应用recA-RFLP调查洋葱伯克霍尔德菌医院血流感染暴发

目的探讨聚合酶链反应-限制性内切酶多态性(PCR-RFLP)分析法调查洋葱伯克霍尔德菌医院感染暴发的价值。方法对分离自某医院心脏手术后发生医院血流感染患者的经API20NE条鉴定系统鉴定的28株洋葱伯克霍尔德菌进行recA基因PCR扩增,应用限制性内切酶HaeⅢ对recA基因PCR扩增片段进行PCR-RFLP分析。同时采用微量肉汤稀释法和琼脂纸片扩散法进行药敏试验。结果全部洋葱伯克霍尔德菌医院血流感染临床株recA基因的PCR扩增阳性,PCR产物经HaeⅢ限制性内切酶酶切,出现一致的谱型,符合RFLP-J型,即B.stabilis(基因型Ⅳ)。28株菌对四环素、阿米卡星、庆大霉素耐药,对氟喹诺酮、碳青霉烯类、复方磺胺甲口恶唑、米诺环素、头孢曲松、头孢他啶、哌拉西林敏感,对头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、头孢氨噻肟的敏感性存在微小差异。结论此次医院血流感染暴发为洋葱伯克霍尔德菌B.stabilis(基因型Ⅳ)所致。recA基因的PCR-RFLP分型对洋葱伯克霍尔德菌医院感染暴发的调查及追踪溯源有重大价值。

鲍曼不动杆菌多重耐药及其播散机制的研究进展

近20年来，鲍曼不动杆菌已经成为医院感染中重要的病原菌。由于鲍曼不动杆菌具有快速获得对多种抗菌药物耐药的能力，多重耐药、泛耐药的鲍曼不动杆菌分离株不断在医院中出现，已成为威胁公众健康的重要问题，而对其多重耐药及播散机制的研究也日趋深入。鲍曼不动杆菌的固有耐药途径包括：酶的降解作用，靶位修饰或保护，降低对抗菌药物的通透或增加对抗菌药物的主动泵出；

志贺菌临床株耐药性分析及对氟喹诺酮类抗生素耐药机制的研究

目的:了解本地区志贺菌抗生素耐药情况,探讨志贺菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制和耐药基因的突变及流行情况。方法:K-B纸片扩散法测定2009—2010年天津地区临床分离的119株志贺菌的药敏情况,对氟喹诺酮耐药志贺菌的gyrA、parC基因及质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-ib-cr、qepA进行扩增、测序,将PMQR阳性菌株与大肠埃希菌J53ARZ进行质粒接合试验,比较接合前后受体菌对抗菌药物的敏感性变化。结果:119株志贺菌对萘啶酸敏感率最低(1.72%),其次为氨苄西林(2.52%)及复方磺胺甲口恶唑(3.36%)。福氏志贺菌与宋内氏志贺菌对氟喹诺酮耐药性差别较大,5株志贺菌对环丙沙星等氟喹诺酮耐药,均为福氏志贺菌,其中2株对左氧氟沙星耐药。4株同时存在gyrA83、87位点及parC80位点突变,1株缺乏gyrA87位点突变。PMQR基因阳性菌3株,包括1株qnrS及2株aac(6′)-ib-cr阳性菌,接合菌对多种抗生素的敏感性降低。结论:本地区志贺菌临床株对多种抗生素的多重耐药率较高,对氟喹诺酮耐药率低于5%。喹诺酮耐药机制既有染色体介导靶位酶突变,也存在质粒介导喹诺酮耐药。

抗菌药物预防剖宫产手术部位感染国内文献荟萃分析

目的 探讨剖宫产围手术期预防性使用抗菌药物策略对控制其手术部位感染和子宫内膜炎的影响。方法检索相关医学文献数据库，对抗菌药物预防剖宫产手术部位感染的临床随机对照研究进行收集、筛选、评价并提取数据进行荟萃分析。结果荟萃分析表明，首剂术前0．5～2h或钳夹脐带后给予短期抗菌药物较术后长期使用抗菌药物预防剖宫产手术部位感染（OR=0．34，95％CI为0．24～0．48，P％0．05）和产后病率（OR：0．40，95％CI为0．32～0．48，P％0．05）的效果显著；对上述2种用药策略效果差异无论是在预防单纯选择性剖宫产术（OR=0．45，95％CI为0．11～1．83，P〉0．05）或是在选择／非选择性剖宫产术（OR=0．55，95％CI为0．16～1．96，P〉0．05）术后子宫内膜炎方面均无统计学意义。结论推荐术前0．5～2h或钳夹脐带后短期使用抗菌药物作为预防剖宫产手术相关感染的一项策略。

2株产气肠杆菌临床株对厄他培南耐药机制的研究

目的研究2株产气肠杆菌临床株Ea293和Ea2880对厄他培南耐药的机制。方法采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),应用K-B法检测菌株对美罗培南、亚胺培南及厄他培南的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;聚合酶链反应(PCR)扩增碳青霉烯酶基因(KPC,IMP-1、2组,VIM)和广谱及超广谱β-内酰胺酶基因(TEM,SHV,CTXM-1、2、9组ESBI.s),并进行序列分析;十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行细菌外膜蛋白分析,并对外膜蛋白基因OmpE36进行PCR扩增及序列分析。结果药物敏感试验显示,产气肠杆菌Ea293和Ea2880均对厄他培南耐药。PCR扩增4种碳青霉烯酶基因和5种广谱及超广谱β-内酰胺酶基因,仅Ea2880的SHV和CTX-M-9组ESBLs基因阳性,SHV基因的PCR产物测序为SHV-11型广谱酶。细菌外膜蛋白SDS-PAGE结果显示,与碳青霉烯类抗生素敏感的产气肠杆菌Eal885相比,Ea293和Ea2880均缺失42 kD左右的条带,即OmpE36。PCR扩增外膜蛋白基因OmpE36,Ea2880可见预期片段,DNA序列分析显示其与GenBank公布的产气肠杆菌标准株ATCC 13048的相似性为87%,氨基酸序列的相似性亦为87%;而Ea293未扩增出预期片段。结论产气肠杆菌临床株Ea293与Ea2880对厄他培南耐药的主要原因可能是外膜蛋白基因OmpE36缺失,同时Ea2880可能还有CTX-M-9组ESBLs参与。

2株阴沟肠杆菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究

目的研究2株阴沟肠杆菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法采用微量肉汤稀释法测定MIC,同时应用K-B法检测对亚胺培南、美罗培南及厄他培南的耐药性,用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;PCR扩增检测碳青霉烯酶(blaKPC、blaIMP-1组、blaIMP-2组、blaVIM)编码基因和广谱及超广谱β-内酰胺酶(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-1组、blaCTX-M-2组、blaCTX-M-9组)编码基因;SDS-PAGE进行细菌外膜蛋白(Omp)分析,并对外膜蛋白基因ompF进行PCR扩增。结果药敏试验显示2株阴沟肠杆菌具有对广谱青霉素、第三、四代头孢菌素、碳青霉烯类、氟喹诺酮类、氨基糖甙类抗生素和酶抑制剂复合制剂的多重耐药性。PCR扩增4种碳青霉烯酶基因和5种广谱及超广谱β-内酰胺酶基因,其中一株阴沟肠杆菌TEM及CTX-M-9组ESBLs基因扩增阳性,其余基因扩增阴性。细菌外膜蛋白SDS-PAGE结果显示:与碳青霉烯类抗生素敏感的阴沟肠杆菌比较,2株碳青霉烯类抗生素耐药的阴沟肠杆菌均缺少分子量在38KDa左右的条带,即OmpF;且PCR扩增其外膜蛋白基因ompF均为阴性。结论 2株阴沟肠杆菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要与外膜蛋白OmpF的缺失有关。

产ESBLs大肠埃希氏菌临床株EC98A7表型和基因型研究

目的 研究大肠埃希氏菌多重耐药临床菌株EC98A7对超广谱β 内酰胺类抗生素的耐药机制。方法 采用K B法、双纸片协同试验、接合传递试验、质粒谱分析、PCR、PCR RFLP和DNA序列分析等方法分析EC98A7的表型及基因型。结果 EC98A7对头孢他啶等第三代头孢菌素和庆大霉素等抗生素高度耐药 ,并能将全部耐药表型通过一个大小约 80kb的质粒传递给受体株。双纸片协同试验证明EC98A7产ESBLs。PCR等证实EC98A7含有TEM型和CTX M型ESBLs。PCR RFLP显示TEM型ESBL含有E10 4K突变 ,无R16 4H突变。同源性分析表明 5 0 3bp的blaCTX M DNA片段与CTX M亚组 1同一性最高 ,与blaCTX M 3 相比仅有 1个核苷酸改变即A787G ,对应氨基酸改变为D2 39G。结论 大肠埃希氏菌多重耐药临床株EC98A7同时产TEM型及CTX M型两种ESBLs ,推测这与对超广谱 β 内酰胺类抗生素的高度耐药有关。

天津地区福氏志贺菌整合子携带及耐药性研究

目的了解天津地区不同年份福氏志贺菌血清型分布，整合子携带情况，耐药性及其变化趋势。方法采用血清学方法对天津地区不同年份分离的56株福氏志贺菌进行分型；PCR扩增整合子整合酶及可变区，并测序；采用K-B法测定其对16种抗菌药物的敏感性。结果1981～1983年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为87．50％（28／32），其中27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA；2009～2011年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为91．67％（22／24），可变区及3末端扩增均阴性。1981～1983年分离株福氏志贺菌2类整合酶均阴性；2009～2011年分离株福氏志贺菌2类整合酶阳性率79．17%（19/24），可变区含dfrA1、sat1、aadA1，介导对甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药。有17台17株福氏志贺菌1、2类整合酶均阳性。1981～1983年分离株福氏志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及甲氧苄啶／磺胺甲噁唑耐药率高，多重耐药率为65．63％；2009～2011年分离株福氏志贺菌对氦苄西林、链霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁哗、哌拉西林和四环素耐药率高，多重耐药率为83．33％。结论1、2类整合子广泛存在于天津地区福氏志贺菌中，其中1类整合子3保守末端可能缺失或存在变异。2009～2011年分离株福氏志贺菌对抗菌药物耐药性较1981～1983年分离株增强，多重耐药率增高。福氏志贺菌优势血清型发生转变，血清型分布呈现多样化。

鲍曼不动杆菌临床株多重药物外排泵AdeABC的研究

目的研究鲍曼不动杆菌（Acinetobaeter baumannii）临床株外排泵AdeABC的表达与耐药的关系及表达调控。方法微量肉汤稀释法检测鲍曼不动杆菌临床株对抗菌药物的敏感性及泵抑制剂作用，RT—PCR检测泵基因adeB的mRNA表达水平，PCR扩增泵调控基因adeRS并测序分析。结果30株多重耐药的鲍曼不动杆菌临床株及5株敏感株均存在泵结构基因片段adeB和调控基因adeRS，随机选取15株多重耐药株中均检测到adeB的mRNA表达，而在5株敏感株中无表达。测定2株多重耐药株调控基因adeRS序列均出现基因突变，发生氨基酸替代及缺失。结论鲍曼不动杆菌临床株外排泵AdeABC的表达可能与耐药性有关，在多重耐药株中存在着调控基因adeRS的基因序列变化。

肠杆菌科临床株产超广谱β-内酰胺酶的基因多样性研究

目的 研究本地肠杆菌科临床株产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的基因型。方法 采用K B法、接合传递试验、质粒谱分析、PCR、PCR 限制性片段长度多态性分析 (RFLP)及DNA序列分析等方法对 3 3株产ESBLs肠杆菌科临床株的表型及基因型进行分析。结果 3 3株临床株对头孢噻肟的耐药率为 85 % ,明显高于头孢他啶。PCR检测结果为 2 8株临床株携带blaCTX M ESBLs ,2 4株携带blaTEMDNA ,9株携带blaSHVDNA。PCR RFLP检测结果为临床株EC98A7的TEM酶含有E10 4K突变 ,未发现发生G2 3 8S突变的SHV酶。DNA序列分析及同源性比较表明 4株临床株(EC98A7、EB5 6、CFR78及KP9941)的blaCTX MDNA片段属于CTX M亚组 1,分别与blaCTX M 3和blaCTX M 12的同一性最高。结论 本地肠杆菌科临床株 85 %携带CTX M型 ,多数菌株同时携带 2种以上 β 内酰胺酶。大肠杆菌EC98A7同时携带CTX

某传染病医院抗菌药物使用管理与干预分析

目的:评价抗菌药物管理策略对医院内抗菌药物使用影响。方法:2006-2008年间建立抗菌药物合理使用指导小组、推进感染控制计划、制定针对性的抗菌药物使用指南、展开教育培训、推行前瞻性抗菌药物使用监测、对临床抗菌药物使用的支持指导与反馈等。结果:咪唑类、抗真菌类、氟喹诺酮类、第三代头孢菌素和含酶抑制剂的β-内酰胺类的收治患者人均使用频度降幅排在前列。同时常用的非限制使用的一线药物使用构成比例增加,包括β-内酰胺霉敏感青霉素类、大环内酯类、第二代头孢菌素、四环素类、氨基糖苷类、磺胺类排在前列。医院抗菌药物使用量逐年递减,持续效果显著。结论:系统而有效的抗菌药物管理机制是抗菌药物合理使用的重要保障。

cid和lrg基因表达与表皮葡萄球菌临床株生物被膜形成关系的研究

目的 cid和lrg操纵子是细菌程序性死亡和溶解的重要调控基因,本研究旨在探究表皮葡萄球菌临床株cidA和lrgA基因及其mRNA表达水平与生物被膜形成的关系.方法 前期收集的表皮葡萄球菌（来源于血液、尿液、痰、分泌物及导管等生物材料表面）临床株39株,通过黏附试验和icaA基因扩增将其分为生物被膜形成菌株20株,非生物被膜形成菌株19株,PCR扩增表皮葡萄球菌cidA和lrgA基因片段,半定量RT-PCR检测cidA和lrgA mRNA水平,计算cid/lrg mRNA比率.结果 39株表皮葡萄球菌临床株均可扩增出cidA和lrgA的基因片段.随机选取生物被膜形成菌株表皮葡萄球菌Y36和非生物被膜形成菌株表皮葡萄球菌Y26检测培养2、4、6、8、10 h的cidA和lrgA的表达水平,两株菌cidA mRNA均在培养4 h后达峰,lrgA mRNA均在培养6 h后达峰.39株表皮葡萄球菌培养4 h后,生物被膜形成菌株与非生物被膜形成菌株,菌株中cidA基因相对表达水平分别为0.340±0.250和0.406±0.408（P=0.541）,lrgA基因相对表达水平为0.325±0.218和0.253±0.211（P=0.299）,两组相比差异均无统计学意义.cid/lrg mRNA比率,生物被膜形成菌株为1.067±0.529,非生物被膜形成菌株为1.958±1.877,两组总体分布差异有统计学意义（P=0.001）.结论 表皮葡萄球菌临床株cidA和lrgA基因表达可能具有一定的时限性,cidA和lrgA基因在生物被膜形成菌株与非生物被膜形成菌株表皮葡萄球菌的表达没有明显差异,cid/lrg mRNA比率可能具有一定生物学意义.

葡萄球菌生物被膜调控机制的研究进展

随着各种医疗侵袭性操作日益增多，细菌生物被膜感染占医院内细菌感染的比例逐年上升，且后果十分严重。其中葡萄球菌是最常见的病原菌。近些年的研究认为，细菌细胞死亡和溶解对细菌生物被膜的形成和发展有重要作用。目前已知的对细菌死亡和溶解的调节机制复杂而多样。

耐三代头孢菌素阴沟肠杆菌临床株中CTX-M型ESBLs与Ⅰ类整合子的相关性

目的研究CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)及Ⅰ类整合子在耐三代头孢菌素阴沟肠杆菌中的分布,进一步探讨Ⅰ类整合子与CTX-M型ESBLs的关系。方法运用K-B法检测阴沟肠杆菌临床株的耐药表型,双纸片协同试验(DDST)初筛产ESBLs的菌株,聚合酶链反应(PCR)扩增确证产CTX-M型ESBLs和含有Ⅰ类整合子的临床菌株,套式PCR及序列测定寻找携带CTX-M型ESBLs基因盒的Ⅰ类整合子。结果37株耐药菌中,21株菌产生CTX-M型ESBLs;20株菌含有Ⅰ类整合子;在13株同时产生Ⅰ类整合子和CTX-M型ESBLs的临床株中,3株菌CH4、CH11和Q1的CTX-M型ESBLs基因盒分布在Ⅰ类整合子上。结论Ⅰ类整合子的存在增加了ESBLs在临床株中水平播散的危险,是造成多重耐药株在院内暴发流行的重要原因。

耐药性播散机制进展——整合子-基因匣子系统

整合子 -基因匣子系统是近年在细菌中发现的天然克隆与表达系统 ,能捕获外来耐药基因 ,在整合子中形成多种耐药基因的组合、排列 ,是细菌耐药性播散的机制之一 ,对细菌及质粒基因组的进化具有重要意义。本文对整合子 -基因匣子系统的结构特征、基因匣子的移动性与表达、整合子的流行病学及超整合子等方面进行综述。

eDNA水平差异对表皮葡萄球菌临床株生物被膜形成能力的影响

目的检测表皮葡萄球菌（表葡菌）临床株生物被膜的形成能力，研究胞外DNA（eDNA）水平差异对表葡菌临床株生物被膜形成能力的影响。方法收集227株临床分离表葡菌，黏附试验检测其生物被膜的形成能力，PCR方法扩增icaA基因片段，黏附试验阳性和icaA基因扩增阳性的表葡菌为成膜组，黏附试验阴性和icaA基因扩增阴性的表葡菌为非成膜组，应用浮游培养法和微量板静置培养法检测eDNA水平，激光共聚焦显微镜（CLSM）观察生物被膜中eDNA的分布。结果227株表葡菌中黏附试验阳性26株，icaA基因阳性32株。选取黏附试验阳性和icaA基因扩增阳性的成膜组表葡菌20株，黏附试验阴性和icaA基因扩增阴性的非成膜组表葡菌19株，浮游培养2、4、6h后，成膜组菌株的eDNA水平分别为（32．2±10．1）μg／ml、（33．6±11．9）μg／ml、（34．3±10．0）μg／ml，非成膜组菌株的eDNA水平分别为（28．7±8．9）μg／ml、（31．5±11．7）μg／ml、（31．8±12．7）μg/ml，浮游培养成膜组菌株各时相eDNA水平分别高于非成膜组菌株，但差异尚无显著性（P〉0．05）。微量板静置培养法成膜组20株eDNA水平为（740．0±264．4）ng／A600，高于非成膜组19株eDNA水平（80．1±31．1）ng／A600两组之间比较差异具有显著性（P〈0．05）。通过AO-PI荧光染色于CLSM下观察静置培养的成膜株表葡菌Y36，其生物被膜中可见eDNA分布；非成膜株Y26没有生物被膜结构形成，未见eDNA分布。结论表葡菌临床株具有形成生物被膜的能力，eDNA是表葡菌形成生物被膜的重要基质成分，在判断表葡菌生物被膜形成能力方面微量板静置培养法检测eDNA水平优于浮游培养法。