不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株转移相关microRNAs的筛选研究

背景与目的微小RNA(microRNAs,miRNAs)参与调节肿瘤发生发展的多个过程,包括细胞的分裂增殖、细胞周期、凋亡、血管形成、侵袭和转移等。本研究应用miRNA芯片检测具有高低不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株L9981和NL9980的miRNA表达谱,从中筛选出与大细胞肺癌转移相关的miRNAs。方法收集L9981和NL9980细胞,抽提总RNA进行CY3标记,将标记RNA在miRNA芯片上进行杂交反应。通过数据统计分析,筛选出表达明显差异的miRNAs。应用Real-timePCR验证芯片结果,并应用生物信息学方法预测靶基因。结果在不同转移潜能人大细胞肺癌L9981和NL9980细胞株中共筛选到22个表达明显差异的miRNAs。与NL9980相比,在L9981中有13个miRNAs表达上调,9个表达下调。Real-timePCR验证miR-125a-3p在细胞中的表达水平与芯片结果趋势一致,预测其靶基因可能为胰岛素样生长因子2。结论筛选得到与大细胞肺癌转移相关的miRNA表达谱。

人大细胞肺癌干细胞样细胞的富集及其功能研究

背景与目的目前国内外还没有确切的、得到公认的肺癌干细胞的筛选标记分子、指标和方法,常用方法为通过流式细胞技术,借鉴其他肿瘤干细胞分选标记来分选肺癌干细胞,但其筛选特异性低、工作量巨大。本研究采用无血清悬浮培养法富集肺癌干细胞,对肺癌干细胞的筛选方法进行探索。方法采用添加生长因子的无血清培养基对人大细胞肺癌细胞株L9981进行悬浮培养,获得肺癌细胞球体。对含血清培养贴壁L9981细胞和无血清培养成球后的L9981细胞,通过显微镜下观察比较二者的生物学形态,应用Vi-cell细胞活力分析仪计数细胞并绘制生长曲线比较二者的增殖能力,通过Transwell实验研究它们的侵袭能力差异,并通过接种裸鼠观察二者在体内的成瘤性来研究肺癌细胞球体的生物学功能。结果与血清贴壁培养L9981细胞相比,无血清培养L9981细胞成球形生长,贴壁L9981和L9981球体细胞的倍增时间分别为(56.05±1.95)h和(33.00±1.44)h,球体细胞的侵袭和成瘤能力分别为贴壁L9981细胞的5倍和20倍。结论通过无血清悬浮培养的L9981细胞可以形成肺癌球体细胞群,L9981球体细胞的侵袭和成瘤能力均明显高于贴壁L9981细胞,显示L9981球体细胞中富集了肺癌干细胞样的细胞。无血清悬浮培养肺癌球体细胞可作为富集肺癌干细胞样细胞的一种候选方法。

肺癌转移进展

肺癌的发病率和死亡率一直居高不下，肺癌患者的预后一直未得到有效提高。原因是因为肺癌是一种非常复杂的肿瘤，而肺癌的转移是肺癌的恶性标志和特征，也是导致治疗失败和患者死亡的主要原因。约30％的患者在诊断时就已有远处转移，50-60％在治疗过程中发生远处转移，80—90％的肺癌患者死亡是由转移引起的。因此，肺癌的转移是一个重大的难题。

肺癌分子诊断与分子分期研究进展

肺癌已成为世界范围内最主要的肿瘤死亡原因，大约31％与癌症相关的死亡是由肺癌造成的。在世界范围内，肺癌患者的5年存活率也只有大约15％。目前肺癌低存活率主要在于基于症状的诊断方法对发现早期肺癌并不十分有效，3／4的病人在确诊时肺癌已发生转移。若能在早期检测到肺癌病变，病人5年存活率可提高到60-80％。第十二届肺癌大会已圆满结束，来自不同国家的科学家呈现了许多早期诊断的工作和研究。

肺癌基础研究和临床治疗的“个体化”时代——第十二届肺癌大会评述

第十二届世界肺癌大会于2007年9月2日-6日在韩国首都首尔举行，本次大会的的最大特点是与会者无处无时不感受到肺癌“个体化”时代不是即将来临，而是我们已经确确实实地进入了肺癌的“个体化”时代。本次大会给我们的最新信息是：随着人类基因组计划的完成和后基因组计划的即将完成，人们不仅可以应用基因组计划和后基因组计划的成果探讨肺癌发生发展、侵袭转移，血管生成，

肺癌相关单核苷酸多态性的研究进展

肺癌是目前全球范围内对人类健康威胁最大的恶性肿瘤之一,关于肺癌的病因学、预防、诊断、治疗等研究已经成为世界各国的重要课题。已有研究表明遗传因素在肺癌的发生、发展、治疗反应、预后等中具有重要作用，

非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药分子靶向研究进展

肺癌是当今世界上对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤,也是临床治疗疗效最差的恶性肿瘤。非小细胞肺癌(NSCLC)组织中常可检测到表皮生长因子受体(EGFR)的高表达,而EGFR与肿瘤血管生成、肿瘤细胞扩散及增殖有关,其突变可以增强NSCLC对酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的敏感性。早期的以吉非替尼为代表的EGFR-TKIs借助于高敏感性用于治疗NSCLC患者效果均较为显著,一度成为治疗非小细胞肺癌的主要治疗药物。但经过长期的使用NSCLC患者对EGFR-TKIs药物产生了耐药性表现,病情出现复发甚至恶化的情况。因此,对于吉非替尼等EGFR-TKIs耐药性进行研究,以期通过靶向耐药性相关分子联合治疗NSCLC具有重要意义。本文对EGFR-TKIs耐药相关的分子靶点及针对该靶点的分子抑制剂治疗NSCLC的最新研究进展进行综述。

MMPs基因启动子区多态性与肺癌易感性的Meta分析研究

背景与目的肺癌是世界范围内最常见的一种癌症。基质金属蛋白酶家族(Matrix metalloproteases,MMPs)在癌细胞的转移和扩散中都起到重要作用。MMPs基因多态性与癌症易感性的关系一直是研究的热点,而它们与肺癌易感性是否相关尚存在争议。为了更好地探讨MMPs基因多态性与肺癌易感性之间的关系,我们收集、整理先前学者研究的数据,并进行Meta分析。方法使用PubMed和MEDLINE数据库检索2009年3月以前的相关文献,按照纳入标准,全面搜索含有研究MMP1-16071G/2G、MMP2-1306C/T、MMP2-735C/T、MMP9-1562C/T多态性与肺癌易感性相关的信息。由至少两位评价员做独立文献筛查和资料提取,并交叉审核。使用RevMan(version5.0)软件进行统计分析。结果根据我们的检索条件,8篇文章符合我们的纳入标准。共有4467例肺癌患者和4051名正常对照个体被纳入当前的Meta分析。分析结果表明:MMP2-735C/T多态性与肺癌易感性显著相关,与野生型等位基因-735C相比,突变型等位基因T显著降低了肺癌的易感性(OR=0.72,95%CI:0.61-0.85,P=0.0001);MMP1-16071G/2G、MMP2-1306C/T和MMP9-1562C/T多态性并没有明显影响肺癌的发生。结论当前研究结果表明MMP2基因启动子区-735C/T多态性与肺癌易感性明显相关,MMP9基因-1562C/T多态性与肺癌易感性的关系还需进一步的研究。

加强N2肺癌研究,提高我国N2肺癌临床诊断治疗水平

在上个世纪80年代以前,N2肺癌被称为肺癌纵隔疾病,并被列为外科手术禁忌症,而只能施行放疗、化疗治疗。但其中位生存时间只有6-8个月,1年生存率只有20%-25%。近20年来,随着医学科学技术的发展,尤其是外科手术为主的多学科综合治疗理论和技术在ⅢA-N2NSCLC中的应用,也促使N2肺癌的治疗水平得到了长足的进步,

hOGG1基因Ser326Cys多态性与肺癌易感性的meta分析研究

背景与目的就全世界范围内而言,肺癌是一种常见疾病。人8-羟基鸟嘌呤糖苷酶(human8-hydrox-yguanine glycosylase,hOGG1)是一种DNA修复酶,它能特异切除8-羟基鸟嘌呤(8-dihydro-8-oxoguanine,8-OH-G),对损伤的DNA进行修复。hOGG1Ser326Cys基因多态性与癌症易感性的关系一直是研究的热点,而该多态性与肺癌易感性的关系尚存在争议。本研究采用meta分析旨在更好地探讨hOGG1Ser326Cys多态性与肺癌易感性之间的关系。方法使用MEDLINE数据库检索2010年11月以前的相关文献,按照纳入标准,全面搜索含有研究hOGG1Ser326Cys多态性与肺癌易感性相关的信息。由至少两位评论员做独立文献筛选和资料提取,并交叉审核。使用STATA10.1软件进行统计分析。结果根据检索条件,共有22篇文献(包括8,575例肺癌患者和9,484名正常对照个体)被纳入当前的meta分析。分析结果表明22项研究的结果存在明显异质性,当排除不符合Hard-Weinberg平衡定律的两篇文献后,其余的文献呈现出较好的同质性。与hOGG1Ser326相比,Cys326基因型明显增加了肺癌发病风险(OR=1.24,95%CI:1.10-1.39,P<0.001)。这种正相关在亚洲人群和医院来源的样本中尤为明显(OR=1.28,95%CI:1.11-1.49;OR=1.26,95%CI:1.09-1.46)。结论 hOGG1Ser326Cys多态性与肺癌易感性之间存在明显相关性,Cys326基因型能明显增加肺癌发病风险。

非小细胞肺癌患者hOGG1基因启动子区域突变的研究

背景与目的 8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(8-hydroxygumine DNA glycosylase1,OGG1)是一种DNA修复酶,可以从DNA切除修复8-羟基鸟嘌呤(8-dihydro-8-oxoguanine,8-OH-G)。人类OGG1基因(hOGG1)的多态性可能会改变酶的活性而影响个体修复损伤DNA的能力,促进癌变。然而,hOGG1基因启动子区域的突变与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的关系尚不明晰。我们拟探讨hOGG1基因启动子区域的突变与NSCLC发生发展的潜在关系。方法选取苏州大学附属第一医院2003年1月-2005年12月新鲜手术切除的40例NSCLC组织标本,采用PCR-SSCP和直接测序的方法检测NSCLC及其对应的癌旁组织中hOGG1基因启动子区域的突变。结果在40例NSCLC患者中未发现hOGG1基因启动子区域的异常突变,但发现单核苷酸多态位点rs159153与TNM分期明显相关(P=0.008);同时发现吸烟者中淋巴结转移率明显较低(P=0.034)。结论单核苷酸多态位点rs159153和吸烟史可能对NSCLC的侵袭和转移潜在性提供预测。

BAG-1基因在肺癌中的表达及其与预后关系的分析

背景与目的BAG-1是一个与凋亡相关的多功能基因,现有的研究表明BAG-1的表达水平与多种肿瘤的预后相关。本研究旨在探讨BAG-1基因mRNA在肺癌组织中的表达情况及其与肺癌患者的临床病理生理特征和预后的关系。方法采用实时定量PCR方法检测156例肺癌石蜡组织标本中BAG-1基因的转录表达情况,并与其临床病理生理特征相结合进行分析。结果①BAG-1低表达组患者的中位生存时间(33.5个月)明显高于BAG-1高表达组(20.5个月)(P<0.005);②BAG-1低表达组患者的3年生存率为44.74%(34/76)5年生存率为26.32%(20/76),分别明显高于BAG-1高表达组[32.5%(26/80);21.25%(17/80)](P<0.05);两组生存曲线之间比较,BAG-1低表达组患者生存期明显长于高表达组患者(P=0.045);③分层分析发现在Ⅰ期、鳞癌、不伴有转移的肺癌患者中,BAG-1低表达组患者分别较高表达组生存期明显延长,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论BAG-1可用作预测肺癌患者预后的分子标记物,特别是在早期肺癌和鳞癌患者中,BAG-1的高表达可能与患者的不良预后相关。

尼古丁及尼古丁乙酰胆碱受体在肺癌发生发展过程中的作用

肺癌是目前世界上最常见的癌症之一,约占所有癌症病例的15%,而吸烟是目前公认的引起肺癌的主要危险因素之一,在发展中国家,约80%的肺癌病例与吸烟有关[1]。肺癌的预后总体上仍然不是很乐观,男性的5年生存率为6%-14%,女性为7%-18%[2]。在香烟烟雾约4,000多种化学物质中,已有60多种被确定为致癌物,它们大多通过与DNA相互作用,导致DNA加合物的形成,从而引起细胞中遗传物质或基因的改变。尼古丁是烟草的主要成分之一,其作用主要是导致吸烟者的成瘾性。

nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株抑制消减cDNA文库的构建

背景与目的已有的研究表明,nm23-H1基因是一个重要的肺癌转移抑制基因,为了筛选与该基因表达相关的差异表达基因,本研究拟构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆与nm23-H1转移相关的基因奠定基础。方法利用抑制消减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)技术构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库,经蓝白菌落筛选克隆,并PCR反应鉴定。结果成功构建了该两株细胞株差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库。经蓝白菌落筛选,正向消减文库总共获得约300个白斑克隆,反向消减文库总共获得约400个白斑克隆,从正反向消减文库中各挑选96个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示在挑选的正向文库中有84个克隆有插入片段,反向文库中有83个克隆有插入片段,其片段大小范围为(300-750)bp。结论抑制消减杂交是克隆差异表达基因的有效方法,我们应用SSH法和T/A克隆技术成功建立了nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库。nm23-H1基因在肺癌细胞中的表达可能影响某些转移相关基因的差异表达。

肺癌的遗传学与分子生物学最新进展——第十二届世界肺癌大会回顾

“第十二届世界肺癌大会”于2007年9月2—6日在韩国首都首尔召开，会议的主题是“开创肺癌防治的新纪元”。有来自全球67个国家约5000名肺癌防治领域著名专家、学者参加了这次国际肺癌领域的学术盛会。会议就控烟与肺癌防治、肺癌的外科手术治疗、化疗和放疗、分子靶向治疗等临床和基础研究领域的最新进展进行了研讨。本文将就在肺癌的遗传学及分子生物学方面的最新研究进展作一下回顾。

基于TCGA数据库的EGFR突变型与野生型肺腺癌患者免疫微环境的差异性分析

背景与目的肺癌是一种具有高发病率与高死亡率的恶性肿瘤,腺癌是其中一个重要的组织亚型。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变是肺腺癌患者重要的驱动基因。EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)对EGFR敏感突变的患者疗效显著。而免疫治疗作为新兴的治疗却不能使EGFR突变患者获益,其中的机制研究尚不明确,并集中于EGFR与程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表达之上,而我们推测与两类患者不同的免疫微环境有关。方法从癌症基因组图谱(TheCancerGenome Atlas,TCGA)数据库收集肺腺癌数据集,下载临床信息资料及基因表达谱资料。通过TIMER2.0计算TCGA数据库中免疫相关淋巴细胞浸润情况。并对EGFR突变型与野生型患者进行基因集富集分析。结果临床特征分析显示EGFR突变更频繁发生于女性以及未吸烟患者中。免疫浸润分析显示EGFR突变患者通常具有更高的肿瘤相关成纤维细胞、普通髓系祖细胞、造血干细胞、效应CD4^(+)T细胞、自然杀伤T细胞浸润;具有更低的记忆B细胞、初始B细胞、浆细胞、浆细胞样树突状细胞、记忆CD4^(+)T细胞、CD4^(+)辅助性T细胞2、CD8^(+)T细胞、中心记忆CD8^(+)T细胞、初始CD8^(+)T细胞浸润。我们发现CD8^(^(+))T细胞、自然杀伤T细胞、记忆B细胞和造血干细胞在肿瘤中浸润的程度越高则患者预后越好(Log-rank检验,P=0.017、0.009,3、0.018和0.016)。同时CD4^(+)辅助性T细胞2在肿瘤中浸润的程度越高则患者预后越差(Log-rank检验,P=0.016)。基因集富集分析的结果显示,相比较EGFR野生型肺腺癌患者而言,EGFR突变患者的自然杀伤细胞介导的对肿瘤细胞的免疫应答的正调控、自然杀伤细胞激活参与免疫反应、在自然杀伤细胞介导的对肿瘤细胞的免疫应答这三条与自然杀伤细胞有关的通路上均处于下调状态,而参与免疫应答的细胞因子分泌的正调节这条通路为上调。结论EGFR突变患者肿瘤微环境缺乏有效的杀伤肿瘤的效应细胞并出现了效应细胞功能失调。这可能是EGFR突变患者免疫治疗疗效差的潜在原因。

肿瘤相关成纤维细胞促进肿瘤侵袭转移的作用机制

肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中最主要的成分之一,在肿瘤的发生发展中发挥着必不可少的作用。骨髓和脂肪的局部组织固有成纤维细胞及间充质干细胞是CAFs来源的主要前体细胞。大量研究表明,CAFs并不作为单独细胞在肿瘤周围存在,而是和肿瘤细胞相互作用,促进肿瘤的生长与存活并维持其恶性倾向。肿瘤细胞可以影响CAFs前体的招募,并诱导正常成纤维细胞活化为CAFs;同时,CAFs可以分泌多种细胞因子、生长因子和细胞外基质蛋白质,促进肿瘤细胞的增殖、耐药及侵袭转移,从而影响肿瘤的预后。CAFs还参与血管淋巴管的生成、细胞外基质重塑、免疫抑制以及肿瘤细胞上皮间质转化等有利于肿瘤发生发展的外源性途径,为肿瘤细胞提供了一个良好的微环境。大量研究显示,研发靶向CAFs的药物可以中断其与肿瘤细胞之间的联系,从而抑制肿瘤的生长和转移。因此,深入了解CAFs促肿瘤的作用机制将有利于肿瘤治疗新靶点的发现。本文将对CAFs促进肿瘤侵袭转移的作用机制加以综述。

肺部手术患者围手术期咳嗽的研究进展

咳嗽是肺部手术患者常见症状及围手术期常见并发症之一,其对患者术后的恢复过程及生活质量往往会产生很大影响。早期识别肺部手术患者围手术期咳嗽的危险因素并加以管理是有效干预策略的基础。目前国内外已有很多临床及基础研究试图提出对于围手术期患者咳嗽的系统性管理方案,但成效不佳。本文通过检索近年来肺部手术围手术期咳嗽症状的相关文献报道,发现女性、右侧肺癌、困难气道、急性咳嗽、慢性阻塞性肺疾病病史、纵隔淋巴结清扫、支气管残端长度、麻醉、术后胸腔积液及支气管扭结均与肺部手术围手术期咳嗽相关,且转化受体电位阳离子通道亚家族V成员1通路可能是其潜在的分子机制。对于肺部手术围手术期咳嗽的管理包括药物治疗、淋巴结残腔填补、术中神经监测、支气管假体置入、针灸、术后呼吸锻炼等。这些发现可为临床早期识别肺部手术围手术期咳嗽的高危患者及咳嗽症状的预防和管理提供参考,并为进一步研究提供方向。

突变型nm23-H1基因的磷酸化活性研究

背景与目的磷酸化活性是nm23-H1重要的生物学活性,本研究旨在探讨不同位点的突变对nm23-H1磷酸化活性的影响。方法以野生型nm23-H1研究对照,采用放射自显影的方法检测nm23-H1野生型(WT)和4种突变型(P96S,H118F,S120G和S44A)原核表达蛋白的自身丝氨酸与自身组氨酸磷酸化活性,应用反相高效液相色谱技术(RP-HPLC)检测上述蛋白的NDPK激酶活性。结果野生型和突变型nm23-H1蛋白的自身丝氨酸与自身组氨酸磷酸化活性由大到小依次为P96S、WT、S44A、S120G和H118F,而NDPK活性由大到小依次为:WT、S120G、P96S、S44A和H118F;经线性相关分析,自身丝氨酸与组氨酸磷酸化活性呈正相关(r=0.983,P<0.01),但NDPK活性与自身丝氨酸和自身组氨酸活性均无相关性(分别为r=0.458,P>0.05;r=0.482,P>0.05)。结论不同位点的突变对nm23-H1自身丝氨酸、自身组氨酸及NDPK激酶活性影响不同,NDPK活性与自身磷酸化活性并不完全关联。其中118位组氨酸是nm23-H1激酶活性的关键氨基酸;96位脯氨酸可能与nm23-H1的磷酸转移能力有关;而120位丝氨酸可能为自身丝氨酸和组氨酸磷酸化位点;44位丝氨酸可能为另一具有NDPK激酶的氨基酸。

MAPK通路支架蛋白KSR的研究进展

Ras信号级联在细胞生长和发育的信号传导中具有重要作用,Ras通路的一个主要途径就是MAPK通路,包括胞浆激酶Raf、MEK以及MAPK等。20世纪90年代中期Kornfeld、Sundaram和Therrien等[1-3]于3个不同实验室在果蝇及线虫中发现了一个新的基因,