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衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1在D型沙眼衣原体外膜中结合位点的检测 被引量:5
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作者 刘原君 孙毅娜 +4 位作者 姚卫锋 李燕 李卓然 卫酒荣 刘全忠 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期583-586,共4页
目的发现噬菌体phiCPGl衣壳蛋白Vpl在沙眼衣原体中的结合位点,为理解噬菌体与衣原体的相互作用提供线索。方法诱导表达噬菌体phiCPGl的衣壳蛋白Vpl,通过胶回收进行目的蛋白的纯化,复性后以Far-Western印迹技术检测Vpl是否能与衣原体... 目的发现噬菌体phiCPGl衣壳蛋白Vpl在沙眼衣原体中的结合位点,为理解噬菌体与衣原体的相互作用提供线索。方法诱导表达噬菌体phiCPGl的衣壳蛋白Vpl,通过胶回收进行目的蛋白的纯化,复性后以Far-Western印迹技术检测Vpl是否能与衣原体外膜中重组多形外膜蛋白(rPmp)家族及主要外膜蛋白(MOMP)结合。结果在大肠埃希菌中成功表达蛋白Vpl;抗Vpl的单克隆抗体作为一抗进行Western印迹,结果无特异性条带出现,可见针对Vpl的单克隆抗体不与任何一种rPmp结合。Far-Western印迹结果显示,在rPmpI的位置出现明显的条带,在相对于其他rPmp和MOMP的位置无特异性条带的出现,证实Vpl能特异结合D型沙眼衣原体标准株的外膜蛋白rPmpI。结论沙眼衣原体外膜中有Vpl的结合位点,可能通过和rPmpI的结合从而特异性地与沙眼衣原体结合。 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 细菌噬菌体 病毒壳体 细菌外膜蛋白质类
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聚合酶链反应相关技术对人乳头状瘤病毒的检测与分型 被引量:1
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作者 柯吴坚 车雅敏 +7 位作者 刘原君 姚卫锋 胡建中 张乃勤 杨玉民 亓玉青 孙晨薇 张俊艳 《中华临床感染病杂志》 CAS 2011年第2期-,共4页
目的 鉴定和评估pcr联合限制性片段长度多态性(rflp)及基因测序技术对发生于外生殖器或肛周部位的5种皮肤病与性病进行hpv dna检测和分型的可行性.方法 应用hpv通用引物对(my09/11)检测组织中hpv dna,并对hpv dna阳性片段进行纯化和回收... 目的 鉴定和评估pcr联合限制性片段长度多态性(rflp)及基因测序技术对发生于外生殖器或肛周部位的5种皮肤病与性病进行hpv dna检测和分型的可行性.方法 应用hpv通用引物对(my09/11)检测组织中hpv dna,并对hpv dna阳性片段进行纯化和回收.利用4种限制性内切酶对hpv dna阳性的pcr产物进行酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)对酶切产物进行分型,然后用pcr直接测序法验证分型结果并对难以分辨或少见图形进行检测.结果 50份经病理确诊的临床样本中,共有35份hpv dna阳性,其中26份来自尖锐湿疣患者,8份来自鲍温样丘疹病患者,1份来自鳞状细胞癌患者.hpv dna阳性样本中,hpv6型19份,hpv11型3份,hpv16型8份,hpv6合并hpv 11型4份,hpv62型1份.测序结果与pcr-rflp判读的hpv型别相符.结论 pcr-rflp方法可用于hpv dna检测与分型. abstract: objective to assess polymerase chain reaction(pcr)combined with restriction fragment length polymorphism(rflp)and gene sequencing technologies in the detection and typing of hpv dna.methods tissue specimens were collected from skin diseases and venereal disease in perianal or genitals.pcr was performed with hpv dna general primers(my09/11)in tissue samples. positive fragments of hpv dna were purified and digested by restriction enzymes.the digested fragments were typed by po]yacrylamide gel electrophoresis(page).the results were verified by direct sequencing.results in 50 clinical samples there were 35 hpv dna positive,including 26 from patients with condyloma acuminatum,8 from patients with bowenoid papulosis,and 1 from patients with squamous cell carcinoma.in hpv dna positive samples,19 were hpv6,3 were hpv11,8 were hpv16,4 were hpv6 and hpv 11,and i was hpv62.sequencing results were in accordance with the pcr-rflp results .conclusion pcrrflp method is effective in the detection and typing of hpv dna. 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒感染 聚合酶链反应 多态性 限制性片段长度 基因测序 分型
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