口服木糖醇对糖尿病大鼠肾脏IGF-Ⅰ表达的影响

目的检测口服木糖醇对实验性1型糖尿病模型大鼠血糖及肾脏IGF-Ⅰ表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)一次性尾静脉注射造1型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病对照组(DC),糖尿病5%、10%、20%木糖醇(Xy)喂养组(D+5%、10%、20%Xy),另外设置正常对照组(NC)。喂养中分别在饲料中添加不同比例的木糖醇,开始分组喂养前留取血糖结果,第8 w末处死,处死前测量血糖。通过SABC免疫组织化学和定量分析方法观察各组大鼠肾脏IGF-Ⅰ表达的平均光密度(MOD)。结果血糖结果≥16.7 mmol/L证实模型构建成功。差异性喂养8 w后,各糖尿病组(DM)血糖与NC组相比仍升高(P<0.05),DC组血糖较0 w升高(P<0.05),而各D+Xy组8 w较0 w无明显变化。肾皮质/髓质IGF-Ⅰ表达的组间变化趋势一致:DC组较NC组IGF-Ⅰ表达量高;相比于DC组,随着饲料中添加木糖醇以及浓度的升高,IGF-Ⅰ表达量有逐渐降低趋势;皮质D+20%Xy组较DC组降低(P<0.01)且已与NC组无差异,髓质三个D+Xy组的IGF-Ⅰ表达量介于NC组、DC组之间。糖尿病大鼠在口服不同浓度木糖醇8 w后血糖与肾脏IGF-Ⅰ的表达量高度相关,r皮质=0.981(P=0.019),r髓质=0.998(P=0.002)。当血糖t∈28～35 mmol/L,皮质/髓质回归曲线方程可分别表示为y=186.036-705.932/t(R2=0.977,P=0.012),y=122.038+13.157 l nt(R2=0.997,P=0.002)。结论口服一定剂量木糖醇可稳定血糖及抑制肾脏IGF-Ⅰ表达,具有一定保护肾脏的作用。

正丁醇法制备大鼠脂肪组织细胞膜TSHR

目的:利用正丁醇对大鼠脂肪组织细胞膜上的促甲状腺素受体(TSHR)进行提纯,以获得膜受体的均一水溶性溶液。方法:使用差速离心法获得大鼠含TSHR脂肪组织细胞膜碎片后,用正丁醇进一步提纯;采用SDS-PAGE和ELISA法鉴定所得蛋白完整性、生物学活性,并用BCA法测定相关蛋白含量。结果:正丁醇提纯的大鼠TSHR结构完整;经正丁醇提纯后的TSHR包被酶标孔孔间测定值变异系数较未经正丁醇提取组以及阳性对照组低。结论:经正丁醇提纯后的大鼠TSHR可以满足临床ELISA法检测Graves病患者血清TRAb的要求,同时可以降低酶标孔间测定值的误差。

人类白细胞Ⅰ、Ⅱ类抗原的中分辨度基因芯片分型技术研究

目的应用基因芯片技术进行北方汉族人群人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ、Ⅱ类中分辨度分型研究。方法根据中国北方汉族人群HLA-Ⅰ、Ⅱ类常见的基因位点以及临床应用中对分型分辨度的实际需要,设计特异性寡核苷酸中分辨度分型探针,制成基因分型芯片。采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交。杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型。共检测30份临床样本。结果所有样本的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原基因分型均获成功。此中分辨度探针可分辨出598个Ⅰ类抗原等位基因,511个Ⅱ类抗原等位基因,可捡出Ⅰ抗原特异性57个,Ⅱ抗原特异性30个。结论基因芯片用于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原分型可行。

口服木糖醇对糖尿病大鼠血糖及肾脏胰岛素样生长因子Ⅰ的影响及机制的探讨

目的检测口服木糖醇对实验性1型糖尿病模型大鼠血糖及肾脏胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-I)表达的影响,探讨口服木糖醇对于糖尿病大鼠肾脏的影响及机制。方法链脲佐菌素(STZ)一次性尾静脉注射造1型糖尿病大鼠模型,将成模的大鼠随机分为四组:糖尿病对照组(DC组)、糖尿病5%木糖醇喂养组(D+5%Xy组)、糖尿病10%木糖醇喂养组(D+10%Xy组)、糖尿病20%木糖醇喂养组(D+20%Xy组)。另外设置正常对照组(NC组)。实验前留取各组血糖测定结果。喂养中分别在饲料中添加不同比例的木糖醇。于实验第4周末处死动物,处死前测量血糖。通过SABC免疫组织化学方法检测各组大鼠肾脏IGF-I蛋白的表达水平。结果模型制备后,成模的大鼠血糖高于NC组,差异有显著性(P<0.05)。差异性喂养4周后,各糖尿病组大鼠血糖仍高于NC组(P<0.05),但D+20%Xy组较DC组的血糖下降,差异有显著性(P<0.05)。肾皮质、髓质IGF-I的基础表达量不同(P<0.01),但变化趋势一致,除D+20%Xy外,其他DM组较NC组均增高,差异有显著性(P<0.01);与DC组相比,D+5%Xy组肾脏皮质IGF-I表达增高(P<0.01),D+10%Xy组、D+20%Xy组降低,且D+20%Xy组表现出差异显著性(P<0.01)。结论口服木糖醇可调节糖尿病大鼠血糖水平,通过调节IGF-I表达进而影响肾脏功能。

甲状腺素对甲状腺功能减低大鼠子代脑组织中同源盒基因Nkx6．1 mRNA表达的影响

目的通过对妊娠期甲状腺功能减低（简称甲低）大鼠补充甲状腺素，探讨妊娠不同时间补充不同剂量甲状腺素对子代大鼠脑组织中同源盒基因Nkx6．1 mRNA表达的影响。方法1月龄Wistar大鼠240只，雌雄各半，体质量100—120g。按体质量将雌性大鼠随机分为8组：对照组，甲低组，甲低孕鼠妊娠早期（1～17d）补充甲状腺素（妊早甲低）高、中、低剂量组，甲低孕鼠妊娠晚期（18～20d）补充甲状腺素（妊晚甲低）高、中、低剂量组，每组15只。高、中、低剂量组每天补充的甲状腺素分别为3．5、2．0、0．5μg／100g体质量。8组大鼠均饲以重度缺碘地区粮食配制的饲料，对照组饮用含碘200μg／L的碘酸钾溶液，7个甲低组饮用去离子水。雄性大鼠用正常食料饲养，3个月后按1：1交配。8组大鼠分别取孕17d、新生、生后20d子代大鼠脑组织，采用实时荧光定量PCR法检测脑组织中Nkx6．1 mRNA表达。结果①成功建立了甲低动物模型，8组大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4组间比较差异有统计学意义（F值分别为4．08、31．99、5．79、26．34，P均〈0．01）。②在孕17d、新生、生后20d，Nkx6．1 mRNA表达组间比较差异有统计学意义（F值分别为758．720、1121．589、144．716，P均〈0．01）；组内不同时间比较差异有统计学意义（F值分别为2898．863、325．605、716．285、56．329、236．727、196．678、7115．752、9152．306，P均〈0．01）。③时间因素和剂量因素对Nkx6．1 mRNA表达有影响（F值分别为1176．655、246．530，P均〈0．01）；时间与剂量因素间存在交互作用（F=1249．934，P〈0．01）。④在孕17d、新生、生后20d，甲低组Nkx6．1 mRNA表达与对照组比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）。⑤在新生、生后20d，6个甲低补充甲状腺素组Nkx6．1 mRNA表达与甲低组比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）。⑥在孕17d、新生、生后20d，除妊早甲低中剂量组外，其余5个甲低补充甲状腺素组Nkx6．1 mRNA表达与对照组比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）。⑦在孕17d、新生、生后20d，妊早甲低高、低剂量组Nkx6．1 mRNA表达与中剂量组比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）；在孕17d、生后20d，高剂量组与低剂量组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。⑧在新生和生后20d，妊晚甲低组组间Nkx6．1 mRNA表达比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）。结论甲低孕鼠子代大鼠脑组织同源盒基因Nkx6．1的表达受补充甲状腺素剂量及时间影响。