在A549细胞中靶向p66^(Shc)shRNA的沉默效应

目的:在人非小细胞肺癌细胞A549细胞中探讨shRNA靶向慢病毒对信号衔接蛋白p66Shc的沉默效应,以更好地研究p66Shc的功能。方法:半定量RT-PCR和Western blot检测p66Shc下调后的变化情况,BrdU标记实验检测细胞的增殖变化情况。结果:在A549细胞中,运用p66Shc-shRNA干扰可以实现p66Shc在mRNA和蛋白水平的下调作用,同时发现A549细胞的增殖显著降低。结论:经过慢病毒载体介导的p66Shc-shRNA在人非小细胞肺癌A549中可获得高效转染效果,并能产生特异性的基因沉默效应,而且对细胞的增殖有显著的抑制作用,为进一步研究p66Shc功能提供了实验手段。

在人类非小细胞肺癌细胞A549中沉默K-Ras降低自噬水平

目的:在人的非小细胞肺癌细胞A549中通过降低K-Ras表达研究其在自噬中的作用。方法:磷酸钙方法转染K-Ras-shRNA,Western blot检测自噬标志物的变化。结果:在A549细胞中,通过K-Ras-shRNA慢病毒转染显著地降低了K-Ras的蛋白水平,同时自噬标志物LC3II水平降低,自噬调控分子Beclin-1水平降低。结论:K-Ras knockdown引起细胞自噬水平的降低。

转录因子CTCF抑制pro-B细胞中Igκ基因的重排

目的:研究CCCTC位点结合蛋白(CTCF)对Igκ基因重排的影响。方法:采用RNA干扰技术特异性地下调CTCF的表达,然后利用脂多糖(LPS)诱导祖B细胞(pro-B cell)38B9的分化。利用PCR来定量分析不同的Vκ基因hf24和Vκ21G的重排情况。结果:CTCF在38B9细胞中表达下调后hf24和Vκ21G的重排都有所上升。结论:在pro-B细胞中CTCF对Igκ基因的重排起抑制作用。