抑制miR-29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移的影响

目的观察抑制miR-29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移能力的影响，探讨其可能机制。方法以抑制miR-29表达的寡核苷酸（anti-miR-29）及对照寡核苷酸（miR-NC）转染PANC1细胞，构建anti-miR-29-PANC1细胞及miR-NC-PANC1细胞，并采用瞬时转染PUMA-siRNA、E-cadherin-siRNA或NC-siRNA方法构建共转染的anti-miR-29＋PUMA-siRNA-PANC1细胞及anti-miR-29＋E-cadherin-siRNA-PANC1细胞。观察各组细胞的克隆形成数，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞侵袭能力，划痕试验检测癌细胞迁移能力。采用anti-miR-29-PANC1细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤模型，静脉注射建立肺转移模型，以注射PANC1细胞作为对照。观察移植瘤的生长情况及肺转移结节数量，TUNEL法检测移植瘤的细胞凋亡，免疫组织化学法检测移植瘤的PUMA、E-cadherin表达。结果PANC1、miR-NC-PANC1、anti-miR-29-PANC1组的细胞存活率分别为100%、（96.8±2.8）%、（24.4±3.2）%；细胞克隆形成数为（213±36）、（196±28）、（37±6）个/100倍视野；穿膜细胞数为（56.3±9.6）、（49.8±7.3）、（11.2±3.4）个/400倍视野；细胞的迁移距离为（260±48）、（247±46）、（53±7）μm；细胞凋亡率分别为（1.5＋0.9）%、（2.6＋0.9）%、（22.4＋2.8）%，anti-miR-29-PANC1组细胞与其他2组差异均有统计学意义（P值均〈0.05）。anti-miR-29＋PUMA-siRNA-PANC1组的细胞存活率为（84.7±10.9）%，细胞凋亡率为（1.3±0.8）%；anti-miR-29＋E-cadherin-siRNA-PANC1的穿膜细胞数为（49.7±6.4）个/400倍视野，细胞迁移距离为（182±36）μm，均消除抑制miR-29表达对PANC1细胞所带来的影响（P值均〈0.05）。PANC1、anti-miR-29-PANC1细胞移植瘤的体积分别为（3 800±270）、（1 890±160）mm3，细胞凋亡指数为0.93±0.14、8.26±1.15，肺转移结节为（26.4±6.5）、（8.6±2.7）个，PUMA阳性表达率为（7.2±1.6）%、（43.8±7.6）%，E-cadherin阳性表达率为（8.3±3.6）%、（47.4±5.7）%。anti-miR-29-PANC1组移植瘤体积、肺转移结节较对照组显著减小或减少，而细胞凋亡、PUMA及E-cadherin表达显著增加，差异均有统计学意义（P值均〈0.05）。结论抑制miR-29表达后PANC1细胞的增殖、侵袭、转移能力下降，其机制可能与上调PUMA及E-adherin表达有关。