长链非编码RNA MALAT1影响口腔鳞状细胞癌侵袭的实验研究

目的:探讨肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lungadenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对口腔鳞状细胞癌侵袭能力的影响。方法:应用RT-PCR方法检测MALAT1在口腔鳞状细胞癌组织标本、正常口腔黏膜组织标本以及口腔鳞癌细胞系中的表达;利用小干扰RNA(si RNA)敲低MALAT1在人舌鳞状细胞癌细胞Tscca中的表达;MTT法检测细胞的增殖能力变化;划痕实验、Transwell实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测肿瘤细胞迁移、侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)等相关蛋白的表达变化;免疫荧光法检测细胞EMT相关蛋白表达变化;建立Tscca裸鼠皮下荷瘤模型,免疫组织化学染色法检测细胞增殖、侵袭相关蛋白表达。结果:MALAT1在口腔鳞癌组织中的表达明显高于正常组织。抑制MALAT1表达后细胞增殖率下降,细胞系划痕闭合减慢,通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)、神经钙黏素(N-cadherin)蛋白表达水平明显下调,钙黏着蛋白(E-cadherin)表达水平上调。免疫荧光显示,细胞神经钙黏素荧光强度明显减弱,钙黏着蛋白荧光强度显著增强。体内实验结果显示,MALAT1 si RNA治疗组裸鼠皮下荷瘤体积小于空白对照组及无义序列组(F=18.664,P<0.001);免疫组织化学染色结果示,MALAT1 si RNA治疗组中增殖核抗原(PCNA)、MMP-2、MMP-9表达减少。结论:MALAT1在口腔鳞癌组织中过表达,敲低人舌鳞癌细胞中MALAT1的表达可抑制舌鳞癌细胞的迁移、侵袭能力,MALAT1可能通过调控EMT促进口腔鳞癌的增殖和侵袭过程。

长链非编码RNA HOTAIR影响人舌鳞癌细胞Tb3.1增殖与凋亡的体内外研究

目的研究长链非编码RNA HOTAIR对人舌鳞癌细胞系Tb3.1增殖与凋亡的影响。方法使用HOTAIR si RNA(si HOTAIR)敲低HOTAIR的表达;实验分为si HOTAIR组、无义序列组和空白对照组。前2组分别用si HOTAIR和无义序列转染舌鳞癌细胞,空白对照组细胞不做任何处理。实时定量PCR检测HOTAIR的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Tb3.1细胞增殖;Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、BAX的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;平板克隆形成实验检测细胞增殖情况;并行细胞衰老检测。动物实验建立Tb3.1裸鼠皮下荷瘤模型,通过免疫组织化学染色及TUNEL法评价干扰HOTAIR后对Tb3.1细胞增殖、凋亡的作用。结果 si HOTAIR处理后HOTAIR的表达水平降低;Western blot结果示Cleaved Caspase-3和BAX表达水平升高,Bcl-2表达水平降低。MTT结果显示si HOTAIR组细胞增殖受到抑制;流式细胞示si HOTAIR组细胞凋亡升高;细胞衰老实验显示si HOTAIR组细胞衰老数目增加;免疫组化结果显示,si HOTAIR组较对照组Ki-67、Bcl-2表达减少,Caspase-3、BAX表达增加;TUNEL结果显示,si HOTAIR组较空白对照组肿瘤细胞凋亡水平升高。结论干扰HOTAIR可以促进舌鳞癌细胞的凋亡并抑制其增殖,HOTAIR可以作为舌鳞癌治疗的研究方向。

甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移的危险因素

目的:探讨甲状腺乳头状癌中央区淋巴结和侧颈淋巴结转移的危险因素。方法:回顾性分析2016年1月至2016年12月于天津医科大学肿瘤医院行甲状腺切除术的1835例术后病理诊断为甲状腺乳头状癌患者的临床病例资料,对可能影响甲状腺乳头状癌淋巴结转移的相关因素进行单因素分析与多因素分析。结果:1835例患者中央区淋巴结转移率为54.88%(1007例),侧颈淋巴结转移率为20.22%(371例)。单因素分析结果提示,男性、年龄<45岁、肿瘤直径>10mm、多灶性、抗甲状腺球蛋白抗体(anti-Tg)>100.00 IU/mL、甲状腺球蛋白抗体(Tg)>130.70μg/L者中央区淋巴结转移率及侧颈淋巴结转移率较高(P<0.05)。抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-TPO)>100.00 IU/mL者中央区淋巴结转移率较低(P<0.05)。此外,中央区淋巴结转移者侧颈淋巴结转移率较高(P<0.05)。多因素分析结果提示,男性、年龄<45岁、肿瘤直径>10mm、多灶性、anti-Tg>100.00IU/mL是中央区淋巴结转移的独立危险因素。anti-TPO>100.00IU/mL是中央区淋巴结转移的保护性因素。男性、年龄<45岁、肿瘤直径>10mm、多灶性、anti-Tg>100.00 IU/mL、Tg>130.70μg/L、中央区淋结转移者是侧颈淋巴结转移的独立危险因素。结论:男性、年龄<45岁、肿瘤直径>10 mm、多灶性、anti-Tg>100.00 IU/mL是中央区淋巴结转移及侧颈淋巴结转移的高危因素;中央区淋巴结转移是侧颈淋巴结转移的危险因素;anti-TPO>100.00 IU/mL是中央区淋巴结转移的保护性因素。

诱导化疗后进展期声门上喉癌切缘及分子标志物研究

目的探讨行诱导化疗后的进展期声门上喉癌退缩后不同距离最短切缘组分子标志物表达差异及其在手术定界中的意义。方法收集2011年5月 2014年11月在天津医科大学肿瘤医院头颈科治疗的95例进展期声门上喉癌(T3~4, N0~ 2, M0)患者的临床资料,行多西他赛+顺铂+5-氟尿嘧啶(TPF)方案诱导化疗;选择其中59例疾病稳定(SD)及部分缓解(PR)患者中强烈要求手术者行部分喉切除术,按距肿瘤最短切缘分为<5 mm( Margin 1)组14例、5~10mm( Margin2)组 17例及>10mm组(M argin3) 28例。标本制成组织芯片,采用常规病理及高通量免疫组化技术检测eIF4E、 survivin、cyclinD1、 P27这4种肿瘤标志物的表达,并比较不同切缘组3年喉内局部复发率。结果原发瘤(T)可见化疗后坏死及肿瘤退缩;Margin1组切缘10例含有肿瘤退缩区(10/14),偶可见坏死变性的瘤细胞;Margin2、 Margin3切缘组均未见肿瘤退缩区。eIF4E、 survivin在原发瘤T高表达,3个切缘组的阳性表达率随切缘增大急剧下降。各组cyclinD1、 P27的阳性表达率差异均无统计学意义。59例喉癌患者术后3年复发12例(20.3%),其中Margin1组11例(78.6%), Margin2组1例(5.9%), Margin3组0例,Margin1组明显高于Margin2和Margin3组(P<0.05)。结论 eIF4E、 survivin可能作为诱导化疗后声门上喉癌切缘的比较敏感的标志物,标志物无表达、>10mm的外科切缘更有利于肿瘤退缩后的切缘安全。

STAT3小分子抑制剂HJC0152抑制人头颈部鳞癌细胞株侵袭迁移能力的研究

目的:探讨新型信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription,STAT3)抑制剂HJC0152对人头颈部鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)细胞株侵袭和迁移能力的影响及可能机制。方法:实验分为二甲基亚砜(DMSO)组和HJC0152组。Western blot检测细胞总蛋白中STAT3、p-STAT3 Tyr705/Ser727、MMP-2/9、N/E-cadherin、TWIST1和vimentin蛋白表达水平及核浆蛋白中的STAT3和p-STAT3 Tyr705/Ser727蛋白表达水平;划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力;免疫荧光实验观察N/E-cadherin蛋白的表达和亚细胞定位。结果:HJC0152组细胞总蛋白和核浆蛋白p-STAT3 Tyr705表达水平均受到显著抑制,而STAT3、p-STAT3 Ser727未见明显变化;总蛋白MMP-2/9、N-cadherin、TWIST1和vimentin表达水平降低,E-cadherin水平升高。HJC0152组细胞向划痕中央移动的距离明显短于DMSO组,通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞较DMSO组也显著减少。结论:HJC0152可有效抑制头颈鳞癌细胞STAT3 Tyr705的磷酸化,阻碍其发挥转录因子的作用,抑制其下游基因表达,从而干预HNSCC侵袭和迁移能力。

Ajuba蛋白的研究现状及在肿瘤中的应用前景

Ajuba最初被发现存在于细胞连接中,随后有研究结果表明其可在核质间穿梭及传递信号。在正常生理条件下,Ajuba通过调控细胞周期、参与信号通路,从而促进细胞的增殖和分化。此外,Ajuba还与乳腺癌、结直肠癌和头颈部鳞状细胞癌等多种肿瘤的发展密切相关,但在不同的肿瘤中,Ajuba作为癌基因或抑癌基因而发挥生物学功能。在肿瘤中,Ajuba同样可以促进肿瘤细胞的增殖,并且通过调控上皮-间质转化进而促进肿瘤的侵袭和转移过程可观的治疗前景。针对Ajuba开发相应的小分子抑制剂或靶向药物已取得的一些进展进行综述。