鼠血样本PCR结果阳性 ,3只小鼠肝标本2只阳性 ;感染后3天至濒死前所有小鼠检测结果均阳性 ;血样本阳性检出率100 % (11/11) ,肝脏组织样本阳性检出率81.8 % (9/11)。结论 :PCR方法是一种敏感、特异、快速的诊断方法 。

人促甲状腺激素受体膜外区N端基因免疫诱导Balb／c小鼠实验性格雷夫斯病

目的观察人促甲状腺激素受体（human thyrotropin receptor，hTSHR）膜外区N端（氨基酸29-280区域）的抗原性及其与格雷夫斯病（Graves病）发病的关系。方法提取人正常甲状腺组织总RNA．反转录后进行PCR，扩增产物与表达载体pcDNA3．1进行连接得到重组质粒pcDNA3．1／hTSHR188-940bp。用重组质粒免疫Balb／c小鼠，检测小鼠血清中甲状腺素（thyroxin，T4）、抗TSHR抗体（anti-TSHR antibody，TRAb）、甲状腺刺激抗体（thyroid stimulating antibody，TSAb）水平的变化，光镜下观察甲状腺组织的结构变化。结果 PCR扩增得到hTSHR膜外区N端753bp的基因片段hTSHRl％～％bD，该片段与表达载体pcDNA3．1连接后，经HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR180-940bp片段插入序列和方向正确。用pcDNA3．1／hTSHR180-940bp免疫Balb／c小鼠后发现，血清TRAb水平从第6周（0．148±0．018）开始升高，到第10周（0．134±0．011）一直维持在比较高的水平，与第0周（0．106±0．006）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。血清T4、TSAb水平在第10周[（62．20±12．77）μg／L、1．392±0．615]出现明显升高，与第0周[（41．02±7．97）μg／L、0．864±0．076]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。甲状腺病理学检查发现大部分小鼠甲状腺滤泡上皮增生，滤泡腔增大，偶见炎细胞浸润。结论TSHR188-940bp编码的hTSHR膜外区N端氨基酸29-280区域抗原决定簇使机体产生TSAb，从而导致甲状腺功能亢进，出现类Graves病表现，说明偈HR的这个区域与Graves病密切相关，可能是导致该病的重要因素。