血管内皮生长因子小干扰RNA对氧诱导视网膜病变中视网膜新生血管的抑制作用

背景特异性地抑制视网膜中血管内皮生长因子（VEGF）的过度表达，有望成为有效抑制新生血管的方法。RNA干扰（RNAi）可高效、特异地抑制体内特定基因的表达，眼局部应用小干扰RNA（siRNA）对身体其他组织基因的干扰小。目的探讨在小鼠氧诱导视网膜病变（OIR）模型中VEGF的siRNA对视网膜中VEGF和新生血管的抑制作用。方法设计并体外合成表达VEGFsiRNA的质粒[psi—HITM／增强型绿色荧光蛋白（EGFP）／VEGFsiRNA]。小鼠血管瘤内皮（EOMA）细胞在不含抗生素的DMEM培养液中进行培养，细胞融合达70％时分为5个组：空白对照组培养孔培养基中无任何添加物，阴性对照组培养孔板内加入1μlLipofectamine TM2000和空质粒psi—HITM／EGFP，3个siRNA组中分别在培养孔板内加入1μl Lipofeetamine TM 2000＋40、50、60nmol／L质粒psi—HJTM／EGFP／VEGFsiRNA。分别利用实时定量PCR（real—timePCR）和Westernblot法检测EOMA细胞中VEGFmRNA和蛋白的表达，以筛选最佳干扰效率的VEGFsiRNA浓度。64只出生7d的C57BL／6J小鼠采用随机数字表法随机分为正常对照组（在正常氧环境中喂养）、模型对照组（不进行玻璃体腔内注射）、空质粒组和siRNA组，其中后3个组小鼠在氧体积分数（75±2）％的氧箱内饲养5d，然后置于正常氧环境中制备OIR动物模型。空质粒组和siRNA组于出生后12d（P12）小鼠玻璃体腔内分别注射psi—HI。”／EGFP和Lipofectamine…2000各0．5斗l混合物及psi—HITM／EGFP／VEGFsiRNA（60nmol／L）和LipofectamineTM2000各0．5μl混合物，各组P17小鼠经高相对分子质量荧光素（FITC—dextran）灌注后制备视网膜铺片、视网膜切片和视网膜标本，分别观察视网膜新生血管的变化及突破内界膜新生血管内皮细胞数，应用real—timePCR和Westernblot法检测视网膜中VEGFmRNA及其蛋白的表达。结果体外细胞转染实验表明，空白对照组、阴性对照组及40、50、60nmol／LsiRNA转染组EOMA细胞中VEGFmRNA和蛋白表达的总体比较差异均有统计学意义（F=148．890，P〈0．001；F=306．960，P〈0．001），各浓度siRNA组细胞中VEGFmRNA表达均明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（t=73．950、119．890、156．480，均P〈0．001）。各浓度siRNA组细胞中VEGF蛋白的表达明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（t=15．452、23．344、42．119，均P〈O．001），以60nmol／LsiRNA组作用最强。动物实验结果表明，与模型对照组和空质粒组比较，siRNA组小鼠视网膜无灌注区和新生血管丛明显减少，突破内界膜血管内皮细胞的细胞核数减少。正常对照组、模型对照组、空质粒组和siRNA组小鼠视网膜中VEGFmRNA的相对表达量分别为1．23-＋0．18、4．02±0．16、3．98±O．19、1．98±0．12，总体差异有统计学意义（F=369．780，P〈0．001），其中模型对照组和空质粒组VEGFmRNA表达明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（t=37．880、37．336，P〈0．001），而siRNA组小鼠视网膜VEGFmRNA的表达较正常对照组下降50．8％，差异有统计学意义（t=10．183，P〈0．001），siRNA组小鼠视网膜VEGF蛋白的表达量较模型对照组下调68．0％，差异有统计学意义（t=11．473，P〈0．001），但仍高于正常对照组，差异有统计学意义（t=2．422，P〈0．001）。结论VEGFsiRNA可在体外和体内有效下调视网膜中VEGF的表达，抑制视网膜新生血管的形成。

严重药物过敏反应后暴发1型糖尿病误诊为类固醇糖尿病一例报道

药物过敏不仅可引起广泛的皮损，如剥脱性皮炎、Stevens-Johnson综合征、中毒性表皮坏死松解症等，还可出现发热、淋巴结肿大等症状。随着病毒学、细胞免疫学及分子遗传学的发展，学者们发现药物过敏还可以诱发多种疾病，现报道药物过敏反应后暴发1型糖尿病（fulminant type 1 diabetes，F1D）一例。