血清糖链抗原-125均相化学发光免疫检测方法的初建

目的建立血清糖链抗原-125(CA125)光激化学发光免疫分析的检测方法。方法用兔抗人CA125多克隆抗体包被受体微球,1株单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲和素包被的供体微球共同组成试剂检测人血清CA125,利用棋盘滴定法确定受体微球及生物素化抗体的最适浓度并进行方法学评价。结果本方法的批内及批间精密度为3.93%～4.40%和5.60%～8.39%;功能灵敏度为3.91 U/ml,分析灵敏度为3.49 U/ml;回收率为105.14%～108.74%;特异性分析中溶血、黄疸和类风湿疾病的干扰率均<10%;本文建立方法的CA125参考值上限为26.53 IU/ml;采用本方法检测50份临床标本结果与Roche Elecsys 2010电化学发光检测法的结果相关系数为0.974。结论本研究建立的方法能够用于定量检测血清CA125,且具有免洗涤、灵敏度强、准确性高、重复性好、便于操作等优点。

天津地区食物过敏患者sIgG检测结果分析

目的：了解天津地区过敏患者血清食物过敏原特异性IgG（sIgG）的表达情况,探讨食物不耐受与过敏性皮肤病的关系。方法：应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对834例疑似食物变态反应性疾病患者血清中食物过敏原的sIgG抗体进行检测,分析食物过敏原种类特点。结果：834例患者中有638例有111种不等的食物过敏原sIgG升高,总阳性率为76.5%,其中存在12种食物不耐受的比例最高（58.1%）。在14种食物中,食物过敏原sIgG升高以鸡蛋（51.9%）最多见,其次分别是蟹（21.6%）、虾（19.3%）、牛奶（16.5%）,猪肉sIgG阳性率（0.5%）最低。另外,≤14岁患者与〉14岁患者对鸡蛋、牛奶、蟹、虾、小麦、西红柿过敏情况差异有统计学意义（均P〈0.01）。241例皮肤病患者中有171例食物过敏原检测结果呈阳性,阳性反应率为71.0%。结论：鸡蛋、甲壳类（蟹、虾）、牛奶是食物变态反应性疾病的主要过敏原。食物过敏或食物不耐受的症状与皮肤过敏性疾病关系密切。

EPO光激化学发光定量检测方法的建立

目的：建立双抗体夹心模式光激化学发光免疫（LiCA）技术定量检测血清促红细胞生成素（EPO）的方法,并对方法进行方法学评估。方法：采用棋盘格滴定法,用针对EPO抗原的一个单克隆抗体及两个多克隆抗体,分别包被发光微粒,及进行生物素化,两两配对筛选出最佳双抗体组合,进而确定最佳反应浓度,建立光激化学发光检测EPO的方法,建立标准曲线,评价该方法。研究中采用SPSS19.0软件和ELISA Calc进行统计分析。结果：筛选到一组最适抗体,分别与发光微粒和生物素进行连接,成功建立了EPO定量检测的双抗体夹心模式LiCA方法。该法检测的敏感性为0.09 ng/ml,在0.09~30 ng/ml范围内线性良好。批内变异系数和批间变异系数分别为2.93%和3.86%,EPO浓度高达30 ng/ml时无Hook效应。51例EPO增高及51例健康体检者EPO的测定结果与放射免疫法检测EPO比较具有良好的相关性（r=0.957）,建立的参考范围为0.76~6.80 ng/ml。结论：成功建立了双抗体夹心模式的光激化学发光定量检测EPO的方法。该检测方法均具有敏感性高、免洗板、线性范围宽、背景荧光低、快速简便等特点。在EPO检测中具有极好的应用前景,有助于EPO诊断试剂盒的研制。

血清淀粉样蛋白A诱导中性粒细胞胞外诱捕网形成

目的探究血清淀粉样蛋白A(SAA)能否在体外诱导中性粒细胞形成中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)。方法建立稳定的体外诱导NETs形成方法,包括外周血中性粒细胞的分离、细胞体外培养、NETs的诱导和形态学观察。提取健康志愿者的外周血中性粒细胞,分为阴性对照(NC)组、SAA组和脂多糖(LPS)组,给予相应的刺激后,观察NETs的形成并计算百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中人组蛋白3(h3)的含量。结果提取的外周血中性粒细胞纯度与细胞活力均在95%以上。显微镜下观察到部分细胞的细胞核失去原有核型,向外扩散形成网状,即NETs。与NC组相比,接受SAA刺激的中性粒细胞有更多的NETs形成(P<0.05)。培养液上清中的h3含量显著高于NC组(P<0.05)。结论 SAA可在体外诱导中性粒细胞形成NETs。

以特异性IgE为探针的鸡蛋过敏原成分分析

目的分析并确定鸡蛋中引起过敏的主要蛋白成分。方法制备蛋清、蛋黄的蛋白粗提液,从临床收集鸡蛋过敏患者血清,Western blot分析并确定鸡蛋中的过敏原组分。结果鸡蛋清中的蛋白条带主要有4条,而其中76×103和15×103附近的2个蛋白条带与血清有阳性反应,蛋黄中蛋白条带较多,与患者血清的反应存在假阳性。结论蛋清中卵清转铁蛋白和溶菌酶为主要过敏原,蛋黄中有些蛋白组分与人IgE具有相同表位,可能是引起交叉反应的主要原因。

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中钙网织蛋白经NF-κB通路上调c-FLIP的表达

目的探究类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中钙网织蛋白(CRT)上调细胞型Fas相关死亡域样白细胞介素1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)表达的分子机制。方法免疫组织化学染色分析c-FLIP在RA和骨关节炎(OA)患者膝关节滑膜中的表达与定位。酶解法分离RA/OA FLS,作为体外细胞培养模型。细胞免疫荧光和Western blot检测c-FLIP在RA/OA FLS中的表达。Western blot探究CRT对RA FLS中c-FLIP表达的影响及其分子机制。结果 c-FLIP在RA滑膜中呈高表达,主要集中在衬里层和衬里下层的FLS和血管内皮细胞等,而在OA滑膜罕见阳性;RA滑膜中c-FLIP表达显著高于OA(t=11.717,P<0.001)。细胞免疫荧光和Western blot结果显示,c-FLIP主要定位于胞质,且RA FLS中c-FLIP表达高于OA FLS。FLS与CRT(0、10、50、100μg/L)共培养,RAFLS中c-FLIP表达上调且核因子(NF)-κB磷酸化增加,具有浓度依赖性。NF-κB抑制剂BAY 11-7082预干预后,CRT上调RA FLS中c-FLIP表达的作用受到明显抑制。结论 RA FLS中的CRT可能部分经NF-κB通路上调抗凋亡蛋白c-FLIP的表达,为今后RA的临床治疗提供新的思路。

术前血浆D-二聚体水平对判断胃癌患者预后的价值

目的 探讨胃癌患者术前血浆D-二聚体水平对判断预后的价值.方法 回顾性分析2003年1月至2007年12月天津医科大学肿瘤医院收治的1 105例胃癌患者的临床病理资料,分析术前血浆D-二聚体水平与其预后的关系.结果 本组1 105例胃癌患者中,血浆D-二聚体正常组（＜0.3μg/ml）814例,血浆D-二聚体升高组（≥0.3 μg/ml）291例,两组患者在年龄、肿瘤大小、淋巴结转移上差异均有统计学意义（均P ＜0.05）.血浆D-二聚体正常组和血浆D-二聚体升高组5年生存率分别为46.2％和35.3％,差异有统计学意义（χ^2=10.839,P＜0.05）.在淋巴结转移患者中,血浆D-二聚体正常组和血浆D-二聚体升高组5年生存率之间差异有统计学意义（34.1％比22.2％,χ^2 =11.178,P＜0.05）,而在无淋巴结转移患者中,两组5年生存率之间差异无统计学意义（χ^2=0.524,P=0.469）.分层分析显示血浆D-二聚体正常组和血浆D-二聚体升高组仅在T4期患者中的5年生存率差异有统计学意义（39.2％比28.5％,χ^2=8.110,P＜0.05）,而在N分期、TNM分期患者中5年生存率差异均无统计学意义（均P＞0.05）.多因素分析显示血浆D-二聚体不是本组患者的独立预后因素.结论 血浆D-二聚体不是胃癌独立的预后因素.血浆D-二聚体水平与淋巴结转移相关,而其水平升高与否对辅助化疗效果没有显著影响.