靶向表皮生长因子受体psiRNA抑制人脑胶质瘤细胞系U251生长的体外研究

目的探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)RNA干扰(RNAi)技术抑制人脑胶质瘤细胞系U251EGFR表达后,在体外对细胞增殖活性和侵袭能力的抑制作用。方法应用流式细胞术、Annexin V法、MTT法、Matrigel细胞外基质生长实验和Transwell细胞侵袭实验评价由脂质体Lipofectamine 2000介导转染的人脑胶质瘤细胞系U251转染前后细胞增殖活性和侵袭能力的变化;Western blotting检测EGFR和PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质的表达水平。结果与对照组和psiRNA-scr组比较,psiRNA-EGFR组EGFR以及PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质表达水平降低(均P=0.000)。转染后,psiRNA-EGFR组细胞阻滞于G0和G1期,S期细胞数目减少(均P=0.000);其细胞凋亡率为(9.60±0.26)%,高于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.000);自培养第2天其细胞增殖速率即呈下降趋势,且低于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.001)。结论靶向表皮生长因子受体RNAi技术可以序列特异性地抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞表皮生长因子受体表达,在体外对U251细胞生长具有明显抑制作用。靶向表皮生长因子受体psiRNA基因治疗可能成为脑胶质瘤治疗的新策略。

隔蛋白7在神经上皮肿瘤中的表达

目的研究隔蛋白7（SEPT7）在神经上皮肿瘤中的表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测47例胶质瘤标本以及4个胶质瘤细胞系中SEPT7的mRNA表达水平，以及免疫组化法研究了肿瘤标本以及组织芯片中SEPT7的表达状况。结果胶质瘤中SEPT7的表达水平随肿瘤恶性程度增加而明显降低，低恶度胶质瘤与高恶度胶质瘤的mRNA、蛋白表达水平差异有统计学意义；胶质瘤细胞系TJ905、TJ899未检测到SEPT7的表达，U251、TJ862细胞系中SEPT7表达水平较正常组织显著降低。结论RT—PCR和免疫组化检测表明SEPT7在神经上皮肿瘤中表达下调，可能与肿瘤的发生、发展有关联，值得进一步研究。

mieroRNA-221和mieroRNA-222与恶性肿瘤的研究进展

微RNA（microRNA）-221和microRNA-222是成簇的microRNA，在恶性肿瘤中起促癌作用，在胶质母细胞瘤、前列腺癌、乳头状甲状腺癌等恶性肿瘤中高表达。microRNA-221和microRNA-222通过调控其特定的靶基因行使促癌作用。在所有预测的靶基因中，p27^kip1和p57^kip2是已被验证的靶基因，microRNA-221和microRNA-222通过下调p27^kip1和p57kip2的表达来促进肿瘤的形成和生长。

微RNA-106b～25基因簇在肿瘤中的研究进展

微RNA（miRNA）-106b-25基因簇由miR-106b、miR-93及miR-25组成，与miR-17～92原癌基因簇有着极高的同源性。已有的研究表明，该簇miRNA成员在多种肿瘤中高表达。这些miR通过抑制细胞周期抑制因子p21、p57及凋亡抑制因子Bim来促进肿瘤细胞增殖，抑制细胞凋亡。在转化生长因子β（TGF—β）信号通路中，miR-106b25的高表达可使肿瘤细胞逃避TGF—β诱导的生长抑制作用。

人脑胶质瘤细胞系miRNA表达谱初步研究

目的确定部分人脑胶质瘤细胞系miRNA表达谱的初步特征。方法提取人脑胶质母细胞瘤细胞系U251、TJ861、TJ905、TJ899和A172以及星形细胞瘤细胞系H4细胞的miRNA，miRNA微阵列芯片杂交，扫描后分析差异表达的miRNA。选择差异表达的miR-21设计反义寡核苷酸处理U251细胞后原位杂交和Western blot检查SEPT7的表达。结果在胶质瘤细胞系中hsa—miR-21等8种miRNA一致表达上调；hsa—miR-1等18种miRNA一致表达下调。miR-21锁核酸修饰反义寡核苷酸处理U251细胞72h后，原位杂交发现阳性信号集中在细胞核的miR-21表达显著下降，Western blot发现U251细胞中SEPT7的表达明显上调。结论miRNA的差异表达可能是胶质瘤的重要分子生物学标签，并在基因表达调控中具有潜在的研究价值。

SEPT7对胶质瘤细胞系TJ905生物学特性的影响

目的研究 SEPT7对胶质瘤细胞系 TJ905的生物学特性的影响。方法 SEF17表达缺失的人脑胶质瘤细胞系 TJ905转染 SEFF7构建体,pcDNA3载体转染组为空载对照,应用蛋白印迹鉴定转染是否成功。采用 MTF 法检测转染 SEPT7构建体的细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期分布变化,Annexin V 法评价细胞的凋亡,Martrigel 三维立体培养法分析侵袭能力。结果转染SEPT7后,胶质瘤细胞增殖活性降低,细胞周期分析结果为 S 期细胞比例(SPF)降低、G0/G1期阻滞;蛋白印迹检测细胞周期因子显示正向调节因子 cyclin D1、cyclin E、CDk2、CDk4表达下降,负向调节因子 p21、p16表达升高,肿瘤细胞侵袭能力明显受到抑制,并可诱发细胞凋亡。结论 SEPT7转染人胶质瘤细胞系 TJ905,可使细胞 SPF 降低、G0/G1期出现阻滞、抑制细胞侵袭和增殖、促进凋亡。

RNAi下调PIK3CB表达抑制U251胶质瘤细胞生长的体内外研究

目的探讨应用RNAi技术靶向磷酸肌醇酯-3-激酶β催化亚单位（PIK3CB）抑制恶性胶质瘤细胞系U251的PIK3CB表达后在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法将短发夹RNA（shRNA）表达载体psiRNA-PIK3CB进行脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达，检测细胞转染前后的细胞增殖能力和凋亡的变化。应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用，对肿瘤组织应用免疫荧光双染色和免疫组化的方法分析结果。结果靶向PIK3CB的shRNA转染后U251细胞生长受到抑制，细胞周期出现G2／M阻滞，细胞明显凋亡。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-PIK3CB显著抑制皮下肿瘤生长（P〈0．01）。结论靶向PIK3CB的shRNA基因治疗可以成为胶质瘤治疗的新策略。

微小RNA-451抑制胶质瘤细胞侵袭能力的实验研究

目的研究微小RNA-451（miR-451）通过调控基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的表达对LN229胶质瘤细胞株侵袭能力的影响。方法体内、外实验均设立3组，分别为空白对照组、无义序列组和miR451 mimics组。合成寡核苷酸miR451 mimics转染LN229胶质瘤细胞以上调miR451的表达，采用实时定量PCR检测转染后miR-451的表达，以Western blot方法检测各组MMP-2和MMP-9蛋白的表达，通过Transwell实验评估各组LN229胶质瘤细胞的侵袭能力。同时建立LN229细胞荷瘤裸鼠模型，绘制肿瘤生长曲线，并采用免疫组化方法检测各组肿瘤内MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果PCR检测结果提示，与空白对照组、无义序列组相比，miR451 mimics组miR451的表达明显升高（均P〈0．05）。Western blot结果显示，miR451 mimics组MMP-2的相对表达量（0．26±0．03）均低于空白对照组（0．67±0．07）和无义序列组（0．65±0．04）（均P〈0．05）；miR-451 mimics组MMP-9的相对表达量（0．25±0．02）亦低于空白对照组（0．71±0．04）和无义序列组（0．73±0．01）（均P〈0．05）。Transwell实验结果显示，miR-451 mimics组穿过Transwell小室的细胞数为（41．0±2．9）个，低于空白对照组[（79．0±2．7）个]和无义序列组[（73．0±3．4）个]（均P〈0．05）。体内实验结果表明，miR-451mimics组的肿瘤体积[（697．31±65．25）mm^3]明显小于空白对照组[（1753．69±76．52）mm^3]和无义序列组[（1532．64±65．31）mm^3]（均P〈0．05）；免疫组化结果表明，与空白对照组和无义序列组相比，miR451 mimics组肿瘤组织MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低（均P〈0．05）。结论miR-451通过调控MMP-2和MMP-9的表达抑制LN229胶质瘤细胞的侵袭性生长能力，可能为潜在的人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。

胶质瘤中微RNA研究进展

微RNA（microRNA，miR）可在转录后水平负调控靶基因表达，miR异常表达与肿瘤生成密切相关。对胶质瘤中多个miR异常表达及其机制的研究将对进一步探讨胶质瘤的分子病理及其诊治开拓新途径。

微RNA与p53调控的关系研究进展

微RNA（miRNA）是近年发现的一类内源性非编码单链小RNA，在转录后水平负调控基因表达，参与发育、凋亡和细胞增殖等重要生命过程。p53是一重要转录因子，调控细胞周期与凋亡。两者的异常表达均与肿瘤的生成密切相关。

隔蛋白7对胶质瘤细胞系U251细胞周期的影响

目的检测SEPT7对胶质瘤细胞系U251的细胞周期、增殖、侵袭以及凋亡的影响。方法流式细胞术分析转染SEPT7对细胞周期的影响，Western blot检测细胞周期因子表达变化，MTT法和Annexin V法评价SEPT7对U251细胞的增殖活性和凋亡的影响，Martrigel三维立体培养分析转染SEPT7后U251细胞侵袭能力的变化。结果SEPT7使U25I细胞G0／G1期阻滞，S期细胞比例（SPF）降低，增殖活性和侵袭能力明显受到抑制，并可诱发细胞凋亡。结论SEPT7抑制U251细胞侵袭、增殖，促进凋亡。结果提示，SEPT7是对胶质瘤具有抑制作用的基因。