NLRP3在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系

目的评价核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只,6~8周龄,体质量18~22 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+NLRP3抑制剂MCC950组(SAE+MCC950组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+MCC950组小鼠造模后1 h时腹腔注射MCC95020 mg/kg,余组注射等容量生理盐水。造模后1 d时行旷场实验,记录站立次数和中央区停留时间;造模后2~3 d行新物体识别实验,记录探索指数。造模后3 d行为学实验结束后,处死小鼠取脑海马组织,采用Western blot法检测NLRP3的表达,采用免疫荧光技术计数NLRP3与小胶质细胞特异性离子钙结合衔接分子1(Iba-1)共表达细胞,采用ELISA法检测caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量。结果与Sham组比较,SAE组和SAE+MCC950组站立次数减少,中央区停留时间缩短,探索指数降低,海马NLRP3表达上调,NLRP3^(+)-Iba-1^(+)细胞计数增加,caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量升高(P<0.05);与SAE组比较,SAE+MCC950组站立次数增多,中央区停留时间延长,探索指数升高,NLRP3表达下调,NLRP3^(+)-Iba-1^(+)细胞计数减少,caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量降低(P<0.05)。结论NLRP3参与了小鼠脓毒症相关性脑病的发生,与其介导小胶质细胞焦亡有关。

电针对脓毒症相关性脑病小鼠海马神经元钙稳态的影响

目的探讨电针对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马神经元钙稳态的影响。方法健康成年雄性C57BL/6J小鼠24只,体质量18~22 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(Sham组)、SAE组、SAE+电针组(SAE+EA组)和SAE+假电针组(SAE+SEA组)。小鼠海马CA1区注射携带Ca^(2+)荧光探针的病毒和植入光纤,以记录Ca^(2+)荧光信号。3周后采用盲肠结扎穿孔法建立SAE模型。术前3 d时开始,SAE+EA组选取百会、双侧曲池和双侧足三里穴进行30 min/d连续7 d的电针刺激。SAE+SEA组在相应穴位旁开2 mm处针刺,但不进行电刺激。术后5 d时行旷场实验,记录站立次数和站立时海马CA1区神经元Ca^(2+)信号变化。术后6~7 d时行新物体识别实验,记录探索时间和探索新事物时海马CA1区神经元Ca^(2+)信号变化。术后7 d行为学实验结束后,处死小鼠将光纤植入侧脑组织,荧光显微镜下观察并测定海马CA1区神经元Ca^(2+)荧光强度。结果与Sham组比较,SAE组和SAE+SEA组站立次数减少,站立时海马CA1区神经元Ca^(2+)信号幅值降低(P<0.05),SAE+EA组上述指标差异无统计学意义(P>0.05),SAE组、SAE+EA组和SAE+SEA组探索指数和探索新事物时海马CA1区神经元Ca^(2+)信号幅值降低,神经元Ca^(2+)荧光强度增强(P<0.05);与SAE组和SAE+SEA组比较,SAE+EA组站立次数增加,站立时海马CA1区神经元Ca^(2+)信号幅值升高,探索指数和探索新事物时海马CA1区神经元Ca^(2+)信号幅值升高,神经元Ca^(2+)荧光强度减弱(P<0.05);SAE组和SAE+SEA组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针减轻小鼠SAE的机制可能与调节海马神经元Ca^(2+)稳态有关。