乳腺癌源性肿瘤相关成纤维细胞的永生化及鉴定

目的:构建可在体外稳定培养和传代的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)并鉴定其生物学特征。方法:取人乳腺浸润性导管癌组织,采用酶解-组织块培养法和差速贴壁法分离纯化CAFs,用免疫荧光检测α-肌动蛋白、血小板源性生长因子受体β和广谱细胞角蛋白;采用人端粒酶表达慢病毒感染CAFs使其永生化;在商品化FGM-2(fibroblast growth medium-2)培养基的基础上添加谷氨酰胺、非必需氨基酸和抗坏血酸以优化培养条件,在体外连续培养传代,并用β-半乳糖苷酶染色鉴定各代细胞中衰老细胞的比例。对构建成功的CAF1、CAF2和CAF3细胞系进行高通量RNA测序,分析差异表达基因(DEGs)及其相关信号通路;基于3个CAF细胞系CAF亚型标志基因的表达水平,鉴定其生物学特征。结果:成功分离原代CAFs,并构建3株永生化CAF细胞系;成功优化了CAFs的培养条件,使CAF细胞系在体外培养时不易发生细胞衰老表型(t=2.972、7.049,均P<0.05);RNA测序结果分析显示,CAF1与CAF2有3150个DEGs,CAF2与CAF3有3544个DEGs;而CAF1与CAF3有343个DEGs。对DEGs进行GO富集分析(gene ontology enrichment analysis)表明,CAF2高表达基因主要参与蛋白水解、细胞外基质重塑、血管生成和细胞黏附等信号通路;CAF1和CAF3高表达基因主要参与细胞分裂、细胞周期、DNA损伤修复和有丝分裂等信号通路。对3个CAF细胞系亚型特征性分析表明,CAF1和CAF 3具有炎性CAFs特征,CAF2具有基质型CAFs特征。结论:成功构建得到3株可在体外稳定传代且具有不同生物学特征的CAF细胞系,为CAFs在乳腺癌发生和进展中作用机制的研究提供了可靠的细胞模型。

STAT3的多重调控方式在肿瘤中的研究进展

生理情况下原癌基因信号传导及转录激活子3(signal transducer and activator of transcription-3,STAT3)的激活受到严格的调控。然而,大量证据表明,STAT3在许多肿瘤细胞中存在持续激活,并在肿瘤的起始与进展中发挥重要作用。目前的研究发现,活化的STAT3能够通过多种方式促进肿瘤的进展,如促进肿瘤细胞的增殖、侵袭转移、耐药、上皮-间质转化、调节肿瘤微环境、促进肿瘤干细胞的更新与分化等。STAT3的激活除了受传统的细胞因子和生长因子信号通路的调控以外,大量的证据显示G-蛋白偶联受体、钙黏素、Toll样受体、miRNA以及乙酰化修饰等也在STAT3活化过程中发挥了重要作用。本文主要针对肿瘤细胞中调控STAT3活化的途径进行综述。

SFRP1基因表达与大肠肿瘤发生的关系研究

目的:探讨SFRP1与大肠癌发生的关系。方法:运用半定量RT-PCR方法及免疫组化方法检测SFRP1、β-catenin、E-cad在正常大肠粘膜、大肠腺瘤以及大肠腺癌中的表达。结果:大肠腺癌、腺瘤组织的β-catenin、E-cad胞膜表达不同程度缺失,β-catenin呈胞质和胞核异位表达,腺瘤β-catenin的异位表达率为87.5%,低于大肠腺癌(100%,P<0.05)。大肠腺瘤β-catenin、E-cad胞膜表达缺失率分别为37.5%、37.5%,低于大肠腺癌(58.8%、76.4%,P均<0.05)。半定量RT-PCR显示,SFRP1基因在大肠腺瘤、大肠腺癌组织中的表达水平均明显低于大肠正常组织的对照组,且大肠腺癌组织中SFRP1基因的表达水平低于大肠腺瘤(P<0.05)。结论:SFRP1基因下调使其拮抗Wnt途径的功能削弱,导致Wnt的持续存在,其下游基因β-catenin、E-cad异常表达,从而导致大肠粘膜细胞获得恶变潜能。故SFRP1可能为预防大肠肿瘤的发生、大肠肿瘤的早期诊断提供新思路,并为防治大肠肿瘤提供新靶标和实验依据。

TFPI-2对恶性肿瘤细胞增殖凋亡 侵袭转移调控作用的研究进展

组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是具有库尼(Kunitz)结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂。新近发现,TFPI-2在恶性肿瘤中表达降低,并与肿瘤转移、侵袭等恶性生物学行为密切相关。该分子表达的分子调控机制包括启动子Cp G岛超甲基化、ERK1/2信号途径、JNK信号途径等。TFPI-2的主要功能体现在维持肿瘤微环境的稳定性,抑制肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。目前认为,TFPI-2在调节细胞增殖、凋亡以及血管生成拟态方面也发挥重要作用。本文就TFPI-2在肿瘤中的表达及调控机制、细胞凋亡、血管生成中作用进行综述,为其在肿瘤的预防、诊断及基因治疗中开展深入研究提供理论基础。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8对蛋白的甲基化修饰及与肿瘤相关性的研究进展

组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8属于SET基因家族成员,是目前发现的唯一可以特异性催化H4赖氨酸20单甲基化(H4K20me1)的赖氨酸甲基转移酶(KMTs);此外,SET8还可甲基化p53、TWIST、Wnt及ERα等非组蛋白,并通过调节转录过程影响相应基因的表达,进而参与调控细胞周期、染色质固缩和DNA的复制。有研究提示,SET8的单核苷酸多态性与多种肿瘤的发生发展有潜在的相关性。本文就SET8对组蛋白和非组蛋白的修饰、micro RNA对SET8的调节及SET8与肿瘤相关性的研究进展进行了综述,旨在为揭示肿瘤的发病机制和筛选治疗靶点提供帮助。

P-glycoprotein的新功能在肿瘤研究中的进展

肿瘤多药耐药性(multiple drug resistance,MDR)的发生往往伴随着多药耐药基因如MDR1、MRP1和BCRP等高表达,其中MDR1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是目前公认可以诱发癌细胞发生MDR的重要分子。传统研究认为P-gp主要是作为一个药物泵将化疗药物从细胞内排出从而导致MDR。然而系列研究发现,除了介导MDR以外,P-gp还能够调节癌细胞的生长、增殖、凋亡、迁移和侵袭等其他生物学行为;而且研究表明P-gp的这些作用可以依赖,也可以不依赖于其药物泵的功能。这些结果表明P-gp能够通过一些新的机制促进肿瘤的进展。本文主要针对P-gp在促进肿瘤进展中的作用进行综述。

双向分化恶性肿瘤血管生成拟态分子机制初步研究

血管生成拟态是1999年美国Iowa's大学的Maniotis等在研究人眼葡萄膜黑色素瘤微循环的过程中发现了一种全新的肿瘤血液供应模式.恶性黑色素瘤细胞通过自身变形和细胞外基质相互作用模仿血管壁结构形成可输送血液的管道系统,从而重塑肿瘤的微循环,并与宿主血管相连通使肿瘤获得血液供应.

基因工程抗体及免疫毒素抗肿瘤研究进展

基因工程免疫毒素由于具有高特异性、高细胞毒活性 ,是肿瘤治疗的方法之一。现就基因工程抗体及免疫毒素的改造。

肿瘤重症患者急性呼吸衰竭专家共识(2023版)

目的本共识的制定旨在为肿瘤重症患者合并呼吸衰竭的临床处理中常见问题提供基于临床证据的推荐意见。方法采用人群、干预、比较和预后(Population,Intervention,Comparison,and Outcome,PICO)原则对肿瘤重症患者呼吸衰竭的诊断和处理提出6个重要临床问题,基于文献检索和证据整合形成推荐意见。采用推荐意见分级评价、制定与评估(Grading of Recommendation Assessment,Development and Evaluation,GRADE)的方法讨论每个问题并经专家组讨论后形成共识意见。结果共识专家组形成了如下推荐意见。强推荐:(1)宏基因组二代测序可能有助于临床医师快速诊断合并呼吸衰竭的肿瘤重症患者的肺部感染;(2)体外膜肺(Extracorporeal Membrane Oxygenation,ECMO)不作为合并急性呼吸窘迫综合征的肿瘤重症患者常规挽救方案,多学科会诊后高选择性患者可能受益于ECMO治疗;(3)与标准化疗相比,免疫检查点抑制剂治疗增加肿瘤患者肺毒性的发生率;(4)接受机械通气的肿瘤患者如预计通气时间超过14天,早期气管切开可能使患者获益;(5)高流量氧疗和无创通气可以作为肿瘤合并呼吸衰竭的重症患者的一线氧疗方案。弱推荐:(6)对于癌肿压迫所致呼吸衰竭的肿瘤重症患者,如多学科会诊后考虑肿瘤对于药物潜在敏感,可采用紧急化疗作为挽救治疗。结论基于已有证据形成的推荐意见可指导肿瘤合并呼吸衰竭患者的诊断和治疗并改善预后。

CDK6导致肿瘤的机制研究进展

细胞周期的异常调控导致细胞过度增殖是人类肿瘤发生的重要原因之一,目前已发现CDK6和CDK4是细胞周期的重要调控因子,促进细胞周期正向进行,且在人类大多数肿瘤中过度激活,与肿瘤的发生密切相关。最近,研究证实以CDK4/6为靶点的肿瘤治疗有广泛前景。但是对于CDK6过度激活导致肿瘤发生的机制尚不完全清楚。因此有必要进一步了解CDK4/6在细胞周期调控通路、细胞分化中的作用及其在不同类型肿瘤中的异常表达,对深入了解肿瘤的发生机制及治疗有重大意义。本文拟对CDK6的结构、生物学功能、促进肿瘤的相关机制,以及其抑制剂的临床应用等方面的内容进行阐述。

TGF-β与细胞内信号通路的交互作用在肿瘤研究中的进展

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路在肿瘤发生发展过程中发挥双向调节作用。TGF-β能够抑制上皮细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,发挥抑制肿瘤的作用,因此上皮细胞失去对TGF-β抑制增殖的反应是肿瘤发生过程中的标志性事件。随着肿瘤进展,TGF-β能够促进肿瘤细胞侵袭、转移、耐药以及维持肿瘤干细胞潜能。目前,TGF-β的上述作用转变与其细胞内多条信号通路的交互作用有关,这种交互作用既能减弱或解除TGF-β的增殖抑制和促凋亡作用,又能增强其促进肿瘤进展和恶化的功能。本文主要针对TGF-β在肿瘤进展中与多条细胞内信号通路交互联系的分子机制,以及交互作用对肿瘤发生发展的影响进行综述。

人源肿瘤异种移植动物模型在癌症精准医学研究中的应用

人类疾病实验动物模型对于临床转化研究具有不可替代的作用,在生物科学、医药化学和生命健康等领域得到了广泛的应用。在癌症领域,动物模型常被用作研究癌症发生、发展和转移的有效工具。近年来,人源肿瘤异种移植(patient-derivedtumorxenograft,PDX)模型在癌症治疗药物研发和个体化治疗方案制定方面的应用不断普及。本文从实验动物肿瘤模型的发展、免疫缺陷动物的使用角度出发,围绕不同类型动物模型的特点,综述了PDX模型在精准医学领域的应用现状、未来的发展趋势和应用前景。

小鼠骨髓和脂肪间充质干细胞定向分化能力的比较研究

目的探讨小鼠骨髓源性间充质干细胞(BM-MSCs)和脂肪源性间充质干细胞(AD-MSCs)的定向分化能力。方法从C57BL/6J小鼠股骨骨髓和腹股沟白色脂肪组织中分别分离和培养BM-MSCs和AD-MSCs,分别使用成骨、成软骨和成脂诱导分化培养基诱导两种细胞定向分化。采用茜素红、阿利新蓝和油红O染色检测成骨、成软骨和成脂分化程度;实时荧光定量PCR(q PCR)鉴定MSCs并检测定向分化相关基因Runx2、Sp7(成骨),Sox9、Col2a1(成软骨),Pparg和Cebpa(成脂)表达水平,确定细胞的定向分化能力。基于GEO数据库中GSE43804和GSE122778数据集的小鼠和人类BM-MSCs和AD-MSCs基因表达谱数据,分析差异表达基因及其富集的信号通路。结果分离培养得到的BM-MSCs和AD-MSCs细胞形态不同,AD-MSCs梭形形态更明显;两种细胞均表达CD29、CD44和CD90,不表达CD34和CD45。定向诱导后AD-MSCs的成骨和成脂分化程度高于BM-MSCs,而成软骨分化程度低于BM-MSCs(P<0.05);定向诱导后AD-MSCs中Runx2、Pparg和Cebpa mRNA表达水平高于BM-MSCs,Sox9 mRNA表达水平低于BM-MSCs(P<0.05)。小鼠和人的AD-MSCs高表达的基因富集于PPAR和WNT信号通路,BM-MSCs高表达的基因富集于软骨和骨发育信号通路。结论小鼠AD-MSCs成骨和成脂分化能力强于BM-MSCs,而成软骨分化能力弱于BM-MSCs,PPAR、WNT、软骨和骨发育信号通路的活化状态在决定BM-MSCs和AD-MSCs不同定向分化潜能中起重要调节作用。

胫骨注射和左心室注射乳腺癌细胞小鼠骨定植模型的研究

目的:探讨胫骨注射和左心室注射乳腺癌细胞构建小鼠骨定植模型的方法。方法:通过对野生型MDA-MB-231乳腺癌细胞进行慢病毒感染,构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(LUC)的细胞株。将GFP+/LUC+标记的处于对数生长期的MDA-MB-231乳腺癌细胞分别以6×10^(3)个/只和1×10^(5)个/只接种BALB/c-nu/nu小鼠和NOD/SCID小鼠,构建胫骨注射模型和左心室注射模型。采用活体成像观察肿瘤细胞在活体小鼠体内的定植部位及分布情况;X线检测观察骨损伤的位置及程度;苏木素-伊红(HE)染色和广谱角蛋白(Pan CK)免疫组化染色定位骨中的肿瘤细胞。结果:经荧光显微镜及活细胞成像检测,表达GFP和LUC的慢病毒对MDA-MB-231细胞感染效率高达95%,且继续传代后GFP和LUC表达效率无明显减退,可用于后续实验。胫骨注射4 h后进行活体成像观察,结果显示小鼠右下肢胫骨出现LUC信号;左心室注射后立即进行活体成像观察,发现肿瘤细胞已循环至全身,表明已成功构建胫骨注射模型及左心室注射模型。30 d进行活体成像观察发现,胫骨注射模型和左心室注射模型腿部出现LUC信号,表明腿部有定植灶形成。X线结果也表明存在骨损伤。HE染色和Pan CK免疫组化染色证实胫骨注射MDA-MB-231乳腺癌细胞小鼠模型100%出现骨定植灶,定植率高,而左心室注射MDA-MB-231乳腺癌细胞小鼠模型仅20%出现骨定植灶。结论:运用活体成像、X线等检测技术联合病理学分析评估胫骨注射及左心室注射乳腺癌细胞骨定植小鼠模型,可提高结果分析的准确性,能为乳腺癌转移机制研究、抗转移治疗等提供实验和理论依据。

肿瘤免疫治疗疗效评价的新标准

目的:肿瘤免疫治疗近年来发展迅猛,已被越来越多的临床医生所认可,并广泛应用于多种恶性肿瘤的治疗。与传统的化疗不同,免疫治疗发生严重毒性反应的概率更低,患者耐受性更好,尤其对患者生活质量的改善作用更明显。但遗憾的是,目前临床上采用传统的肿瘤治疗评价体系对肿瘤免疫治疗疗效评价时往往不能令人满意,导致部分进入Ⅲ期临床试验的免疫治疗项目最后以失败告终。鉴于现有WHO或RECIST(response evaluation criteria in solid tumor)标准很难对肿瘤免疫治疗的临床疗效进行准确的解读和确切的评价,因此在2009年第23期的Clinical Cancer Research上专门刊载了由纽约Me-morial Sloan-Kettering癌症中心Wolchok教授等撰写的论文——《针对实体瘤免疫治疗疗效评价指南:免疫相关疗效评价标准》,深入探讨了肿瘤免疫治疗疗效评价新标准的意义和应用前景。本文以该论文为主,结合其他相关文献,对"肿瘤免疫疗效评价的新标准"这一肿瘤学界的热点问题作一介绍。

肿瘤干细胞与肿瘤血管异质性

肿瘤血管新生是肿瘤发生和恶性演进过程中基本的生物学过程。传统的血管生成理论认为肿瘤血管新生主要通过由宿主血管网内皮细胞增殖、迁移长入肿瘤组织或由肿瘤组织募集骨髓中的内皮祖细胞增殖、分化为成熟内皮细胞以构建新生血管,即内皮依赖性血管是肿瘤血供的唯一方式。然而越来越多的研究发现肿瘤的微循环网络是异质性的且肿瘤干细胞在肿瘤血管化过程中具有重要作用。本文就肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)对不同肿瘤血管新生模式的作用及其作为肿瘤抗血管生成疗法的潜在靶点做一概述,并对肿瘤干细胞促血管生成研究中待解决的问题进行了展望。

小RNA干扰PDK1抑制乳腺肿瘤细胞侵袭

目的:在肿瘤侵袭转移的细胞和生物学机制中,包含有多种基因和信号传导通路的改变。PDK1是PI3K分子通路上的一个重要分子,为了研究PDK1对乳腺肿瘤细胞侵袭能力的影响,我们以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究模型,用小RNA干扰法特异下调PDK1的表达,研究其侵袭能力的变化,为乳腺癌临床治疗探索新的分子靶点。方法:通过构建PDK1特异的小RNA干扰质粒,利用脂质体介导的方法转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,无限稀释法筛选单克隆细胞系,并通过Western Blot的方法检测各组细胞中PDK1蛋白的表达水平,细胞计数的方法观察各组细胞之间的增殖情况,并利用Matrigel Transwell的实验方法研究细胞在体外的侵袭能力差别。结果:MDA-MB-231细胞经小RNA干扰后PDK1蛋白表达水平明显下降,与对照组相比,细胞的生长增殖能力没有显著差异(P>0.05),细胞的侵袭能力显著下降,并且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MDA-MB-231是一种侵袭能力高的乳腺癌细胞系,本研究利用小RNA干扰技术,特异性下调了乳腺癌MDA-MB-231细胞中的PDK1蛋白表达,结果表明,乳腺癌细胞的生长能力与对照组的细胞相比没有明显差别,但是,PDK1蛋白表达水平下降后乳腺癌细胞的侵袭能力明显下降,提示我们PDK1可能与乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力肾密相关。鉴于PDK1处于PDK1-Akt-PKC信号通路的上游,以PDK1为靶标的分子干预可能对乳腺癌细胞的侵袭转移起到有效的作用。

RT-PCR方法对检测乳腺癌干细胞富集血残存肿瘤细胞的价值

目的：旨在用敏感的ＲＴ－ ＰＣＲ 方法扩增目的基因，用于检测干细胞富集血中残存的肿瘤细胞。方法：应用ＲＴ－ ＰＣＲ 方法检测样品ＭＵＣ１ 、Ｋ１９ 基因的表达情况。结果：乳腺癌细胞系ＭＣＦ－ ７ 中ＭＵＣ１ 、Ｋ１９ 表达阳性，而在淋巴细胞中则未见有表达。进一步用淋巴细胞稀释乳腺癌细胞来检测该方法的灵敏度。ＭＵＣ１ 、Ｋ１９ 检测残存肿瘤细胞的灵敏度均达到１／１０５ 。在此基础上，完成了１５ 例乳腺癌患者干细胞富集血检测工作。结论：ＲＴ－ ＰＣＲ 是检测残存肿瘤细胞检测中行之有效的方法。

262例双向分化恶性肿瘤临床资料及免疫组化的分析

目的 :分析262例双向分化恶性肿瘤临床资料及免疫组织化学染色的结果。方法 :收集1950～2000年天津肿瘤医院库存双向分化恶性肿瘤组织的石蜡包埋样本约800余例 ,筛选临床和病理资料完整的样本262例 (其中恶性黑色素瘤124例 ,滑膜肉瘤64例 ,横纹肌肉瘤47例 ,间皮肉瘤23例 ,上皮样肉瘤4例 ) ,制作成组织芯片 ,进行免疫组化染色 ,分析不同的免疫组化指标在肿瘤诊断中的作用 ,并对以前的病理诊断进行复习。在此基础上分析不同肿瘤的发病年龄高峰、性别比例、发病部位及预后。结果 :124例恶性黑色素瘤有8例不表达HMB45 ,不同双向分化恶性肿瘤的发病高峰不一致 ,手术治疗后患者生存时间也不同。结论 :双向分化恶性肿瘤中免疫组化染色特异性较差 ,综合分析几种免疫组化指标有助于病理诊断。