沙眼衣原体临床分离株药物敏感性测定及耐药基因检测

目的检测本地区泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)对四环素类、大环内酯类、喹诺酮类抗生素的体外药物敏感性,并从基因水平上探讨其耐药机制。方法将42株经细胞培养法证实有CT感染的临床株进行McCoy细胞培养,传代至感染率达90%以上,收集标本进行药敏试验。分别检测四环素耐药质粒tetM基因;大环内酯类耐药相关的23S核蛋白体RNA基因、核糖体蛋白基因L4,通过产物测序检测基因突变;限制性片段分析(RFLP)检测gyrA喹诺酮耐药决定区(QRDR)常见的基因点突变。结果药敏MIC(单位均为μg/mL)分别为红霉素0.5～2.0,克拉霉素0.008～0.032,阿奇霉素0.125～0.50,四环素0.157～0.625,多西环素0.063～0.125,米诺环素0.032～0.128,左氧氟沙星0.50～1.00,莫西沙星0.060～0.120,司帕沙星0.064～0.128,其中发现2株红霉素耐药株(MIC值2μg/mL),其23srRNA基因有C2452A,T2611C的突变(大肠杆菌序列编号),红霉素耐药株及敏感株L4基因均发现脯氨酸113(CCG)→亮氨酸(CTG)、脯氨酸156(CCC)→丙氨酸(GCC)两个位点的突变(GenBankNC000117.1),25株临床分离株中检测到tetM基因,未发现gyrA-QRDR基因中Ser83→Ile点突变。结论发现2株红霉素耐药株,未发现其它八种抗菌药的耐药株。克拉霉素显示了较高的体外抗CT活性。C2452A,T2611C的突变导致红霉素低水平耐药,L4基因的点突变可能与红霉素耐药无关。

沙眼衣原体标准株不同型之间的差异性分析

目的鉴定从ATCC购买的标准株是否为正确型别并比较它们之间的差异。方法沙眼衣原体标准株连续多次传代培养,每次培养后用卢戈氏碘液染色观察并进行包涵体计数,提取基因组DNA进行PCR-RFLP分型鉴定。结果经分型鉴定后,从ATCC购买的标准株为相应的D型、F型、I型;同样的接种剂量400μL,D型随传代次数的增加包涵体数(反应感染率)直线增加,F型、I型随传代次数的增加包涵体数维持在一定的水平并没有明显增多,即感染率没有明显增加。结论从ATCC购买的标准株分型后均为正确的型别,但不同型之间感染率增长的差异明显,为理解沙眼衣原体不同型别致病性的不同提供了一定的理论依据。

增加传代次数对沙眼衣原体细胞培养阳性率的影响

目的探索改进细胞培养对泌尿生殖道沙眼衣原体临床株检测的敏感性。方法培养McCoy细胞至孔板中,置于37℃,5%CO2温箱中孵育,18～24h后生长至致密单层后,接种沙眼衣原体标准株和临床株,培养48～72h后,用卢戈氏碘液染色鉴定培养结果,凡是培养阴性的标本继续传代培养至五代。为评估多次传代后培养法的敏感性,选用沙眼衣原体内源性质粒基因片段为引物,PCR扩增检测沙眼衣原体。结果 428例样本经5次传代培养,共检测出149例沙眼衣原体阳性标本,阳性率为34.81%。以细胞培养共检出的149例阳性标本为基准:初次培养(原代)阳性仅24株,漏检率为83.89%;按常规的沙眼衣原体细胞培养判定标准盲传1次后(二代),阳性株虽增加至91株,漏检率仍有38.93%。传代2次后(三代),阳性株增加至145株,漏检率降至2.68%。PCR扩增检测除了35例培养法检测阴性而PCR法检测为阳性的标本外,余与细胞培养法完全一致。以PCR为参比,多次传代后的细胞培养敏感性达80.98%。结论增加传代次数培养可以提高细胞培养法的敏感性。

沙眼衣原体E型重组主外膜蛋白疫苗和DNA疫苗免疫效应的比较

目的比较E型重组主外膜蛋白(rMOMP)疫苗和MOMP DNA疫苗诱导小鼠产生的特异性免疫效应。方法用纯化的rMOMP和DNA疫苗分别通过股四头肌肌注和阴道黏膜涂布的途径免疫BALB/C雌鼠。通过检测小鼠血清IgG抗体水平和阴道冲洗液sIgA抗体水平、脾淋巴细胞增殖、迟发型超敏反应、细胞因子检测、阴道脱落细胞种植等指标进行两组免疫效应的比较。结果rMOMP肌注组小鼠:血清IgG抗体水平OD450值为0.424±0.075,迟发型超敏反应小鼠足垫增厚0.272±0.054mm;DNA肌注组:血清IgG抗体水平OD450值为0.332±0.033,迟发型超敏反应小鼠右足垫增厚0.258±0.041mm。通过肌注途径诱发的保护性免疫应答rMOMP蛋白疫苗好于DNA疫苗(P<0.05)。结论rMOMP蛋白疫苗的免疫应答强于DNA疫苗,通过阴道涂布途径不能诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。

沙眼衣原体持续感染的诊断和治疗

国内外目前只改了非淋菌性尿道炎的概念,相应的诊断标准和治疗方案没有相应的更改,原因只有一个——国内外都没有新概念下的诊断标准和治疗方案的循证医学证据。而沙眼衣原体存在慢性的、持续性的感染,尤其是在上行感染后。本文详述了各个部位的衣原体感染的诊治,但没有很强的依据,尤其是一些治疗方案,只是为应对目前临床的迫切需要,提供参考而已。我们非常需要全国性病学者协作,进行多中心、严密的临床研究,积累疗效观察和经验。

阿奇霉素对泌尿生殖道沙眼衣原体临床株的单独和联合药物敏感性检测

目的 检测本地区近年来泌尿生殖道沙眼衣原体临床分离株对阿奇霉素的药物敏感性,筛查耐药株,以及体外阿奇霉素与莫西沙星、多西环素、米诺环素和利福平的相互作用情况.方法 将经McCoy细胞培养法检测出的41例沙眼衣原体临床株,传代培养至感染率达90%以上,收集标本进行阿奇霉素、莫西沙星、多西环素、米诺环素和利福平5种抗菌药物的药敏试验,采用棋盘稀释法测定阿奇霉素与莫西沙星、阿奇霉素与多西环素、阿奇霉素与米诺环素、阿奇霉素与利福平4组抗菌药物联合后的体外相互作用情况.结果 阿奇霉素最低抑菌浓度（MIC）结果为0.063～0.5μg/ml.阿奇霉素与莫西沙星、多西环素和利福平体外联合时对分别对51.22%、53.66%和58.54%的菌株为协同或相加作用,统计结果显示3组之间差异无统计学意义（P＞0.05） 阿奇霉素与米诺环素联合时对90.24%的菌株为拮抗作用.结论 在体外,阿奇霉素与莫西沙星、多西环素或利福平联用,能够提高各自的抗菌活性,可能对治疗沙眼衣原体反复感染或持续感染患者的疗效优于单用一种抗菌药物 相反,阿奇霉素与米诺环素联合应用时,它们之间的拮抗作用将极大地降低各自的抗菌活性.联合药敏试验在一定程度上能够弥补单独药敏实验的一些不足.

多次传代培养提高沙眼衣原体泌尿生殖道感染的检出率

沙眼衣原体（Chlamydia tracbomatis，Ct）所致的泌尿生殖系感染是目前世界范围内最为流行的性传播疾病，在某些西方国家已超过淋病占各种性传播疾病的首位。在我国，近年日益增加的Ct泌尿生殖道感染已受到重视。在Ct感染的诊断上，实验室一般以传统的细胞培养法、分子生物学技术的LCR和PCR法以及免疫学类的EIA、DIF和VIDAS—CHL法进行诊断。由于细胞培养法结果稳定、可靠，