病理生理学留学生教学实践及体会

留学生教育是我国高等教育的一个重要组成部分。加强教师自身素质的培养，提高教师英语授课的水平，增进专业教学的效果和把握教学质量的标准，是不断完善留学生教学的重要措施。这对使留学生教学质量稳步提高，提升我国教育在国际上的声誉是极为必要的。

病理生理学七年制双语教学之体会

开展双语教学，培养既懂专业又懂外语的国际性人才，是社会发展的需要及教学改革的重要内容之一。明确认识，探索出适合国情的教学模式，提高教学水平，促进学生全面成材，是一个涉及多层面的系统工程，需要不懈努力。

共有序列寡核苷酸竞争结合NF-κB以减少TNF产生的实验研究

目的 :了解使用含核因子 -κB(NF -κB)结合位点序列的共有序列寡核苷酸在胞浆内与NF -κB结合 ,以减少LPS刺激TNF产生的效果。方法 :直接将经硫代磷酸修饰的寡核苷酸导入大鼠腹腔巨噬细胞 ,以减少细胞分泌产生肿瘤坏死因子 (TNF)的效果作为判断指标 ,以ELISA法检测细胞培养上清液中的TNF -α含量。结果 :加入具有NF -κB结合位点序列的共有序列寡核苷酸 ,可明显减少巨噬细胞受LPS刺激后所产生的TNF -α。结论 :结果提示 ,具有NF -κB结合位点的共有序列寡核苷酸的使用 ,可在内毒素脂多糖 (LPS)致病过程的中心环节上阻止或减轻LPS诱导的TNF

牛磺酸镁配合物保护血管内皮改善血流变学的实验研究

目的 :探讨牛磺酸镁配合物保护血管内皮和改善血流变的作用。方法 :冰浴加肾上腺素复制整体血管内皮损伤模型 ,检测血液循环内皮细胞 (CEC)数量和血流变学变化 ,观察牛磺酸镁配合物的作用。结果 :模型大鼠 ,CEC数量明显增加 ;全血比粘度增高 ,血液粘稠度增大 ,红细胞压积增大 ,红细胞变形能力下降 ,聚集能力增高 ;同时 ,血浆内皮素水平增高 ,一氧化氮代谢产物减少 ,一氧化氮合酶活性亦下降。牛磺酸镁配合物能减少模型大鼠的CEC数量 ;降低模型大鼠全血粘度的低切和高切变率 ,减少红细胞压积 ,提高红细胞变形能力 ;血浆内皮素水平下降、一氧化氮代谢产物增多、一氧化氮合酶活性增高。上述作用均呈剂量依赖性。结论 :冰浴加肾上腺素法可作为整体条件下评价血管内皮损伤的模型 。

牛磺酸镁对抗哇巴因诱发心律失常的实验研究

目的 观察新型配合物牛磺酸镁 (TMC)的整体抗心律失常作用。方法 对豚鼠颈静脉分别缓慢推注剂量为10 m g· kg- 1 、2 0 mg· kg- 1 和 4 0 mg· kg- 1 的 TMC,5 min后以 7.5 μg· 0 .2 5 ml· m in- 1 速度持续滴注 0 .0 0 3%哇巴因 ,观察不同剂量 TMC对哇巴因诱发的室性早博、室性心动过速、心室颤动和死亡时间以及相应的哇巴因累积用量的影响 ,并与 3mg· kg- 1 利多卡因进行比较。结果 TMC 2 0 mg· kg- 1 可减慢正常豚鼠心率 ,其作用与 3m g·kg- 1 利多卡因相当。 2 0 m g· kg- 1 、4 0 mg· kg- 1 的 TMC和 3mg· kg- 1 利多卡因可推迟哇巴因诱发的豚鼠室性心律失常的发生时间和延长哇巴因致死时间 ,哇巴因累积用量增加 ,以 2 0 mg· kg- 1 组作用最为显著。结论 TMC具有防治哇巴因诱发心律失常的作用。

分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的应用

目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)分子上的特定片段-TR1(aa37-45)、TR2(aa353-366)和TR3(aa648-655)与其相应的反义肽-RT1(aa45-37)、RT2(aa366-353)和RT3(aa655-648)之间的选择性识别。方法制备固相反义肽亲和层析柱-RT1-sepharose4B,RT2-sepharose4B和RT3-sepharose4B,采用阶段洗脱法,观察相应天然肽-TR1、TR2和TR3在柱上的滞留行为。结果TR1、TR2和TR3与其相应的反义肽之间存在选择性识别,而反义肽RT1且能识别TSHR大分子;此外,牛促甲状腺激素(bTSH)蛋白还能被TR1识别。结论本实验证实了分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的存在,它可能用于生物大分子蛋白质的分离、促甲状腺激素(TSH)与受体(TSHR)结合位点的测定,并用于实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的实验性治疗。

白蛋白治疗对大鼠脑缺血后海马血管内皮生长因子及其受体1的影响

目的探讨人血白蛋白治疗对大鼠脑缺血早期海马血管内皮生长因子(VEGF)及fam样酪氨酸激酶受体1(flt-1)表达的影响。方法雄性SD大鼠40只,采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组10只、生理盐水组15只和白蛋白组15只。采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白水平,RT-PCR检测脑缺血再灌注后6、24、48h大鼠海马VEGF和flt-1mRNA表达,免疫组织化学和Western blot法检测脑缺血再灌注24h海马VEGF蛋白表达。结果与生理盐水组比较,白蛋白组大鼠神经功能缺损评分于脑缺血再灌注后24、48h明显降低(P<0.05),海马VEGF mRNA和flt-1mRNA表达于脑缺血再灌注后6、24h明显降低(P<0.05,P<0.01),海马VEGF蛋白表达于脑缺血再灌注后24h明显降低(P<0.05)。结论白蛋白治疗可下调脑缺血早期海马VEGF和flt-1mRNA表达,降低海马VEGF蛋白表达水平,改善神经功能缺损。

过氧化氢对FRTL细胞线粒体膜电位和超氧化物生成的影响

目的:探讨外源性过氧化氢(H2O2)对Fisher大鼠甲状腺细胞系(FRTL)线粒体膜电位(Δψ)和超氧化物生成的影响。方法:用1mmol/LH2O2处理FRTL细胞10min、30min、24h后,利用MitoSOX,通过活细胞影像法、流式细胞术检测线粒体超氧化物生成;利用罗丹明123(rh123),通过荧光分光光度计和荧光显微镜检测Δψ;MTT比色法检测细胞活力;光镜观察细胞形态学变化;吖啶橙(AO)染色检测细胞凋亡。结果:与对照组相比,1mmol/LH2O2处理的FRTL细胞10min、30min、24h,细胞内MitoSOX荧光强度明显增强,rh123荧光强度和MTT吸光度明显下降(P<0.01),光镜下可见细胞脱壁、破碎,AO染色可见核变小、变圆,染色质浓缩、边集,核碎裂改变。结论:1mmol/LH2O2急性处理(10min,30min)和慢性处理(24h)均能明显增加FRTL细胞线粒体超氧化物生成,降低线粒体膜电位,造成细胞坏死和凋亡。

hTSHR188-403bp基因免疫BALB/c小鼠建立Graves’病动物模型

目的:构建pcDNA3.1/hTSHR(188～403bp)重组质粒,并将其基因免疫BALB/c小鼠建立Graves’病动物模型。方法:RT-PCR扩增hTSHR膜外区188～403bp,与pcDNA3.1载体连接,构建重组质粒pcDNA3.1/hTSHR,用酶切、PCR及测序方法进行鉴定。于1、4、7、9、10周将重组体免疫实验组小鼠,对照组注射生理盐水,0、6、11周取血,检测血清TRAb、T4、TSAb、TBAb。取甲状腺常规病理切片,HE染色镜检。结果:构建的重组质粒经酶切、PCR鉴定证明插入方向正确,测序结果与GeneBank中hTSHR的相应片段序列相同。免疫组T4、TRAb和TSAb水平均从第6周开始显著升高(P<0.05),TBAb差异无统计学意义(P>0.05),对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。实验组甲状腺病理检查结果,显示滤泡增生,胶质浓缩等Graves’病的病理表现,对照组形态正常。结论:构建了重组质粒pcDNA3.1/hTSHR(188～403bp),成功建立了类Graves’病动物模型。

糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达研究

目的 研究实验性糖尿病大鼠心肌细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的表达。方法 链脲菌素 (STZ)法复制SD大鼠实验性糖尿病模型。于模型成功后 30、4 5、6 0、75及 90d取材。原位末端标记法 (TUNEL)和免疫组化法检测细胞凋亡及心肌组织中凋亡相关蛋白的表达变化。结果 健康对照大鼠心肌仅有少量凋亡细胞 ,p5 3、Fas和Bcl 2的免疫反应阳性 ,Bax免疫反应阴性。糖尿病 30d后 ,心肌的凋亡细胞阳性指数开始升高 ,糖尿病 90d仍持续较高水平。p5 3、Fas、Bcl -2和Bax分别于糖尿病 4 5d、4 5d、4 5d和 30d开始升高 ,并于糖尿病 6 0d、75d、75d和 6 0d达高峰。结论 糖尿病大鼠心肌细胞凋亡增加 ,凋亡相关蛋白的表达水平也增加。

线粒体功能障碍与动脉粥样硬化及其危险因素

动脉粥样硬化(AS)严重威胁着人类的健康,其发病机制较为复杂。近年来,有关线粒体功能障碍与AS关系的研究日益增多。因活性氧簇产生过量而引发的线粒体氧化损伤,尤其是线粒体DNA损伤所导致的线粒体功能障碍在AS发生及其相关危险因素(如高血脂、高血压、吸烟、年龄、糖尿病、肥胖、高同型半胱氨酸血症)中起关键作用。现就线粒体功能障碍与AS形成之间的关系进行综述。

TSBAb-ELISA法的建立与临床初步应用

利用杂交瘤技术制备了抗人甲状腺刺激阻断抗体（ｔｈｙｒｏｉｄ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｂｌｏｃｋｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＴＳＢＡｂ）单克隆抗体。两株单抗均为ＩｇＧ１，识别同一抗原表位。与甲状腺球蛋白（ｔｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，ＴＧ）、甲状腺过氧化酶（ｔｈｙｒｏｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＴＰＯ）无交叉反应，与促甲状腺激素受体抗体（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＴＲＡｂ）、甲状腺刺激抗体（ｔｈｙｒｏｉｄｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＴＳＡｂ）有部分交叉反应。用间接ＥＬＩＳＡ法检测甲减患者血清ＴＳＢＡｂ水平，表明该法有一定特异性、灵敏、稳定、简便。利用抗人ＴＳＢＡｂ单抗和ＥＬＩＳＡ技术，可为临床检测ＴＳＢＡｂ和探讨自身免疫性甲状腺机能低下的发病机理提供一种新的手段。

促红细胞生成素治疗心血管疾病的研究进展

慢性心功能不全患者普遍存在贫血。促红细胞生成素(EPO)不仅改善贫血,同时改善心功能不全患者的左心室功能,提高生活质量。EPO的非促红细胞生成作用包括抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和血管生成。这些作用可能是其能治疗卒中、心肌缺血/再灌注损伤等心血管疾病的治疗学基础。

pcDNA3.1/hTSHRa重组体的构建

目的:构建重组体pcDNA3.1/hTSHRa。方法:提取人正常甲状腺组织总RNA,逆转录后进行PCR,将纯化的扩增产物hTSHRa与表达载体pcDNA3.1TOPO连接后转化TOP10E.coli感受态菌。重组质粒经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法进行鉴定。结果:PCR扩增得到hTSHR膜外区N端753bp的基因片段hTSHRa。该片段与表达载体pcDNA3.1TOPO连接后转化TOP10E.coli感受态菌。重组质粒经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHRa片段插入序列和方向正确。结论:hTSHRa片段插入真核表达载体pcDNA3.1TOPO,插入序列和插入方向正确,可用于后续基因表达。

大鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子的分泌与内毒素剂量关系的初步分析

目的 :确定内毒素 (LPS)诱导巨噬细胞产生肿瘤坏死因子 (TNF)的适宜用量 ,建立内毒素感染的细胞模型。方法 :选用不同剂量的LPS ,刺激大鼠腹腔巨噬细胞 ,分别于不同的刺激时间收集细胞培养上清。TNF细胞毒效应用L929细胞和WEHI-164细胞检测,TNF -α浓度用ELISA法检测。结果 :当LPS使用浓度为0.1μg/ml至5μg/ml时 ,其诱导产生的TNF细胞毒效应有逐渐增加的趋势 ,超过此剂量时 ,TNF细胞毒效应反而降低 ;巨噬细胞TNF的分泌量也随LPS剂量的增加而减少。结论 :LPS在一定的浓度范围内 ,巨噬细胞培养上清中TNF含量明显增多 。

β-肾上腺素受体激酶与心力衰竭治疗的研究进展

全球大约有2 300万人患有心力衰竭,对β-肾上腺素受体的反应性降低是心力衰竭的特征并由此导致心脏功能异常。通过转基因的办法抑制β-肾上腺素能受体激酶1(βARK1)进而改善衰竭心脏的收缩功能和对β-肾上腺素能神经兴奋的反应性,使得βARK1的抑制成为重要的治疗心力衰竭的手段。本文就βARK1研究的最新进展作一综述。

大鼠脑出血后体感诱发电位的改变与脑水肿的形成

目的:使用体感诱发电位(SEP)对脑出血(ICH)模型进行评价,并观察ICH后不同时期脑水肿的形成过程。方法:采用脑立体定向术制备大鼠脑内囊出血的模型。观察大鼠在手术前及手术后不同时期内神经系统功能、SEP、脑组织形态学及脑组织含水量的改变。结果:与假手术组相比,实验组(6h、12h、1d、5d)、各波潜伏期延长(P<0.05),脑组织含水量增多(P<0.05);实验组(2d、3d)各波潜伏期明显延长(P<0.01),脑组织含水量明显增多(P<0.01);实验组(7d)各波潜伏期缩短(P>0.05),脑组织含水量减少(P>0.05)。脑组织形态学与神经系统功能呈现相应的改变。结论:SEP是评价脑立体定向术制备大鼠脑内囊出血模型的最客观指标,脑出血后脑水肿的形成是一个动态过程。

hTSHR胞膜外区片段真核表达载体的构建和表达

目的：构建人类促甲状腺激素受体（hTSHR）胞膜外区氨基端的两个片段hTSHRf（aa29-100）、hTSHRe（aa101-278）的真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hT-SHRe,并在CHO细胞中进行表达。方法：RT-PCR法从人甲状腺正常组织的cDNA中扩增hTSHRf和hTSHRe,定向插入真核表达载体pcDNA3.1（D）/V5-His-TOPO中,经酶切、PCR和测序鉴定后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达,RT-PCR扩增转染细胞的cDNA、Western blot分别鉴定hTSHR在CHO细胞中mRNA和蛋白水平的表达。结果：RT-PCR分别扩增两个片段的阳性克隆株,所得片段大小与预期一致,经Western blot鉴定,相对分子质量（Mr）分别为11900、23600左右,与预期的大小相符。结论：真核表达载体pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe构建成功,RT-PCR和Western blot检测证实重组质粒能在CHO细胞中高效表达,为进一步研究pcDNA3.1-hTSHRf和pcDNA3.1-hTSHRe在体内的基因表达,建立Graves＇病的动物模型奠定了基础。