电针对输尿管镜碎石取石术中丙泊酚半数有效浓度的影响

电针是针灸技术的改良,是以一定的频率和强度对穴位施以电刺激,通过中枢神经系统释放多种介质和内源性阿片类物质,起到镇静镇痛、增强麻醉效应和调节生理机能的作用,常作为1种辅助麻醉方式应用于临床^（[1^5]）在针刺辅助丙泊酚麻醉时,有关其对靶控输注（target controlled infusion,TCI）丙泊酚半数有效浓度（ED50）的影响报道甚少。

一氧化碳对脂多糖诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响

目的探讨一氧化碳(CO)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响及可能机制。方法用含有10%胎牛血清的细胞培养基,在37℃、5%CO2细胞培养孵箱内培养大鼠肺巨噬细胞,采用随机数字表法将其分为4组(n=10):空白对照组(C组)、CO组、LPS组、LPS+CO组。CO组加入体外一氧化碳释放分子-2(CORM-2)100μmol/L孵育,LPS组加入LPS 10 mg/L,LPS+CO组加入CORM-2 100μmol/L预处理1 h后加入LPS 10 mg/L孵育,C组加入等量PBS液作为对照。每组细胞处理完毕后继续孵育24 h,采用MTT法测定细胞活力;流式细胞仪测定细胞凋亡率和线粒体膜电位;ATP酶含量试剂盒测定细胞内ATP含量;RT-PCR法测定细胞中线粒体分裂相关蛋白Drp1的m RNA含量;Western blot法测定Drp1的蛋白表达。结果与C组相比,LPS组和LPS+CO组细胞活力、ATP含量和线粒体膜电位下降,细胞凋亡率、线粒体分裂蛋白Drp1 m RNA及蛋白表达增加(P<0.05),CO组上述指标比较差异无统计学意义;与LPS组比较,LPS+CO组细胞活力、ATP含量和线粒体膜电位增加(P<0.05),细胞凋亡率、Drp1 m RNA及蛋白表达减少(P<0.05)。结论 CO可减轻LPS诱导的大鼠肺巨噬细胞损伤,其机制与下调线粒体分裂相关蛋白Drp1和改善线粒体功能有关。

α7nAChR在电针减轻大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用:与JAK2/STAT3信号通路的关系

目的评价α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)在电针减轻大鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中的作用及其与Janus激酶2信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系。方法清洁级健康雄性SD大鼠60只,体重200~220g,8周龄,采用随机数字表法分为6组(n=10):对照组(C组)、ALI组、电针+ALI组(EA组)、α7nAChR拮抗剂α-银环蛇毒素(α-BGT)+ALI组(BA组)、电针+α-BGT+ALI组(EBA组)和非经非穴+ALI组(SEA组)。采用静脉注射脂多糖(LPS)5mg/kg的方法制备大鼠内毒素性ALI模型。EA组和EAB组于模型制备前1~4d(刺激时间9:00至10:00,30min/次,1次/d)及模型制备过程中电针刺激双侧足三里及内关穴(刺激强度以大鼠肢体出现微颤为宜,疏密波频率2/15Hz,波宽0.2~0.5ms,电流强度1-2mA。SEA组以相同电针参数刺激足三里穴及内关穴旁开0.5cm非经非穴处。于模型制备前30min BA组和EBA组腹腔注射α-BGT 1μg/kg。给予LPS后6h时处死大鼠取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,确定肺湿/干重(W/D)比值,采用ELISA法确定肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量,Western blot法检测α7nAChR、磷酸化JAK2(p-JAK2)及磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平。结果与C组比较,余5组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调(P<0.05);与ALI组比较,EA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量降低,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调,BA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(P<0.05),SEA组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与EA组比较,EBA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(P<0.05)。结论α7nAChR表达上调激活JAK2/STAT3信号通路参与了电针减轻大鼠内毒素性ALI的过程。

p38MAPK信号通路与LPS致大鼠肺泡上皮细胞线粒体分裂的关系:离体实验

目的采用离体实验评价p38分裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路与LPS致大鼠肺泡上皮细胞线粒体分裂的关系。方法将传代培养的肺泡上皮细胞以2×10^5个/ml的密度铺于96孔板中,200μl/孔,达到80%融合后,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、LPS组、LPS+SB203580组(LPS+SB组)和LPS+二甲基亚砜组(LPS+DMSO组)。LPS组给予LPS10μg/ml孵育24h;LPS+SB组给予p38MAPK抑制剂SB20358010μmol(用二甲基亚砜溶解)孵育1h,再给予LPS10μg/ml孵育24h;LPS+DMSO组给予等容量二甲基亚砜孵育1h,再给予LPS10μg/ml孵育24h。测定MDA含量和SOD活性,采用Westernblot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、血红素加氧酶-1(HO-1)、发动蛋白相关蛋白1(DRP1)和分裂相关蛋白1(FIS1)的表达水平。结果与C组比较,LPS组、LPS+SB组和LPS+DMSO组MDA含量升高,SOD活性降低,p-p38MAPK、HO-1、FIS1和DRP1表达上调(P<0.05);与LPS组比较,LPS+SB组MDA含量升高,SOD活性降低,p-p38MAPK和HO-1表达下调,FIS1和DRP1表达上调(P<0.05),LPS+DMSO组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论p38MAPK信号通路激活可上调HO-1表达,从而减轻LPS致大鼠肺泡上皮细胞线粒体分裂。

PI3K/Akt信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳上调线粒体融合蛋白中的作用

目的 评价1-磷酯酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳(CO)上调线粒体融合蛋白表达中的作用.方法 将肺泡上皮细胞用含10%胎牛血清的1%青链双抗F12K完全培养基于37℃、5%CO2的培养箱中培养,采用随机数字表法分为10组(n=5):对照组(C组);内毒素组(L组)向培养基中加入10 μg/ml脂多糖(LPS);LPS+外源性CO释放剂CORM-2组(L+CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+PI3K抑制剂LY294002组(L+ LY组)向培养基中加入25 μmol/LLY294002,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+外源性CO释放剂CORM-2+ PI3K抑制剂LY294002组(L+CO+LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002,1h后向培养基中加入CORM-2 100μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+无活性的CO释放剂iCORM-2组(L+iCO组)向培养基中加入iCORM 100 μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+二甲基亚砜(DM-SO)组(L+D组)向培养基中加入等浓度DMSO,1h后加入1μg/ml LPS;外源性CO释放剂CORM-2组(CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L;PI3K抑制剂LY294002组(LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002;外源性CO释放剂CORM-2+PI3K抑制剂LY294002组(CO+LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002,1 h后向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L.孵化24h后收集细胞,检测MDA含量和SOD活性,采用Western blot法检测血红素氧合酶-1(HO-1)、磷酸化Akt(p-Akt)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、Mfn2和视神经萎缩蛋白1(OPA1)的表达.结果 与C组比较,L组、L+CO组、L+LY组、L+CO+LY组、L+iCO组、L+D组MDA含量升高,SOD活性降低,L组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调(P<0.05);与L组比较,L+CO组MDA含量降低,SOD活性升高,L+LY组MDA含量升高,SOD活性降低,L+CO组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调,L+LY组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达下调(P<0.05);与L+CO组比较,L+CO+LY组MDA含量升高,SOD活性降低,HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达下调(P<0.05).结论 内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时CO上调线粒体融合蛋白表达的机制与激活PI3K/Akt信号通路有关.

PKCα/HO-1信号通路在LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用:与线粒体融合的关系

目的评价蛋白激酶Cα/血红素氧合酶-1(PKCα/HO-1)信号通路在LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用及其与线粒体融合的关系。方法肺泡Ⅱ型上皮细胞以2×10^5个/ml密度接种于96孔培养板,采用随机数字表法分为5组(n=40):对照组(C组)、Go6976组(G组)、内毒素组(L组)、内毒素+Go6976组(LG组)和内毒素+二甲基亚砜组(LD组)。LG组加入Go69765μmol/L,LD组加入等容量0.1%二甲基亚砜,30min后L组、LG组和LD组分别加入LPS10μg/ml制备肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤模型,G组加入Go6976 5μmol/L,C组加入等容量PBS。各组均孵育24h后收集细胞,检测丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用q-PCR法及Westernblot法测定细胞PKCα、HO-1以及线粒体融合蛋白1(Mfn1)、Mfn2和视神经萎缩蛋白1(OPA1)及其mRNA的表达水平。结果与C组比较,L组、LG组和LD组MDA和ROS含量升高,SOD活性降低,PKCα、HO-1及其mRNA的表达上调,Mfn1、Mfn2和OPA及其mRNA的表达下调(P<0.05),G组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与L组比较,LG组MDA和ROS含量升高,SOD活性降低,PKCα、HO-1、Mfn1、Mfn2和OPA1及其mRNA的表达下调(P<0.05),LD组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论PKCα/HO-1信号通路激活是LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的内源性保护机制,可能与促进线粒体融合有关。