激活素A对RAW264.7巨噬细胞活性的调节作用

目的探讨激活素A对参与炎症反应的小鼠巨噬细胞活性调节作用。方法以LPS刺激活化的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞作为阳性参照,ELISA法检测激活素A及LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7细胞IL-1β分泌水平,还原酶法分析NO分泌水平,RT-PCR检测IL-1β和iNOS mRNA的表达,瑞氏染色检测RAW264.7细胞吞噬活性。结果在激活素A刺激下RAW264.7细胞IL-1β和NO分泌水平均明显升高,IL-1β和iNOS mRNA表达亦增加,巨噬细胞吞噬活性增强;激活素A和LPS共刺激RAW264.7细胞时,激活素A明显抑制LPS刺激的RAW264.7细胞IL-1β和NO产生水平,以及IL-1β和iNOSmRNA表达,巨噬细胞吞噬活性也明显低于LPS单独刺激组。结论激活素对巨噬细胞的活性调节具有双重作用,这种作用与巨噬细胞的激活状态有关。

雌激素受体β在乳腺癌他莫昔芬内分泌治疗耐药中的作用

目的:探讨雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)的表达与乳腺癌他莫昔芬(tamoxifen,TAM)内分泌治疗耐药的相关性及其机制。方法:以前期构建的ERα/ERβ不同表达的人乳腺癌MCF-7细胞株[M/HK(阴性对照)、M/siα(ERαlow/ERβhigh)、M/siβ(ERαhigh/ERβlow)细胞]为研究对象,MTT法评估乳腺癌细胞对TAM的耐药性;用半定量RT-PCR法检测细胞中耐药相关基因MDR1、TOPOⅡ、LRP和GST-π的mRNA表达水平,用Western blotting法检测细胞中耐药相关信号通路MAPK、PI3K/Akt的p-ERK、p-Akt蛋白表达水平。结果:与对照组MCF-7细胞相比,MCF-7细胞中的ERβ高表达可促进高浓度TAM(1、5、10μmol/L)对MCF-7细胞增殖的抑制作用[(45.788±1.641)%vs(24.288±1.170)%,(57.899±1.583)%vs(31.499±1.978)%,(59.853±1.648)%vs(38.039±1.482)%;均P<0.05)],该抑制作用与TAM浓度呈剂量依赖性。ERβ高表达可显著抑制MCF-7细胞耐药基因MDR1、TOPOⅡ、LRP的mRNA表达水平(0.431±0.032 vs 0.932±0.083,0.234±0.008 vs 0.391±0.002,0.47±0.028 vs 0.586±0.036;均P<0.05);可显著下调Akt和ERK蛋白的磷酸化水平(0.224±0.006 vs 0.437±0.007,0.367±0.015 vs 0.756±0.039;均P<0.05)。结论:ERβ表达水平可影响乳腺癌细胞MCF-7对TAM的耐药性,该作用机制可能与耐药基因的表达及PI3K/AKT、MAPK信号通路激活有关。

白细胞计数和C-反应蛋白对创伤患者细菌感染的诊断价值

感染是最常见的致病因素,创伤后合并细菌感染的发病率及病死率居高不下[1]。细菌培养是诊断细菌感染的金标准,但其培养时间长,不利于感染的早期诊断和治疗。白细胞（WBC）计数、C-反应蛋白（CRP）检测是临床上细菌感染的鉴别诊断指标。作者分析了这两个指标与细菌感染的关系,以寻找诊断细菌感染较为早期和敏感的检测指标。

抑癌基因PTEN与乳腺癌的研究进展

抑癌基因PTEN/MMAC1/TEP1的表达异常较多见于乳腺癌 ,PTEN基因失活与乳腺癌的发病机理 ,浸润转移 ,恶性转化 ,无限制生长及临床预后有一定关系。PTEN蛋白的表达随乳腺癌病情的进展而降低 ,PTEN蛋白的低表达与乳腺癌的不良预后有关。本文综述了PTEN的结构、功能。

糖尿病大鼠甲状腺组织超微结构的病理变化及胰岛素、氨基胍的干预作用

目的探讨糖尿病(DM)大鼠甲状腺组织超微结构的病理变化及胰岛素、氨基胍的干预作用。方法链脲佐菌素制备DM模型大鼠87只,随机分为DM组27只、胰岛素干预组32只、氨基胍干预组28只,成模12周、20周末杀检,取甲状腺组织行超微病理检查。另取25只正常Wistar大鼠作正常对照。结果DM大鼠甲状腺滤泡上皮细胞呈扁平状,微绒毛缺失,粗面内质网扩张呈不规则囊泡状,未见胞饮泡,偶见初级和次级溶酶体。滤泡腔扩大,腔内类胶质电子密度较高。间质水肿,微血管基底板阶段性增厚,可见蛋白样物质沉积,呈细颗粒状、云絮状或均质状。甲状腺滤泡旁细胞增多,胞质内含内分泌颗粒较少。胰岛素和氨基胍干预组甲状腺组织超微结构较DM组有不同程度的减轻。结论DM大鼠甲状腺滤泡上皮细胞呈功能低下的表现,滤泡腔间质有大量蛋白样物质沉积,甲状腺滤泡旁细胞增多可能与高血糖毒性的作用有关。胰岛素和氨基胍干预有一定的治疗作用。

ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7中对IL-1β分泌的抑制作用

研究ARIP2在巨噬细胞中对IL-1β分泌的调节作用,探讨激活素A与巨噬细胞活化的可能关系及其作用机制。为了分析ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中的表达及其生物学作用,实验采用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中ARIP2 mRNA的表达,ELISA方法观察过表达ARIP2对RAW264.7细胞分泌IL-1β的影响。RAW264.7细胞能够表达特异性ARIP2 mRNA,其RNA表达受激活素A刺激呈剂量依赖性增加。ELISA检测结果显示过表达ARIP2可以抑制RAW264.7细胞分泌IL-1β。上述资料提示ARIP2不仅具有抑制激活素诱导的特异基因转录活性,其自身也具有多种生物学活性,可能在激活素A抑制LPS活化巨噬细胞分泌IL-1方面,发挥关键性信号转导调控作用。

人绒毛膜促性腺激素对人PBMC产生MIF的影响

目的:探讨人绒毛膜促性腺激素(hCG)对人外周血单核细胞(PBMC)产生巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的影响。方法:分离正常人PBMC,体外加入不同浓度的hCG,在37℃5%CO2条件下培养一定时间收获细胞或加入一定浓度的hCG,同样条件下培养,在不同时间收获细胞,用荧光定量PCR方法检测MIF mRNA转录水平。结果:在实验的hCG浓度范围内,MIF的转录水平随着hCG浓度增加而明显提高。在100U/mL的hCG作用下,MIF mRNA表达在培养的1～2h达到峰值,随后很快下降,至8h基本回到刺激前水平。结论:hCG在一定浓度范围内有促进MIF mRNA转录的作用,且在本实验筛选浓度下,MIF mRNA转录水平与作用时间相关,提示hCG可通过促进PBMC分泌细胞因子参与一定的免疫调节作用。

人绒毛膜促性腺激素对人PBMC IL-8mRNA表达的影响

目的:探讨人绒毛膜促性腺激素(hCG)对人外周血单个核细胞(PBMC)IL-8基因表达的影响。方法:分离正常人PBMC,体外加入或不加hCG,37℃5%CO2条件下培养8h,收获培养细胞,用荧光定量PCR方法检测IL-8mRNA表达水平。结果:在使用的hCG浓度范围内,IL-8的表达水平随着hCG剂量增加而明显提高。而在hCG100U/mL的作用下,IL-8mRNA表达在培养8h达到峰值,随后逐渐下降,至24h降到最低水平。结论:hCG可通过促进PBMC分泌细胞因子参与一定的免疫调节作用。

hTERT启动子的克隆及在MCF7乳腺癌细胞中的特异转录活性

背景与目的利用肿瘤特异性启动子增强肿瘤细胞中治疗基因的转录选择性是达到基因治疗靶向性的有效途径。人端粒酶催化亚基(hTERT)在大部分肿瘤细胞中呈特异性高表达[1-2],有可能成为肿瘤特异性启动子。本文扩增了hTERT基因启动子并分别克隆于报告基因重组质粒pEGFP-1和pGL3-Basic,检测并证实hTERT启动子在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性。方法采用套式PCR法扩增hTERT启动子,将其分别克隆到含报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒pEGFP-1和含Luciferase的重组质粒pGL3-Basic,经脂质体分别转染人乳腺正常上皮细胞系HBL100和乳腺癌细胞MCF7,荧光显微镜观察EGFP的表达情况,并测定两种细胞中荧光素酶转录表达差异。结果与正常细胞HBL100相比,hTERT启动子在MCF7细胞呈现强的绿色荧光表达;荧光素酶活性检测与其一致,hTERT启动子在MCF7乳腺癌细胞的荧光素酶相对活性RLU/U值(33784)约相当于HBL100细胞中(2400)的15倍。结论hTERT启动子在乳腺癌MCF7细胞中具有很强的特异性,为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定实验基础。

pEGFP-CI-G3BP转染Hela细胞及其在细胞中的表达

目的:了解G3BP蛋白在细胞中的表达及定位。方法:利用脂质体lipofectamine2000将提取的质粒pEGFP-CI-G3BP转染进入Hela细胞,培养24h后荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达情况及其在细胞中的定位。结果:pEGFP-CI-G3BP质粒被成功转入Hela细胞内,转染后绿色荧光可高效表达,分布在细胞胞浆中。结论:脂质体法是一种高效的转染pEGFP-CI-G3BP的方法,表达的G3BP蛋白定位于细胞的胞浆部分。

TGF-β1抑制伤寒沙门菌诱导巨噬细胞RAW 264.7凋亡的实验研究

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β1在伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡过程中的调节作用。方法：ELISA检测伤寒沙门菌诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7培养上清中TGF-β1分泌水平,实时定量PCR检测伤寒沙门菌诱导小鼠巨噬细胞TGF-β1mRNA的表达,流式细胞术观察外源性TGF-β1对伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡的影响。结果：伤寒沙门菌感染组巨噬细胞TGF-β1的分泌和mRNA的表达水平显著高于对照组（P〈0.05）;伤寒沙门菌热杀死组、伤寒沙门菌感染组巨噬细胞凋亡率显著高于对照组（P〈0.05）,LPS＋伤寒沙门菌感染组的巨噬细胞凋亡率显著高于细菌脂多糖（LPS）组（P〈0.05）;1～100μg/L3个浓度的TGF-β1组的巨噬细胞凋亡率显著低于伤寒沙门菌感染组（P〈0.05）,并呈一定的剂量依赖关系。结论：伤寒沙门菌能够诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7表达TGF-β1,不同剂量的外源性TGF-β1能够抑制伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡的过程,提示TGF-β1在伤寒沙门菌诱导巨噬细胞的凋亡过程具有调节作用。

B7h分子与相关疾病

协同刺激分子在免疫应答中的作用日益受到关注,本文拟就B7家族新成员B7h的分子生物学特征及在自身免疫病中的作用作一综述。

异基因骨髓源间充质干细胞对BXSB小鼠T、B细胞的影响

目的:探讨异基因骨髓源间充质干细胞(Bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)对BXSB小鼠T、B细胞增殖、活化及功能成熟等方面的影响。方法:采用3H-TdR掺入法、FACS法、ELISA等方法检测BMSCs对BXSB小鼠T、B细胞的影响。结果:BALB/c小鼠的BMSCs在不影响BXSB小鼠T细胞诱导活化的基础上抑制其诱导增殖;可降低由ConA诱导的CD4+IL-4+细胞的数量,而提高由ConA诱导的CD4+IFN-γ+细胞数量。对于B细胞,BALB/c小鼠的BMSCs可以抑制其增殖、活化及IgG的分泌。另外,BALB/c小鼠的BMSCs可以抑制BXSB小鼠B细胞上CD40L的异位表达。结论:异基因BMSCs对自身免疫病小鼠的T、B细胞有一定的调节作用。

CD44抗体对卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞增殖的抑制作用

目的:观察抗CD44单克隆抗体A3D8对卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞增殖的作用,并初步探讨其作用机制。方法:用MTS法检测A3D8及顺铂(DDP)对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪法观察A3D8对卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞细胞周期的影响;彗星电泳法检测DNA损伤;通过Western blot法,进一步探讨A3D8作用于卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞后CDK2、cyclin A蛋白表达水平的变化。结果:A3D8作用于卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞后,细胞抑制作用明显增强(P<0.05),而且随着A3D8质量浓度的增加和时间的延长,抑制作用明显增强,与DDP联用,抑制率较单独用DDP增高;A3D8可将细胞周期阻滞于S期;A3D8作用于卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞24h后可引起DNA损伤;A3D8组CDK2、cyclin A蛋白表达水平明显降低。结论:A3D8可能通过阻滞细胞周期发挥抑制卵巢癌实体瘤源球形体形成细胞增殖的作用。

抗CD44mAbA3D8对卵巢癌球形体形成细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨抗CD44单克隆抗体(mAb)A3D8对3种卵巢癌球形体形成细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:用MTS法检测A3D8对细胞增殖的影响;采用PI染色及流式细胞仪检测A3D8对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测A3D8在细胞凋亡中的作用;用罗丹明123试剂盒检测A3D8对细胞线粒体膜电位的影响;并采用WesternBlotting法检测A3D8作用于3种卵巢癌球形体形成细胞后,CDK2、cyclinA、Bcl-2和caspase-3的改变。结果:A3D8可抑制3种卵巢癌球形体形成细胞的增殖,且此抑制作用呈现剂量和时间依赖性;A3D8可在阻滞S期的同时降低G0/G1期比例;A3D8可促进3种细胞凋亡,与顺铂(DDP)联用,细胞凋亡率较单独使用DDP增高;A3D8的处理可导致3种细胞的线粒体膜电位损失,CDK2、cyclinA、Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3表达上调。结论:A3D8可能是通过影响p21/CDK2/cyclinA途径阻滞细胞周期达到抑制3种卵巢癌球形体形成细胞增殖的结果,并且可通过线粒体途径促进细胞凋亡。

TNFSF15表达下调或缺失对卵巢癌组织中肿瘤新血管形成的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子超家族-15(TNFSF15)在人卵巢癌标本中的表达及在小鼠体内TNFSF15对卵巢癌血管生成及卵巢癌生长的影响。方法:应用免疫组化法检测正常组(12例)、卵巢癌组(94例)中TNFSF15的表达情况及微血管密度(MVD);雌性C57BL/6小鼠24只随机分为对照组、重组TNFSF15注射组(实验组)、TNFSF15-shRNA处理组(A组)、shRNA-对照组(B组),每组6只,各组均采用皮下注射ID8细胞制备小鼠荷瘤模型,实验组采用腹腔注射重组TNFSF15蛋白,A、B组采用TNFSF15-shRNA干扰其内源性表达的方法,通过检测小鼠肿瘤组织MVD值并测量肿瘤体积大小,观察其对小鼠卵巢癌细胞系ID8在小鼠C57BL/6体内血管生成及肿瘤生长的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织标本中TNFSF15表达显著降低(P<0.01),且Ⅲ/Ⅳ期TNFSF15阳性表达率较Ⅰ/Ⅱ期降低(P<0.05);实验组较对照组小鼠肿瘤组织中MVD值降低且肿瘤体积减小(P<0.05),而A组较B组MVD值升高且肿瘤体积增大(P<0.05)。结论:卵巢癌微环境中TNFSF15表达下调或缺失是肿瘤新血管形成的前提条件。

雌激素对大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎的影响

目的 研究雌激素在诱发实验性自身免疫性甲状腺炎 (EAT)形成中的影响。方法 10周龄Wistar大鼠进行双侧卵巢切除术后采用同种属SD大鼠甲状腺球蛋白 (Tg)免疫诱发EAT。病理切片HE染色观察甲状腺炎症反应。采用放免方法测定血清中E2 、PRL水平。间接酶联免疫吸附实验 (ELISA )测定血清Tg抗体 (TgAb)水平。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测甲状腺组织中γ 干扰素 (IFN γ)、白细胞介素 10 (IL 10 )mRNA的表达水平。结果 大鼠切除双侧卵巢后 ,其血清中雌二醇 ( 17.60± 1.0 2 )pmol/L和PRL( 2 .45± 0 .15 ) μg/L水平明显低于未切除卵巢组〔分别为 ( 5 8.5 6± 6.99) pmol/L和 ( 3 .2 2± 0 .17) μg/L〕(均P <0 .0 1) ,实验性自身免疫性甲状腺炎的发病率和甲状腺组织中炎细胞浸润程度也均较未切除卵巢直接诱发EAT组明显减轻 ,甲状腺组织中IFN γmRNA的表达水平 ( 0 .87± 0 .0 3 )较未切除卵巢直接诱发EAT组 ( 0 .99± 0 .0 0 )明显下降 (P <0 .0 5 ) ,而IL 10mRNA的表达水平 ( 0 .98± 0 .0 1)则高于未切除卵巢直接诱发EAT组 ( 0 .83± 0 .0 5 )。诱发为EAT的两组大鼠血清TGAb平均水平 ( 1.3 9± 0 .0 3 )明显高于非诱发EAT对照组的平均水平 ( 0 .18± 0 .0 0 )(P <0 .0 1)。

肝移植急性排斥患者血浆可溶性血栓调节蛋白和可溶性P-选择素检测的意义

血栓调节蛋白（TM）在移植物内皮细胞中表达，在内皮受损伤时其以可溶性形式快速释放人血，可溶性TM（sTM）可作为内皮细胞损伤的重要标志物。P-选择素（P-sel）主要分布于血小板α颗粒及内皮细胞weibel-Palade小体中。可溶性P—se（sP—sel）是血小板／血管内皮细胞活化的标志。本研究通过检测sTM、sP—sel以及凝血指标的变化，以探讨其在肝脏移植排斥中的应用价值。

沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染诱导肺组织中性粒细胞浸润及活化

目的：探讨小鼠沙眼衣原体肺炎感染中中性粒细胞（ polymorphonuclear neutrophils， PMN）的募集、活化及诱导其趋化的免疫学机制。方法 C57BL/6（C57）小鼠鼻腔吸入3×10^3 IFU（in-clusion-forming units）沙眼衣原体小鼠肺炎株（Chlamydia muridarum，Cm）建立小鼠沙眼衣原体肺炎模型。取感染后不同时间点小鼠肺组织进行组织病理学染色；通过检测肺组织内髓过氧化物酶（ myelo-peroxidase，MPO）的含量，检测 PMN 在肺组织聚集；分离小鼠肺组织单个核细胞，Giemsaˊs 染色计数肺组织炎症细胞种类；流式细胞术检测 CD11b^＋ Gr1^＋ PMN 细胞百分率及 CD11b^＋ PMN 活性水平；应用RT-PCR 技术检测 Cm 感染后肺组织内与 PMN 募集相关的趋化性细胞因子（MIP-2、LIX、KC、MCP-1）的表达，探讨小鼠 Cm 呼吸道感染过程中 PMN 趋化机制。结果一定剂量的 Cm 呼吸道吸入诱导C57小鼠衣原体肺炎，与对照组（感染第0天）比较，肺组织内有大量炎性细胞浸润，主要包括 PMN、单核细胞、淋巴细胞，其中 PMN 在肺内的聚集早于单核细胞；Cm 感染诱导小鼠肺组织 MPO 含量升高，在感染第7天达到高峰，第14天虽然有所下降，但仍明显高于对照组；流式结果显示，Cm感染后，CD11b^＋Gr1^＋细胞百分比、PMN 总数均显著高于对照组，同时 PMN CD11b 分子的表达在感染后也显著升高，说明 Cm 感染能诱导小鼠肺组织内 PMN 大量聚集并活化。RT-PCR 结果显示，Cm 感染后小鼠肺组织内与 PMN 募集相关的趋化性细胞因子（MIP-2、LIX、KC、MCP-1）的含量明显升高，提示Cm感染上调 PMN 相关趋化性细胞因子的表达，从而吸引大量 PMN 在肺部聚集参与炎症反应。结论一定剂量的 Cm 可以诱导感染小鼠肺组织内 PMN 相关趋化性细胞因子的分泌，从而使 PMN 在肺组织内大量浸润并活化，在抵抗衣原体感染中发挥重要作用。