miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响

目的 研究miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物（miR-451 mimics）转染胶质瘤细胞以上调miR-451的表达,real-time PCR检测转染后miR-451的表达,Western印迹法检测目标蛋白表达,应用流式细胞术、MTT法评价细胞生长和增殖的生物学特征变化.结果 转染miR-451 mimics后,real-time PCR检测提示miR-451表达升高,Western blot结果显示癌基因C-myc表达下降＞63.6%,细胞周期正向调节因子CDK2、CDK4、Cyclin D1和Cyclin E表达下降;细胞周期分析表明miR-451 mimics组进入G0/G1期的细胞数较对照组增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示miR-451 mimics组细胞生长受抑.结论 miR-451可以抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖能力,具有抑瘤作用.

敲低亮氨酰-tRNA合成酶抑制人胶质瘤细胞U251增殖和迁移的体外研究

目的探究敲低亮氨酰-tRNA合成酶（LARS）表达对U251细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用脂质体转染LARS小干扰RNA（LARSsiRNA）于U251。PCR、Westernblot检测LARS表达；MTr法、平板克隆检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期及Transwell法检测细胞迁移能力。结果较对照组和无义序列组，转染LARSsiRNA后LARSmRNA和蛋白水平明显降低，自转染48h后细胞增殖率明显下降（P〈0．05），且克隆形成率分别较对照组和无义序列组降低了51．69％和50．45％，G0／G1期比例分别增高了38．34％和31．93％，穿膜细胞数分别减少了81．78％和81．45％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论敲低LARS表达可明显抑制U251生长增殖和迁移能力。LARS基因有望成为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。

反义抑制miR-106b表达对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨抑制miR-106b过表达对人脑胶质瘤细胞株增殖和侵袭的影响.方法 培养人脑U251、LN229及TJ905胶质瘤细胞,并将其分为细胞对照组,转染阴性对照组（简称阴性对照组）,转染miR-106b inhibitors组（简称106b inh组）.将反义miR-106b用脂质体转染于人脑胶质瘤细胞中,抑制miR-106b的表达.采用实时定量PCR法检测转染后胶质瘤细胞miR-106b的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化、噻唑兰比色分析法检测细胞增殖能力、软琼脂克隆形成实验评价细胞非锚定依赖性生长能力及Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 与细胞对照组,阴性对照组比较,（1） 106b inh组3种胶质瘤细胞中miR-106b的表达均被明显抑制;细胞周期进展被抑制,S期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例增加,其中U251、TJ905细胞的周期时相分布差异有统计学意义（P值均＜0.05）,LN229细胞的周期时相分布差异无统计学意义;（2） 106b inh组转染抑制后48 h,3种胶质瘤细胞的增殖能力均明显减弱,P＜ 0.05;（3）细胞的克隆形成能力也被明显抑制[克隆形成率分别为,U251：（10.6±0.9）％、（10.5±1.2）％对比（3.3±0.4）％;LN229：（12.5±1.7）％、（11.0±2.4）％对比（4.1±0.3）％;TJ905：（9.9±1.2）％、（10.2±0.6）％对比（3.5±0.4）％.P值均＜0.01];（4）穿过Transwell小室的细胞数明显降低[U251：（90.6±5.7）、（85.2±6.1）个对比（27.6±4.0）个;LN229：（22.6±3.7）、（21.2±3.7）个对比（2.4±1.5）个;TJ905：（79.4±4.4）、（76.8±5.9）个对比（11.8±3.2）个.P值均＜0.0l].结论 下调miR-106b的表达可抑制胶质瘤细胞的增殖、生长和侵袭能力.

miR-181a和miR-181b抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭

目的探讨miR-181a和miR-181b对胶质瘤细胞增殖和侵袭等影响。方法通过实时荧光定量PCR检测miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株中的表达情况。我们合成miR-181a和miR-181b寡聚核苷酸及构建pre—miR-181a和pre—miR-181b表达载体，转染胶质瘤细胞，通过MTF、Transwell实验、流式检测和软琼脂实验，观察上调miR-181a和miR-181b表达后对胶质瘤细胞增殖、侵袭、转化能力和细胞凋亡的影响。结果miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株较正常脑组织均呈过低表达；miR-181a表达水平与胶质瘤等级呈负相关。上调miR-181a和miR-181b表达能有效抑制胶质瘤细胞生长，降低其转化和侵袭能力，诱导凋亡。结论胶质瘤中异常低表达的miR-181a和miR-181b可能发挥着肿瘤抑制因子作用。

不同AKT1与AKT2表达状态的胶质瘤的生存分析

目的 探讨AKT1与AKT2在脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的相关性.方法 免疫荧光法检测手术切除的50例胶质瘤组织标本中AKT1及AKT2的表达水平,确定两者表达的相关性并与生存期进行相关性分析.结果 Log - rank单因素检验,年龄≥50岁、KPS评分＜ 80分和WHO Ⅲ～Ⅳ级患者的生存期显著缩短.胶质瘤组织中AKT1及AKT2在WHOⅢ～Ⅳ级的表达率显著高于WHO Ⅰ～Ⅱ级,两者表达存在正相关,且与患者的生存期呈负相关.结论 AKT1与AKT2的表达状态对预测患者的生存期具有一定的临床价值.