天津地区大肠埃希菌临床株质粒介导的喹诺酮类耐药机制的研究

目的了解天津地区临床分离的大肠埃希菌中qnr、aac(6')-Ib-cr及qepA基因的流行情况,分析阳性菌株感染的微生物学及临床特征。方法从天津某三甲医院收集环丙沙星耐药(CPLX,MIC≥4μg/mL)的大肠埃希菌共75株,采用PCR法检测qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib及qepA基因,对aac(6')-Ib基因阳性菌株用FokⅠ酶切确认aac(6')-Ib-cr基因,接合试验验证qnr的转移性。所有阳性菌株用PCR法检测β-内酰胺酶基因,并收集阳性菌株感染患者临床资料进行分析。结果 75株环丙沙星耐药的大肠埃希菌中共有18株(24%)携带qnr基因和(或)aac(6')-Ib-cr基因,其中qnrB、qnrS和aac(6')-Ib-cr检出率分别为5.3%,4%和21.3%,未检出qnrA和qepA。5株qnr阳性菌株均接合传递成功。18株qnr/aac(6')-Ib-cr阳性的大肠埃希菌中均检测出β-内酰胺酶基因。阳性菌株对喹诺酮类和头孢菌素类药物高度耐药且主要来源于泌尿系感染,感染患者均为中老年人。结论天津地区临床存在qnr和aac(6')-Ib-cr阳性菌株的流行,这是首次在天津发现qnr介导的喹诺酮类耐药。

天津地区耐甲氧西林葡萄球菌的分子流行病学研究

目的:了解天津地区葡萄球菌的耐药状况、分子分型及遗传学特点。方法:受检菌株94株,抗生素药敏试验测定;应用PCR及多重引物PCR技术对耐甲氧西林葡萄球菌中的葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)以及盒染色体重组酶基因(ccr)进行基因分型;8株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行脉冲场凝胶电泳分型;6株做多位点测序分型(MLST)。结果:8株MRSA对包括苯唑西林在内的多种抗生素耐药,但MRSA和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)对糖肽类和新的抗革兰阳性菌药物均敏感;天津地区MRSA多含有Ⅲ型SCCmec,MLST分型以ST239为主;MRCNS中的SCCmec类型复杂,用现有的方法大多不能分型。结论:天津地区葡萄球菌中耐药情况较为严重,本地区MRSA所携带的SCCmec并非来自MRCNS,而MRCNS含有更为复杂的SCCmec。

肺炎支原体或衣原体感染与系统性红斑狼疮关系的研究

目的:探讨肺炎支原体或衣原体感染与系统性红斑狼疮(SLE)的关系。方法:运用ELISA法定量检测40例SLE患者和40例年龄、性别相对应的健康人群血清中肺炎支原体IgG抗体和衣原体IgG抗体。结果:病例组肺炎支原体IgG阳性率47.5%,较对照组(25.0%)明显增高,抗体阳性者的抗体活度无统计学差异。病例组衣原体IgG阳性率42.5%,与对照组(50.0%)无统计学差异,抗体阳性者的抗体活度也无统计学差异。结论:SLE和肺炎支原体感染有关,肺炎支原体感染可能对SLE发病起促进作用。未发现SLE和衣原体感染有关。

8株医院血流感染肺炎克雷伯菌的PFGE分型

目的应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对某医院同一外科病房临床分离的8株肺炎克雷伯菌进行同源性分析,为医院感染控制提供依据。方法对此8株肺炎克雷伯菌,采用微量肉汤稀释法和K-B法进行药物敏感试验,并以PFGE技术进行基因分型。结果药物敏感试验结果显示,除菌株Kp1外,菌株Kp2等其他7株肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物具有相同的药敏谱,且为多重耐药菌;PFGE分析亦显示此7株菌为同一谱型。结论此外科病房临床分离的8株肺炎克雷伯菌中有7株来源于同一克隆株,提示可能是一次医院感染暴发流行。

天津地区20年度志贺菌耐药性分析及ERIC分型研究

目的比较天津市20余年跨年度(1983年与2009年)两批分离的细菌性痢疾致病菌志贺菌优势菌型分布变化及耐药状况,并通过分子分型研究其流行病学溯源。方法分离鉴定93株志贺菌血清型,并针对15种抗生素研究其耐药特点。使用肠杆菌科基因间的的重复序列PCR(enterobacterial repetitive intergenic consensus ERIC-PCR)对志贺菌进行同源性分析。结果 2009年志贺菌D群分离率较1983年明显增加。药敏结果示1983年所有福氏志贺菌对除庆大霉素以外的传统抗生素四环素、链霉素、氯霉素、的耐药率较高,在76.5%～100.0%,对阿米卡星、庆大霉素、三、四代头孢、喹诺酮类及亚胺培南100.0%敏感。2009年药敏示志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素的耐药率降低。而对除外的青霉素类,阿米卡星、庆大霉素,三、四代头孢及喹诺酮类药物耐药性均有不同程度增加。结论天津市志贺菌优势血清型已发生变迁。临床上大量使用抗生素导致福氏志贺菌较宋内志贺菌对多种抗生素耐药性增加明显。宋内志贺菌对四代头孢及喹诺酮类药物100.0%敏感。ERIC-PCR是一种快捷有效的基因分型法,可为同源性分析和爆发流行时追根溯源建立简便可行的方法。

葡萄球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制研究

目的 了解临床分离凝固酶阳性和阴性葡萄球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法 应用 PCR-RFL P、PCR- SSCP技术及利血平逆转实验 ,检测 gyr A基因的突变及 nor A基因的表达。结果 40株凝固酶阳性(70 .2 %)和 2 8株凝固酶阴性葡萄球菌 (77.8%)检出 gyr A基因 84位点突变 ;4株未检测出 84位点突变的菌株SSCP带型与标准菌株 SA42和 SA 42 R均不同 ;利血平逆转实验发现 88%的凝固酶阳性和 72 %凝固酶阴性葡萄球菌存在 nor A耐药表型 ;36株凝固酶阳性和 2 0株凝固酶阴性葡萄球菌涉及两种耐药机制。结论 gyr A基因 84位点突变可能是喹诺酮类药物靶位耐药的重要途径之一 ,其他位点突变也可能存在 ;多数临床耐药分离株靶位改变和膜耐药双重耐药机制共存。

深部白色念珠菌感染临床株基因分型及药敏分析

目的 了解天津地区院内深部白色念珠菌感染的好发部位 ,分析危险因素 ,研究其基因分型及不同基因型药敏分析。方法 收集深部白色念珠菌感染病例及临床分离株 ,应用 PCR方法扩增白色念珠菌2 5 S r DNA基因内含子区 ,内含子大小及其中可转座 型内含子片段的缺失或插入作为分型依据。采用微量肉汤稀释法对不同基因型白色念珠菌进行药敏分析。结果 深部白色念珠菌感染以肺部感染为主 ,老年患者居多 ,均有基础疾病 ,抗生素、激素的大量使用、各种侵入性操作及免疫功能低下是重要危险因素。临床分离的 2 5株白色念珠菌经 PCR分为三型 :A型 12株 (45 0 bp) ,B型 10株 (84 0 bp) ,C型 3株 (45 0 bp、84 0 bp)。A、B型为主要基因型 ,其药敏结果无显著性差异。结论 必须重视院内深部念珠菌感染的预防和监控。PCR方法快速简捷、特异性强、重复性好 ,比较适合临床白色念珠菌的分型研究。

常见深部念珠菌感染快速基因诊断

目的 研究快速、准确的常见病原念珠菌基因诊断方法 ,为临床深部念珠菌感染的分子诊断奠定基础。方法 收集常见深部念珠菌感染临床株 ,应用多重聚合酶链反应 (PCR)技术扩增念珠菌rDNA的内部转录间隔区ITS1～ITS2 ,根据PCR产物片段的大小进行快速基因鉴定。结果 依据多重PCR电泳图谱将 5 3株常见医院感染念珠菌分为 5型 :(1 )热带念珠菌 1 4株 ,单一条带 ,大小约 35 0bp ;(2 )白色念珠菌 2 5株 ,2条带 ,大小约 1 5 0bp和 5 5 0bp;(3)光滑念珠菌 8株 ,单一条带 ,大小约 90 0bp;(4 )克柔念珠菌 5株 ,单一条带 ,大小约 5 5 0bp ;(5 )乳酒念珠菌 1株 ,单一条带 ,大小约 70 0bp。常见病原菌经PCR扩增均无产物。 结论 快速多重引物PCR诊断结果与常规生化鉴定一致 ,检出率 1 0 0 % ,无假阳性。此方法简单、快速灵敏、特异性高、重复性好 。

大肠埃希菌耐药机制研究进展

大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药机制相当复杂,主要包括产生灭活抗生素的酶、改变药物作用靶位、细胞外膜通透性的改变及细菌药物外排泵。近年来对其耐药机制研究较多,尤其是在质粒介导耐药性的研究上取得了一些进展。

屎肠球菌临床株对氟喹诺酮耐药机制的研究

目的探讨临床分离屎肠球菌对氟喹诺酮类(FQs)抗菌药物的耐药机制。方法用琼脂二倍稀释法测定应用多重耐药泵抑制剂利血平前后,6种FQs抗菌药物对临床分离的35株屎肠球菌的MIC；PCR扩增耐药株和敏感株parC和gyrA喹诺酮耐药决定区(QRDR)并测序。结果应用利血平之后,诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、加替沙星、莫西沙星对35株屎肠球菌MIC下降1/2或1/2以上的株数依次为35、29、1、0、6、2。随机挑选了1株FQs敏感菌和5株FQs耐药菌进行parC基因和gyrA基因QRDR序列分析。5株FQs耐药株全部具有parC和gyrA双靶位突变,ParC氨基酸替代类型为Ser-80→Ile(4株)或Arg(1株),GyrA为Ser-83→Ile(1株)、Glu-87→Lys(2株)或Gly(2株)。敏感株的QRDR没有氨基酸的改变。结论靶位改变和主动外排共同构成屎肠球菌临床株对FQs的耐药机制。

与ISEcp1-like插入序列相关的CTX-M型ESBLs基因传播机制研究

目的研究CTX-M-ESBLs在天津地区肺炎克雷伯菌中的传播与ISEcp1-like插入序列及1类整合子的关系。方法采用PCR-mapping、Southern印迹杂交及DNA序列分析等方法检测CTX-M-ESBLs基因,及其与ISEcp1-like插入序列和1类整合子的关系。结果46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中44株(95.7%)携带CTX-M-1组和(或)CTX-M-9组基因,未发现CTX-M-2组基因。60%的CTX-M-1组β内酰胺酶基因和73.7%的CTX-M-9组β内酰胺酶基因上游存在ISEcp1-like插入序列。ISEcp1-like插入序列与CTX-M-3及CTX-M-14基因间隔区序列不同。46株中25株(54.3%)携带1类整合子基因,PCR-mapping及Southern印迹杂交未发现CTX-Mβ内酰胺酶基因在整合子上的证据。结论天津地区肺炎克雷伯菌临床株中存在CTX-M-ESBLs的流行,许多CTX-M-ESBLs基因上游存在ISEcp1-like插入序列。ISEcp1-like插入序列可能与CTX-M型超广谱酶基因在天津市肺炎克雷伯菌临床株中的播散有关。

金黄色葡萄球菌基因分型方法的研究进展

随着耐药金黄色葡萄球菌感染率的不断上升,明确流行环节、追踪传染源、切断传播途径成为减少和控制感染的重要策略。近年来,基因分型系统在鉴别菌株间的相关性、确定菌株特征及是否是流行株方面得到了长足发展,并被广泛采用。此文仅就近年来常用金黄色葡萄球菌基因分型方法的研究进展进行综述。

临床分离耐喹诺酮阴沟肠杆菌gyrA基因突变的研究

目的 :检测临床分离耐喹诺酮阴沟肠杆菌DNA促旋酶gyrA基因突变情况。方法:收集临床分离耐喹诺酮阴沟肠杆菌30株及敏感株10株 ,测定其对萘啶酸、环丙沙星、氧氟沙星的最低抑菌浓度 (MIC) ;用聚合酶链反应(PCR)扩增gyrA基因部分片断 ,对PCR产物进行限制性片断长度多态性 (PCR -RFLP)及单链构象多态性(PCR -SSCP)分析 ,检测gyrA突变情况。结果:30株耐喹诺酮菌株都检测到gyrA基因突变 ,PCR -RFLP均显示两条不同于敏感株的电泳带 ,其PCR -SSCP则检测到4种不同于敏感菌的迁徙率条带 ;而10株敏感菌均未检测到gyrA基因突变。结论:阴沟肠杆菌对喹诺酮类药物耐药性与gyrA基因突变有关 ,gyrA基因第83位氨基酸密码子突变可能为其耐药的主要原因。

两株临床分离绿脓杆菌对亚胺培能耐药机理的初步研究

本文采用外膜蛋白图谱法，研究了两株从天津地区新近临床分离的耐药绿脓杆菌对亚胺培能的耐药机理。在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳图上，发现两株亚胺培能耐药临床菌均丢失了ｏｐｒＤ２，其ｏｐｒＥ的含量亦减少，和亚胺培能敏感的标准对照菌３－Ｂ和亚胺培能耐药的标准对照菌３－Ｃ比较，提示此两临床菌株耐亚胺培能的主要原因可能是ｏｐｒＤ２的丢失。

肠球菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药机制研究进展

肠球菌是多重耐药的重要条件致病菌和医院感染常见病原菌。氟喹诺酮类抗菌药是一类广谱抗菌药,其作用靶位是细菌的Ⅱ型拓扑异构酶,包括DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ。随着氟喹诺酮类抗菌药在临床广泛应用,肠球菌对其耐药性迅速增长。肠球菌对氟喹诺酮类抗菌药的耐药机制主要为靶位改变和药物主动外排导致的细胞内药物积聚减少。

念珠菌耐药相关基因研究

目的研究耐氟康唑热带念珠菌临床株Fc 30的基因突变耐药机制。方法对氟康唑靶酶基因erg 11进行PCR扩增,DNA测序,对比分析临床耐药株与敏感株及标准株的靶酶基因DNA序列,确定耐药株基因一级结构上的突变点,并推测分析靶酶蛋白的氨基酸改变及与氟康唑耐药的相关性。结果氟康唑敏感株Fc 17的erg 11基因DNA序列与氟康唑敏感标准菌ATCC750完全一致,耐药株Fc 30出现+225、+264、+395、+461、+513处点突变,导致132、154位氨基酸突变。结论与敏感株相比,耐氟康唑热带念珠菌Fc30 erg11基因出现Y132F耐药相关突变。

泌尿系感染患者大肠埃希菌fimH基因检测及尿便来源菌株同源性分析

目的：检测尿路致病性大肠埃希菌I型菌毛相关基因fimH携带率，调查相同泌尿系感染患者尿便大肠埃希菌的同源性，对相关基因fimH进行序列分析。方法：89株来自反复发作性尿路感染和急性单纯性膀胱炎患者清洁中段尿分离的大肠埃希菌。PCR方法检测I型菌毛基因fimH，采用Fisher确切概率法比较两组携带率是否有差异。取9名患者尿便同时培养的大肠埃希菌进行药敏初筛分型，同源性分析采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术，对其fimH基因PCR扩增产物进行序列分析。结果：89株检出81株fimH阳性，两组检出率分别为（64／70）91．4％和（17／19）89．4％，P〉0．05。9名患者中5名患者尿便同时分离大肠埃希菌各自存在相同的PFGE型，同一患者尿便同型株中fimH阳性者序列比对无差异，不同型株fimH阳性者其序列均有6～7处变异。结论：fimH基因存在于绝大多数尿路致病性大肠埃希菌中。引起泌尿系感染的大肠埃希菌部分来源于肠道。

手机乙肝感染的调查及消毒的评价

目的 观察口腔科牙钻手机乙肝污染情况及评价不同消毒方法的效果。方法 对使用中的门诊手机采用ELISA及PCR方法HBsAg及PCR方法检测手机污染情况。人工污染手机后，采用不同的消毒方法评价对乙肝的消毒效果。结果 门诊手机的检出率分别为21.1％的HBsAg和28．7％的HBV—DNA。消毒效果以蒸汽高压灭菌。2％戊二醛及2．5％的稳定二氧化氯为最佳。结论 门诊手机存在乙肝污染。稳定性二氧化氯浸入是高效消毒剂可替代。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型研究

目的:了解并确定临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)型别的特点。方法:用常规方法将从天津医科大学第二医院等天津地区8家医院及武汉同济医院临床标本(痰、尿、血及分泌物)中分离细菌,金黄色葡萄球菌的鉴定采用凝固酶实验、常规生化鉴定、M43葡萄球菌乳胶凝集试剂盒及法国生物梅里埃公司的APIstaph条确定,MRSA的检测采用头孢西丁纸片扩散法及mecA基因的检测确定。应用10对引物的多重引物聚合酶链反应技术(M-PCR)扩增MRSA葡萄球菌染色体mec盒的基因片段,对其中不能分型的变异株进行mec基因复合体及ccr基因复合体分型,然后根据mec基因复合体及ccr基因复合体的组合情况对MRSA的型别情况作出判断。结果:本实验共分离出金黄色葡萄球菌127株,MRSA78株,其中天津地区51株,武汉地区27株。78株MRSA经过3组M-PCR方法最终得到SCCmec-Ⅰ型1株,SCCmec-Ⅱ型4株,SCCmec-Ⅲ型62株,SCCmec-Ⅴ型3株,未检测出SCCmec-Ⅳ型及SCCmec-Ⅵ型,并且有8株MRSA用本实验方法不能分型。结论:本实验分离的MRSA临床株的SCCmec以Ⅲ型(或SCCmecⅢ+dcs型)为主。

血小板活化因子乙酰水解酶基因Val379Ala位点多态性与脓毒症易感性相关性研究

目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）基因Val379Ala位点多态性与脓毒症易感性及预后的关系。方法采用PCR-RFLP技术，分析82例不同程度脓毒症患者及90名健康对照者PAF-AH基因Val379Ala位点的多态性，对含有等位基因多态性的片段进行DNA测序分析。结果全部样本经PCR-RFLP分析后，脓毒症组82例中，仅1例纯合子Val／Val型，24例杂合子Val／Ala型，57例纯合子Ala／Ala型；对照组90例中，2例Val／Val型，29例Val／Ala型，59例Ala／Ala型。Val379Ala基因型和等位基因频率：脓毒症组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05），存活组、死亡组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05），轻型脓毒症组、严重脓毒症组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论PAF-AH基因Val379Ala位点多态性与脓毒症易感性、预后及病情严重程度可能不相关。