负载泼尼松龙牛奶外泌体治疗杜兴肌肉萎缩症的研究

目的:探究牛奶外泌体(mEXO)减少泼尼松龙(PSL)治疗杜兴肌肉萎缩症(DMD)的药物不良反应的效果。方法:将超速离心法收集的mEXO与PSL共孵育得到生物纳米药物(mEXO_(PSL));通过高效液相色谱(HPLC)检测药物装载效率;对DMD模型mdx小鼠给予口服治疗;监测mdx小鼠体重和体长变化,评估mEXO减轻PSL引起的生长抑制不良反应的效果,利用苏木素-伊红(HE)染色和micro-CT分析骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁间隙(Tb.Sp)等骨密度相关指标,评估mEXO减轻PSL引起的骨质疏松不良反应的效果;利用HE染色和CD68免疫组织化学染色检测肌肉病理情况及炎症浸润情况,评估mEXO_(PSL)的治疗效果。结果:通过共孵育可实现54.6%PSL在mEXO的负载;mdx小鼠经治疗后,与PSL组相比,mEXO_(PSL)组mdx小鼠体重(P<0.01)及体长(P<0.01)显著增加;与PSL组相比,mEXO_(PSL)组mdx小鼠的BV/TV(P<0.01)、Tb.N(P<0.01)和Tb.Th(P<0.05)显著增加,Tb.Sp(P<0.05)显著减少;与生理盐水组相比,PSL组和mEXO_(PSL)组肌肉病理以及炎症浸润均显著改善。结论:mEXO_(PSL)显著减少了mdx小鼠的生长抑制及骨质疏松药物不良反应,对PSL进行了药物改良。

B族维生素对肌肉萎缩小鼠PMO运输效率的影响

目的:探究B族维生素对反义寡核苷酸药物磷酸二胺吗啉代寡核苷酸(PMO)在DMD治疗中运输效率的影响以及药物安全性评价。方法:通过对成年的杜兴肌肉萎缩症(DMD)模型mdx小鼠胫骨前肌分别局部注射PMO和各种维生素的混合液,利用免疫荧光(IF)和Western印迹检测dystrophin蛋白表达情况,评估各维生素对PMO作用效果的影响;通过尾静脉注射PMO和维生素B12的混合液,相同方法检测维生素B12对PMO治疗效果的影响,同时利用苏木素-伊红组织染色(HE)技术检测组织病理情况,评估维生素B12联合PMO治疗的安全性。结果:在mdx小鼠局部给药实验中,比较不同的B族维生素对PMO药效影响时,发现维生素B12对PMO的促进效果最佳(t=8.015,P<0.01);随后选择维生素B12与PMO混合对mdx小鼠进行系统治疗时,相比于PMO生理盐水组,发现维生素B12能够在胫骨前肌(t=9.631,P<0.01)和股四头肌(t=8.452,P<0.01)上明显提高PMO的系统治疗效果,同时对mdx小鼠不产生肌肉不良反应。结论:维生素B12作为营养补充剂能够显著提高PMO在mdx小鼠上的局部治疗效果,但系统治疗效果有限,且对小鼠肌肉组织无损伤。