肿瘤的细胞治疗的研究现状及临床应用

本文通过对文献检索和归纳总结,介绍了抗肿瘤治疗中细胞治疗的研究及发展现状及其在临床中的应用。细胞治疗是目前肿瘤生物治疗领域研究的热点,并且国内和国际已经完成了多项Ⅰ/Ⅱ期临床试验,部分已经完成了Ⅲ期临床试验。随着研究的深入,细胞治疗将发挥更重要的作用,得到更广泛的认识和肯定。

粒巨细胞集落刺激因子联合异体肿瘤细胞疫苗治疗晚期实体瘤的疗效观察

目的:探讨粒巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合异体肿瘤细胞疫苗的安全性和有效性。方法:收录病理明确的IV期癌症患者60例,其中恶性黑色素瘤11例,卵巢癌10例,肾癌15例,胃/结直肠癌14例,乳腺癌10例。每周皮下注射肿瘤细胞和GM-CSF分泌细胞混合物1ml;共6次。在第1,5次注射同时,进行DTH接种试验。治疗前后取外周血样进行淋巴细胞亚型及细胞因子检测。治疗完成1个月后进行影像学检查。结果:所有病人对治疗耐受良好,无脱组患者。主要不良反应为,注射局部红肿疼痛,硬结,瘙痒和发热。4例治疗后有影像学好转但未达到部分缓解,40例稳定,16例进展。DTH阳性率68%(41/60)。流式细胞仪检测治疗后CD8+T细胞(CTL)明显增加(P<0.05),CD4+CD25+CD127-T细胞(Treg)降低(P<0.05)。ELISA检测IFN-γ治疗前后的变化无统计学意义,但有升高趋势。结论:异体GM-CSF联合肿瘤细胞疫苗治疗安全,耐受良好,能改善患者的机体免疫状态。

胃癌患者术后化疗联合CIK免疫治疗的临床疗效

目的:评价胃癌患者术后化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)治疗的临床疗效。方法:收集1999年3月至2007年12月在天津医科大学附属肿瘤医院65例胃癌术后化疗联合CIK治疗的患者(化疗联合CIK治疗组)及同期对照130例术后单纯化疗的胃癌患者(单纯化疗组),比较两组的生存率及生存时间;分析受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,确定化疗周期数与CIK治疗次数的分组点;Kaplan-Meier法绘制两组患者的生存曲线,Log-rank法检测两组患者的生存差异。结果:化疗联合CIK治疗组胃癌患者的3、5年总生存率稍高于单纯化疗组,但差异无统计学意义(60%vs 47%,55%vs 23%,P>0.05)。化疗联合CIK治疗组胃癌患者的3、5年无进展生存率明显高于单纯化疗组(48%vs 31%,47%vs 20%,P<0.05)。化疗联合CIK治疗组患者的中位生存时间(overall survival,OS)为96个月,明显高于单纯化疗组的32个月(P=0.001);化疗联合CIK治疗组患者的中位无病进展时间(progression-free survival,PFS)为36个月,高于单纯化疗组的23个月(P=0.011)。单因素分析发现,TNM分期、化疗周期数和CIK治疗周期数与胃癌患者的OS相关;TNM分期、手术方式和CIK治疗周期数与患者的PFS相关。多因素结果显示,化疗周期数是影响OS的独立危险因素,CIK治疗周期数不仅是影响OS,也是影响PFS的独立危险因素。结论:与术后单纯化疗相比,化疗联合CIK治疗明显延长胃癌患者的OS,而且CIK治疗次数增加,临床疗效会更显著。

大剂量IL-2活化的HLA半相合异基因造血干细胞治疗10例晚期难治性肾癌的疗效观察

目的:传统的免疫治疗对晚期难治性肾癌的疗效非常有限,因为肿瘤自身产生了免疫耐受,本研究的目的是探讨大剂量IL-2活化的HLA半相合异基因造血干细胞治疗晚期难治性肾癌的临床疗效。方法:10例晚期肾癌患者以及作为供者的其HLA半相合的亲属入组。所有患音均接受1个疗程的haplo-PBSCs治疗,评估临床疗效和免疫学反应。结果:经IL-2活化后获得的HLA半相合的haplo-PBSCs总数为(2.3～5.5)×10^(10)。活化后,NK细胞和活化淋巴细胞亚群(CD69^+和CD25^+)比例明显升高,而且对肾癌细胞的杀伤活性也明显增强。治疗后,2例部分缓解(PR),6例疾病稳定(SD),2例疾病进展(PD),中位无进展生存期(mPFS)为5.5个月(3～14个月)。结论:传统的免疫治疗无效的晚期难治性肾癌患者,采用IL-2活化的HLA半相合异基因造血干细胞治疗可以产生明显的抗肿瘤效应,并且有良好的耐受性。

生物治疗诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

不同细胞毒性方法如化疗药物、放射线等通常是通过损伤DNA、激活p53依赖的凋亡途径而引起靶细胞的死亡，但往往同时也会对正常细胞造成损害或者引发二次恶变。生物治疗作为全新的肿瘤治疗模式，通过直接诱导肿瘤细胞凋亡或者抑制肿瘤的抗凋亡分子，其能够高度选择性地促进肿瘤细晌凋亡而不损伤币常细胞的DNA．因此具有很好的应用前景。

活化单倍相合异基因造血干细胞治疗晚期难治性肾癌的疗效观察

目的:探讨活化单倍相合异基因造血干细胞(haplo-HSCs)治疗晚期难治性肾癌的安全性和有效性。方法:10例晚期肾癌患者入组,均接受1个疗程的haplo-HSCs治疗,分别通过影像学检查、生活质量(KPS评分)以及外周血淋巴细胞亚群、细胞因子变化情况来评估临床疗效和免疫学反应。结果:(1)10例患者中,2例部分缓解(PR),6例疾病稳定(SD),2例疾病进展(PD),有效率(CR+PR)为20%,临床获益率(CR+PR+SD)为80%。中位随访时间21个月,中位达进展时间(mTTP)为5.7个月,中位生存时间为16个月,1年生存率为70%。(2)治疗后患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3-CD16+56+(NK)均明显升高(P<0.05),而CD8+、CD4+CD25+(Tregs)明显降低(P<0.05);TNF-α、IFN-γ等Th1类细胞因子明显升高(P<0.01),而TGF-β明显下降(P<0.05)。(3)除一过性的发热、乏力外,未出现其他不良反应。结论:晚期难治性肾癌患者,采用活化haplo-HSCs治疗可以增强自身免疫功能,提高生存率和生活质量,并且有良好的耐受性。

肿瘤分子靶向治疗药物耐药机制研究进展

肿瘤分子靶向治疗药物主要分为单靶点药物和多靶点药物，两者在肿瘤临床治疗中都取得了良好的治疗效果，但临床研究发现即使最初对靶向药物表现出良好反应性的患者，在经过一段时间有效期后都会出现耐药性。因此，研究耐药性的机制对预防或延缓耐药性的出现至关重要。研究发现，不管是单靶点药物还是多靶点药物，其耐药机制主要可以概括为以下几个方面：作用靶点基因的继发性突变、其他信号通路的代偿性激活、某些因子的作用等，而更多的耐药机制还需要进一步深入研究。

成纤维细胞活化蛋白-实体肿瘤免疫治疗新靶点

肿瘤毛细血管内皮细胞表面抗原或间质细胞表面抗原的靶向治疗为肿瘤的治疗开辟了新的研究领域。这些靶向抗原的筛选及其抗体在临床中的应用已成为近年来肿瘤研究的热点。成纤维细胞活化蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族成员，选择性表达于肿瘤间质活化的成纤维细胞表面，而在正常组织成纤维细胞表面很少表达或不表达，成纤维细胞活化蛋白（FAP）的蛋白水解酶活性能够促进肿瘤的生长和增殖。这使其成为肿瘤免疫靶向治疗理想的候选蛋白。

母胎微嵌合在单倍体相合活化外周造血干细胞治疗肿瘤中的作用初探

目的探讨母胎微嵌合在单倍体相合活化外周造血干细胞治疗实体瘤中的作用。方法选取25例进行无预处理的人类白细胞抗原单倍体相合活化外周造血干细胞治疗的实体肿瘤患者，采用巢式PCR-序列特异引物法检测供、受者之间母胎微嵌合状态，比较不同母胎微嵌合状态的供、受者混合淋巴细胞增殖反应（MTT法），供者细胞植入情况（FISH法），血清Th1／Th2细胞因子水平（ELISA法）及生存时间。结果母子（女）移植的患者中母胎微嵌合检出率40％，父子（女）移植的患者中为0。母胎微嵌合阳性患者对其供者的增殖反应显著低于对无关第三人（P=0．03），而阴性患者则无此现象。FISH结果显示，只有1例母胎微嵌合阳性的男性患者供者干细胞植入。母胎微嵌合阴性17例患者IFNγ值从治疗后1周的171．4（26．3～258．4）ng／L，治疗后1个月急剧降至29．4（1．2～39．9）ng／L。比较所有母子（女）移植患者，发现母胎微嵌合阳性组生存时间（31．2±4．3）个月显著长于阴性组的生存时间（11．1±3．3）个月（P=0．036）。结论患者体内的母胎微嵌合可能通过诱导其对单倍体相合供者的特异性免疫耐受，延长供者细胞的体内停留时间，维持体内的正向免疫微环境，并延长生存时间。

“核转染”技术对树突状细胞功能的影响

目的:研究"核转染"方法对DC活率、细胞表面分子及细胞因子分泌水平的影响。方法:体外诱导单核细胞分化为DC后,通过"核转染"方法将p/IRES-EGFP质粒转染至细胞核内,同时设立未转染DC为对照组。应用台盼蓝染色计算转染后细胞的活率;荧光显微镜下观察转染效率;流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR及CD11c等的表达;ELISA法检测DC培养上清IL-12及TNFα-的分泌水平。结果:DC转染后随时间推移,细胞活率下降;荧光蛋白在转染后4小时即有表达,表达量逐渐增加,24小时转染效率为56%±12%,48小时转染效率为45%±15%;转染后细胞表面分子CD80、CD83及CD86表达随时间推移逐渐降低,CD11c及HLA-DR表达水平稳定;转染可诱导DC分泌IL-12及TNFα-水平增加。结论:"核转染"是一种有效的转染DC的方法,并可诱导DC分泌多种细胞因子。

NSCLC中SSTR2和SSTR5的表达与微血管密度及预后的相关性

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织生长抑素受体(somastostatin receptor,SSTR)亚型SSTR2、SSTR5的表达,探讨其与肿瘤新生血管程度的关系及对临床预后判断的价值。方法:免疫组织化学S-P法检测54例NSCLC组织标本和21例肺癌旁组织标本中SSTR2和SSTR5蛋白表达情况;CD34抗体标记血管内皮细胞,计算MVD。结果:在NSCLC组织中,SSTR2和SSTR5的阳性表达率分别51.9%(28/54)和55.6%(30/54),与肺癌旁组织中的表达率14.3%(3/21)和19.0%(4/21)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。SSTR2、SSTR5表达与NSCLC的TNM分期密切相关(P<0.05),与年龄、性别、吸烟与否、肿瘤组织类型、分化程度、肿瘤大小和淋巴结转移均无明显相关(P>0.05)。本研究中,有淋巴结转移者MVD高于无淋巴结转移者(P<0.05)、中晚期患者(Ⅲ～Ⅳ期)MVD高于早期患者(Ⅰ～Ⅱ期)(P<0.05);不同年龄、性别、吸烟与否、肿瘤组织类型、分化程度和肿瘤大小之间MVD无显著性差异(P>0.05)。SSTR2、SSTR5表达阳性者3年生存率分别为70.4%、66.1%;表达阴性者3年生存率分别为35.3%、37.3%。SSTR2、SSTR5的表达与MVD值呈负相关(P<0.05)。结论:NSCLC中新生血管的程度与其发生、发展和转移密切相关。SSTR2、SSTR5阳性表达者肿瘤新生血管程度较低,预后较好。

Vav1蛋白在非小细胞肺癌浸润T细胞中的表达及意义

目的:探讨Vav1蛋白在非小细胞肺癌(Nonsmall cell lung cancer,NSCLC)浸润T淋巴细胞中的表达及其临床病理意义。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院肺外科手术切除的新鲜肺癌标本40例,分离出肿瘤浸润T淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocyte,TIL-T),通过RT-PCR方法检测TIL-T中Vav1基因水平的表达;Western blot检测Vav1蛋白表达情况。并且总结40例患者的临床病理特征,SPSS17.0软件对数据进行统计分析,采用独立样本t检验及ANOVA方差分析法,分析TIL-T中Vav1的表达与NSCLC临床病理特征的关系。结果:TIL-T中Vav1的表达与NSCLC组织的分化程度和淋巴结转移相关(P<0.05),而与年龄、性别、组织类型和临床分期无相关性(P>0.05)。高、中、低分化组的肺癌标本TIL-T中Vav1基因的表达量2-△CT值分别为0.113±0.097,0.055±0.050及0.029±0.022,三组比较有差异(P=0.007);且三组肺癌标本TIL-T中Vav1蛋白的IOD值分别为0.543±0.323,0.425±0.331及0.153±0.150,差异有统计学意义(P=0.010)。有淋巴结转移组及无淋巴结转移组肺癌标本TIL-T中Vav1基因的表达量2-△CT值分别为0.039±0.051及0.072±0.059,两组比较有差异(P=0.048);且两组肺癌标本TIL-T中Vav1蛋白的IOD值分别为0.229±0.205及0.454±0.324,差异有统计学意义(P=0.024)。结论:TIL-T中Vav1的表达水平与NSCLC的生物学行为密切相关,有助于判断预后。TIL-T中Vav1表达水平与肿瘤分化程度呈正相关,与淋巴结转移率呈负相关。提示肺癌组织局部免疫耐受可能与TIL-T中Vav1表达水平降低有关,Vav1是评价NSCLC患者T细胞功能以及局部免疫状态的指标之一。