自杀基因TK腺相关病毒载体的构建及其抑制肿瘤细胞的功能研究

目的探讨腺相关病毒（rAAV）-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（herpes simplex virus thymidinekinase,HSV-TK）（简称rAAV-TK）载体的构建及其生物学效应的初步鉴定。方法用PCR扩增TK序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-TK;采用AAV-Helper Free System包装系统、＂氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提＂及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩,对病毒颗粒进行鉴定;用MB49-PSA细胞对rAAV-TK生物学效应进行初步鉴定。结果成功构建pAAV-TK载体,并经酶切、PCR及测序验证其准确性;rAAV病毒颗粒滴度达2×1010 v.p/mL,浓缩后可达到2×1011~2×1012 v.p/mL;rAAV-TK可以分泌TK基因,加入药物更昔洛韦（Ganciclovir,GCV）和吉地他滨（Gemcitabine,GVC）,该基因能有效诱导膀胱肿瘤细胞MB49-PSA凋亡。结论成功构建rAAV-TK腺相关病毒,体外实验表明rAAV-TK/GVC/GCV系统能高效诱导膀胱肿瘤细胞的凋亡。

模拟缺血再灌注对L-6TG大鼠肌母细胞凋亡的影响

目的探讨模拟缺血再灌注后L-6TG大鼠肌母细胞凋亡的发生机制。方法将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为对照组(C组)和模拟缺血再灌注组(IR组)。C组用模拟再灌注液培养,IR组用模拟缺血液培养4h后换再灌注液培养4h。观测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)及Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体功能;利用流式细胞仪和细胞DNA电泳检测细胞凋亡情况;采用免疫组织化学法检测bcl-2及caspase-3蛋白表达情况,并结合自动图像分析系统对其结果进行半定量分析。结果IR组大鼠肌母细胞模拟缺血再灌注4h后细胞内XOD、Ca2+含量及凋亡百分率明显高于C组(287.88±8.47vs42±3.94U/gprot,1.547±0.017vs7.23±0.28lnMCF,7.23%±0.28%vs0.69%±0.07%,P<0.01),而细胞内SOD及线粒体呼吸功能明显低于C组(43.19±3.64vs248.52±11.26NU/mgprot,9.15%±0.49%vs100%,P<0.01),DNA电泳出现典型的梯状条带,bcl-2及caspase-3蛋白的表达均明显高于C组。结论模拟缺血再灌注后L-6TG大鼠肌母细胞发生凋亡,其机制可能与氧化损伤、钙稳态失衡、线粒体损伤及caspase-3表达增强有关。

间质性膀胱炎膀胱尿路上皮细胞和黏膜层损伤机制的研究概况

间质性膀胱炎目前病因不明，在已提出的病因中膀胱黏膜上皮细胞损伤在间质性膀胱炎病理生理学机制中的作用备受关注。已有多种涉及上皮细胞功能损伤的机制被提出，包括生长因子、细胞因子及其受体对膀胱黏膜上皮的影响；黏膜上皮细胞分化功能的改变；尿中毒性因子对膀胱黏膜上皮细胞的损害；膀胱黏膜上皮细胞保护机制的改变对其功能的影响。此篇文章就这几个问题的研究进展进行综述。

尿液蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立及优化

目的 建立稳定的尿液蛋白质组学双向凝胶电泳技术体系。方法 对尿液蛋白质组双向电泳样品的收集保存、样品制备、上样量、水化方式、水化上样液成分、IPG胶条选择及电泳程序参数等进行了比较研究和条件优化。结果 双向电泳图谱清晰，检测到蛋白斑点数目为（849＋18）个，匹配率达到81．26％。结论 建立了较稳定的尿液蛋白质双向凝胶电泳方法，可用于开展疾病的尿液蛋白质组学研究。

糖基化磷酯酰肌醇锚定型B7-1蛋白的提取及再锚定检测

我们利用糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白（GPI）将目的蛋白锚定于细胞表面，刺激T细胞活化，为研制GPI-B7—1-肿瘤细胞膜疫苗进行技术准备。

诊断试剂临床试验指导原则探讨

目的探讨中美两国诊断试剂临床试验指导原则。方法比较美国FDA和中国SFDA发行的诊断试剂试验的指导原则，并通过具体事例分析两国的诊断试剂试验指导原则之异同。结果对比而言，SFDA给出的指导原则相对笼统；FDA给出的指导原则较为详细，但也有一定缺陷。结论应增加定量测量结果一致性评价的统计指导。