浅谈开发《医学微生物学实验》CAI课件的制作思路

本文介绍了微生物实验CAI课件制作过程及所用软件性能的比较.

致肾盂肾炎大肠杆菌粘附素papG基因克隆及序列分析

目的 克隆F13型致肾盂肾炎大肠杆菌 (UPEC) 132株的粘附素基因papG并作序列分析。 方法 根据Ⅰ型papG(papGJ96 )和Ⅱ型 papG(papGIA2 )基因序列设计 3条引物 ,PG2和PG3分别为下游 3’端引物 ,PG1为两型papG上游 5’端共用引物 ,并在各引物 5’端加入限制性内切酶位点。以UPEC132染色体DNA为模板进行PCR扩增 ,将扩增产物克隆入质粒载体 ,筛选阳性重组质粒作序列分析。结果 UPEC132株以Ⅰ型 papG引物扩增时为阴性结果 ,以Ⅱ型 papG引物扩增时可获得约 110 0bp的DNA片段。扩增产物经克隆获得阳性重组质粒 pGC39和pGC10 3,对其序列分析显示 papG132编码337个氨基酸 ,与 papGJ96的同源性仅为 4 5 % ,而与 papGIA2的同源性为 98.6 %。与papGIA2比较 ,papG132核苷酸序列 +3位缺失 1个三联体密码 ,并在特异性受体结合域 +49位、+16 0位和PapD蛋白亚单位作用区 +2 72位、+314位存在错义突变 ,此外还存在 7处同义突变。结论UPEC132株的P菌毛不同于相同血清型的UPECJ96株 ,前者为F13型papA与Ⅱ型papG组合 ,后者为F13型 papA与Ⅰ型papG组合。Ⅱ型PapG粘附力较强 ,具有重要的临床意义。

肺炎克雷伯菌表面成分对小鼠细菌感染的保护作用

观察肺炎克雷伯菌 (Klebsiellapneumoniae,Kp)表面成分在小鼠体内对细菌感染的保护作用。经肺炎克雷伯菌培养液经溶菌酶、NP40溶菌后 ,再经去脂、去蛋白和有机溶剂沉淀 ,干燥获取Kp表面成分干粉。用不同剂量的Kp表面成分免疫小鼠 ,分别用大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌攻击小鼠 ,记录小鼠死亡情况 ,并测定循环抗体效价。结果 :Kp表面成分低剂量组 (30 μg/g体重 )和高剂量组 (40 μg/g体重 )对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染有显著保护作用 ,能降低感染小鼠的死亡率。免疫后小鼠的抗体效价明显高于对照组小鼠 (P <0 0 1 )。应用Kp表面成分的小鼠对细菌感染有一定的保护作用。

基于胚胎干细胞实验模型评价黄芩苷的胚胎毒性

目的应用胚胎干细胞实验模型体系评价黄芩苷的胚胎毒性。方法分别将胚胎干细胞D3和胚胎成纤维细胞(BALB/c 3T3)与黄芩苷20,40,60,80和100 mg·L-1共培养,MTT法检测细胞活性,分别计算黄芩苷对胚胎干细胞D3和3T3细胞增殖半数抑制浓度IC50(D3)和IC50(3T3)。利用悬滴-悬浮-贴壁方法,体外培养胚胎干细胞向心肌细胞分化,实时定量PCR方法检测心肌细胞特异表达肌球蛋白重链(β-MHC)基因的表达,计算胚胎干细胞D3定向分化半数抑制浓度,即ID50(D3)。利用胚胎毒性统计公式,预测黄芩苷的胚胎毒性。结果不同浓度黄芩苷作用10 d后,胚胎干细胞D3和3T3细胞存活能力随着黄芩苷浓度增加缓慢下降,黄芩苷对胚胎干细胞D3和3T3细胞增殖均有一定程度的抑制作用,其IC50(D3)和IC50(3T3)分别为135.9和63.3 mg·L-1。体外胚胎干细胞经悬滴-悬浮-贴壁培养可分化为能够表达β-MHC基因的心肌样细胞,黄芩苷2,5,10,20和40 mg·L-1对胚胎干细胞定向分化为心肌细胞的抑制率分别为29.5%,46.8%,59.6%,61.7%和69.0%,黄芩苷对胚胎干细胞分化有一定程度的抑制作用,其体外心肌细胞定向分化的ID50(D3)为7.25 mg·L-1。根据胚胎毒性计算公式,计算得黄芩苷具有弱胚胎毒性。结论黄芩苷具有弱胚胎毒性。

一株引起普通棉耳狨猴死亡病毒的分离与鉴定

1999年6月,天津医科大学动物中心饲养的珍贵灵长类实验动物——普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道传染病,病死率高达33％。在排除细菌感染的基础上,通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养,分离出一株具有高血凝效价的病毒株。经双份血清试验及动物接种试验,确认该病毒是本次疾病流行的病原体。又进一步通过与常见呼吸道病毒标准毒株及血清进行交叉血凝抑制试验、电镜观察、RT-PCR技术并结合生物信息学方法对该毒株进行鉴定,确认本次疾病流行的病原体是副流感1型病毒中的仙台病毒。

仙台病毒引起婴幼儿呼吸道感染的血清学调查

【目的】 探讨仙台病毒与婴幼儿呼吸道感染的关系。 【方法】 用EILSA法 (酶联免疫吸附试验 )检测血清标本的IgM进行血清学调查。 【结果】 在 14 1例临床诊断为急性呼吸道感染的患儿血清经ELISA方法检测出阳性标本 5 2例 ,总阳性检出率占 3 6.9%。 【结论】 仙台病毒在儿童呼吸道病例中占有一定的比重 。

仙台病毒基因结构与功能的研究进展

仙台病毒(SeV)是引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,属于副粘病毒科,单股负链RNA病毒。本文就组成SeV的基因结构和功能做一综述。

HSV-1感染大鼠骨髓间充质干细胞及形成潜伏感染的初步研究

在体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察单纯疱疹病毒1型感染骨髓间充质干细胞情况。分离并鉴定BMSCs;HSV-1感染BMSCs,观察细胞病变(CPE);建立BMSCs的HSV-1潜伏感染模型。提取总DNA,PCR法扩增BMSCs内的HSV-1特异性片段,检测HSV-1感染BMSCs及潜伏感染。结果显示骨髓间充质干细胞经14d诱导后,碱性磷酸酶含量增高、形成钙结节,表现出成骨细胞特性。HSV-1感染BMSCs,出现典型的CPE,PCR法证实BMSCs内存在HSV-1的特异性片段。HSV-1潜伏感染的BMSCs,未出现明显的CPE,细胞传至7代,仍可测到HSV-1的基因片段,表明BMSCs有可能形成HSV-1的潜伏感染。大鼠骨髓间充质干细胞在体外可以向成骨细胞方向分化,可作为组织工程学的种子细胞。HSV-1可以在体外感染骨髓间充质干细胞并有形成潜伏感染的趋势。

双歧杆菌细胞壁组分免疫调节作用的研究

目的 :比较两种方法制备的双歧双歧杆菌细胞壁组分即双歧杆菌完整肽聚糖 (WPG)和细菌裂解物 (BL)的免疫调节作用。方法:分别以化学提取法和超声法制备双歧杆菌完整肽聚糖和细菌裂解物。采用淋巴细胞转化法和溶血空斑法分别研究它们对细胞和体液免疫的调节作用。结果:与对照组比较,BL对T细胞有明显的刺激作用(P<0.05) ,WPG无此作用(P>0.05) ;二者对B细胞都有明显的刺激作用(P<0.05或P<0.01)。结论:双歧双歧杆菌的BL和WPG均有免疫调节作用 ,前者优于后者 ,预示有良好的应用前景。

仙台病毒在儿童急性呼吸道感染中的血清学调查

目的 :检测仙台病毒在天津市儿童急性呼吸道感染中的情况。方法 :血凝抑制试验。结果 :39份患儿血清标本中检测出12份仙台病毒抗体阳性 ,阳性率30.77 % ;结论 :呼吸道疾病的高发季节 ,仙台病毒在儿童急性呼吸道感染中占重要地位。

两种检测抗生素S632A对Vero细胞毒性作用方法的比较

为检测S632A对细胞的毒性作用,比较了CPE法及MTT法检测其效果,结果可见,2种方法均可证明S632A对细胞的毒性较低,MTT法比CPE法敏感性高。

微量细胞中和试验在检测流行性乙型脑炎抗体中的应用

〔目的〕探索检测流行性乙型脑炎中和抗体方便而可靠的方法。〔方法〕应用微量细胞中和试验对健康人群的流行性乙型脑炎抗体进行了检测 ,并检测了 30份鼠脑中和试验阳性的血清 ,与反向间接血清凝集抑制试验测得的抗体进行对比。〔结果〕用微量细胞中和试验法测得的抗体能真正了解人群对乙脑病毒的免疫力 ,而不能用血凝抑制试验代替中和试验检测中和抗体。〔结论〕微量细胞中和试验是检测流行性乙型脑炎中和抗体的方便而可靠的方法。

狨猴副粘病毒感染

1999年夏季,在一个狨猴实验室中暴发急性呼吸道疾病,动物发病率达80%,死亡率约20%,病程在3～10天.在确定发病原因中,动物剖检只见肺脏病变,对4只死亡狨猴肺组织进行病毒分离,对分离物进行电子显微镜检查和血凝及血凝抑制试验,电镜显示分离物属副粘病毒,凝集试验表明分离物产生的红细胞凝集现象能被副流感病毒Ⅰ型(仙台病毒)阳性血清所抑制.而且发病后动物血清抗体效价对副流感病毒Ⅰ型(仙台病毒)升高4倍以上,从而确定动物死亡原因是副流感病毒Ⅰ型(仙台病毒)引起肺炎感染造成.

细菌革兰氏染色辅助鉴别技术的实验研究

细菌革兰氏染色法是细菌中最常见的一种鉴别染色法,是细菌分类鉴定中的重要标志,它可将细菌分为G+和G-两大类.其基本方法是将结晶紫染色剂对已固定的标本染色,以碘液作媒染,再用酒精脱色,最后加复红染液复染,凡细菌被染成紫色,我们称之为G+菌;细菌被染成红色,称之为G-菌.

柠檬提取物对耐药的金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验

【目的】研究耐药的金黄色葡萄球菌对柠檬提取物的敏感性,为耐药菌株的治疗寻找新的途径。【方法】采用纸片法、对倍稀释法,用不同浓度柠檬提取物进行耐药菌株的抑菌试验。【结果】柠檬提取物对临床分离的耐药菌的纸片抑菌实验抑菌环直径>30 mm,最小抑菌浓度(MIC)为1/6 400。【结论】显示柠檬提取物对耐药金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用。

变形链球菌耐氟株质子移位ATP酶活性的体外研究

目的探讨氟化物对变形链球菌耐氟株质子移位ATP酶活性的影响,并与亲代株进行比较。方法变形链球菌耐氟株和亲代株菌液经反复冻融后,在pH值为5.0、6.0、7.0和8.0的含氟和无氟缓冲液中与ATP反应,测定反应液中无机磷含量及质子移位ATP酶活性,并进行比较。结果在pH值为5.0、6.0、7.0时,变形链球菌耐氟株和亲代株在含氟和无氟缓冲液中的质子移位ATP酶活性均不同,差异有显著性(P<0.05);pH值为5.0、6.0、7.0的含氟缓冲液中,耐氟株的质子移位ATP酶活性大于亲代株的质子移位ATP酶活性(P<0.05);pH为5.0和6.0时,耐氟株在两种缓冲液中的质子移位ATP酶活性之差与亲代株相比差异有显著性(P<0.01)。结论变形链球菌耐氟株的耐酸性比亲代株高,其致龋力大于亲代株。

普通棉耳狨猴副粘病毒自然感染的研究

对一个狨猴实验室中暴发急性呼吸道疾病进行了病因调查。通过动物剖检、病毒分离、电子显微镜检查和血凝及血凝抑制试验和动物感染实验 ,确定其病原是副流感病毒 型(仙台病毒 )。从而确定动物死亡原因是病毒引起肺炎感染造成。