MALAT1通过VHL／β-catenin通路影响口腔鳞状细胞癌生长侵袭的实验研究

目的:探讨肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)生长侵袭的影响及其作用机制。方法:使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低MALAT1在人OSCC细胞系SCC25、UM1中的表达;CCK-8法、流式细胞术检测敲低MALAT1表达后OSCC增殖能力、细胞周期及细胞凋亡的变化;细胞迁移实验及Transwell实验检测细胞运动及侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测细胞周期及凋亡相关蛋白、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭相关蛋白、VHL及β-catenin等蛋白表达变化。结果:敲低OSCC中MALAT1表达后,细胞增殖能力显著下降,细胞周期出现G1/S期阻滞,周期相关蛋白cyclin D1表达减少,P21表达增多;细胞凋亡增多,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax表达增多;且EMT相关蛋白N-cadherin、vimentin表达减少,E-cadherin表达增多,侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭能力下降;同时发现敲低MALAT1表达后VHL蛋白表达增多,β-catenin蛋白表达减少。结论:MALAT1是OSCC生长侵袭的重要调节因素,可能通过VHL/β-catenin通路发挥调控作用。

甲状腺微小乳头状癌颈淋巴结转移的危险因素分析

目的:探讨甲状腺微小乳头状癌颈淋巴结转移的危险因素,分析高分辨率B超对侧颈淋巴结转移的诊断意义。方法:回顾性分析2013年1月至2013年11月天津医科大学肿瘤医院共1 037例甲状腺微小乳头状癌患者的临床病理资料。结果:1 037例患者中央区淋巴结转移率为32.02%(332例),侧颈淋巴结转移率为6.85%(71例)。男性、年龄≤45岁、肿瘤直径>5 mm、多灶性、双发性、侵犯包膜和甲状腺外局部侵犯者中央区淋巴结转移率较高(P<0.05)。男性、中央区淋巴结转移、B超诊断阳性者侧颈淋巴结转移率较高,并且随着中央区淋巴结转移数目的增多,侧颈转移率也随之增高(P<0.05)。高分辨率B超对侧颈淋巴结转移的灵敏度、特异度分别为92.96%、81.48%。结论:对中央区淋巴结转移高危因素的人群应行预防性中央区淋巴结清扫术,高分辨率B超对预测甲状腺微小乳头状癌患者颈淋巴结转移具有重要的诊断意义,对侧颈淋巴结转移高危因素的人群应行患侧侧颈淋巴结清扫术。

原发病灶不明颈淋巴结转移鳞癌的诊断和预后

目的:探讨原发病灶不明颈淋巴结转移鳞癌(cervical lymph node metastases of squamous cell carcinoma of unknown primary site,SCCUP)人群发病特点、诊断方法、原发灶检出及预后。方法:回顾性分析2002年10月至2016年6月天津医科大学肿瘤医院262例SCCUP患者临床病理学特点及预后。运用χ^2检验分析原发确诊组与原发未明组的临床表现、原发病灶出现特点及检查方法的灵敏性、特异性,分析影响总体生存期(overall survival,OS)及无进展生存期(progression-free survival,PFS)的因素。结果:262例SCCUP患者,以男性多见,中位年龄57岁。70例患者检出原发病灶(26.7%),且男性(30.1%)、单枚(31.0%)、Ⅳ区(39.3%)淋巴结转移的原发灶检出率高于女性(17.4%)、多枚(18.7%)、Ⅱ/Ⅲ区(20.8%)。与传统影像学相比,18FDG-PET/CT(18F-fluorodeoxyglucose positron emission tomography/computed tomography)检出原发灶的灵敏性、特异性高。生存分析显示,远处转移是影响OS、PFS的独立危险因素,N分期对PFS的影响差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SCCUP患者中,男性、单枚、下颈淋巴结转移的原发灶检出的比例高,PET/CT检查对SCCUP的诊断及原发灶检出有重要意义,N分期较晚及远处转移提示预后不良。

AJUBA在口腔鳞癌中的表达和意义及其相关机制

目的:探讨AJUBA(ajuba LIM protein)基因在口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及其对OSCC细胞增殖、迁移能力的影响.方法:采用qPCR和免疫组织化学方法检测OSCC和癌旁组织中AJUBA的表达情况,分析AJUBA与OSCC临床病理参数之间的关系.通过MTT实验、划痕实验及Transwell实验探究AJUBA对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.West?ern blot法检测AJUBA对OSCC细胞Snail/E-cadherin信号通路相关蛋白表达的影响.结果:AJUBA在OSCC组织中显著高表达,与T分期、肿瘤分化、淋巴结转移和复发相关(P<0.05),且其表达提示不良预后.敲降AJUBA后,OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制.Western blot结果显示AJUBA能够促进Snail的表达,抑制E-cadherin的表达.结论:AJUBA在OSCC组织中高表达,可能通过Snail/E-cadherin信号通路参与OSCC的增殖和侵袭.

信号传导与转录活化因子3抑制剂 WP1066影响人舌鳞状细胞癌增殖与凋亡的研究

目的探讨信号传导与转录活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3， STAT-3）的小分子抑制剂WP1066影响人舌鳞状细胞癌细胞系Tscca增殖与凋亡的分子机制。方法实验共分3组：空白对照组、二甲基亚砜组（ DMSO组）、小分子抑制剂组（ WP1066组）。采用WP1066拮抗磷酸化STAT-3（ p-STAT-3）表达；实时定量PCR 检测加入DMSO、WP1066后微RNA-21表达；甲基噻唑基四唑（ methyl thiazolyl tatrozolium ，MTT）法检测细胞生存率；流式细胞术测细胞早期凋亡；蛋白质印迹法检测 STAT-3及 p-STAT-3、细胞程序死亡蛋白4（ programmed cell death protein 4， PDCD-4）、细胞增殖核抗原（antigen 67，Ki-67）、B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma 2，Bcl-2）、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3，CCASP-3）的表达；荧光素酶报告基因实验验证STAT-3对微RNA-21调控。建立Tscca裸鼠皮下荷瘤模型，通过免疫组织化学染色及原位末端标记（ terminal deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling ，TUNEL）法评价WP1066对细胞增殖、凋亡的作用。结果 WP1066组中STAT-3/p-STAT-3蛋白表达降低（ STAT-3：F＝15.336，P ＝0.004；p-STAT-3：F ＝52.837，P ＝0.000）；微 RNA-21表达下调（F ＝8.197，P ＝0.019）；WP1066组细胞存活率[（51±7）％]显著低于空白对照组（100％）和DMSO 组[（90±7）％]（F＝94.388，P ＝0.000）； WP1066组细胞早期凋亡率升高（F ＝217.080，P ＝0.000）；WP1066组PDCD-4、CCASP-3蛋白表达水平（0.65±0.12，0.74±0.07）比空白对照组（0.46±0.08，0.43±0.09）和DMSO 组（0.34±0.05，0.34±0.02）上调（PDCD-4：F＝8.771，P＝0.017；CCASP-3：F＝26.611，P＝0.001）；Ki-67、Bcl-2表达水平下调（Ki-67：F＝5.854，P＝0.039；Bcl-2：F＝125.502，P＝0.000）；荧光素酶报告基因实验证明 STAT-3与微 RNA-21启动子特定区域结合。体内实验观察期结束时， WP1066组裸鼠皮下荷瘤体积显著小于空白对照组、DMSO组（ F＝15.390，P＝0.000）；免疫组织化学染色结果示， WP1066组中 PDCD-4、CCASP-3表达增加， Ki-67、Bcl-2表达减少；TUNEL 结果显示， WP1066组比空白对照组和 DMSO 组肿瘤细胞凋亡指数上升（ F ＝133.368， P ＝0.000）。结论WP1066通过抑制STAT-3、微RNA-21表达在体内外抑制Tscca细胞增殖并诱导凋亡；WP1066为人舌鳞状细胞癌的治疗提供了新的方向和可能性。

B细胞淋巴瘤基因-2、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1转录因子在舌鳞癌中调控上皮-间充质转化的研究

目的探讨B细胞淋巴瘤基因-2（bcl-2）、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1（Twistl）在舌鳞癌中的表达及对上皮-间充质转化（EMT）调控。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测bcl-2、Twistl及EMT相关因子在82例舌鳞癌及24例癌旁组织中的表达，分析bcl-2、Twistl及EMT相关因子与舌鳞癌临床病理特征的关系。Westernblot法检测舌鳞癌细胞株Tb3．1中bcl-2、Twistl及EMT相关因子表达水平；免疫共沉淀证明bcl-2、Twistl的相互作用。结果bcl-2、Twistl在舌鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织，82例癌组织中48例（58．64％）bcl-2、46例（56．10％）Twistl表达呈阳性表达，明显高于癌旁组织[bcl-2：6例（25．00％），P〈0．05，Twistl：4例（16．67％），P〈0．05]；bcl-2、Twistl、神经钙黏素、波形蛋白在中低分化组及淋巴转移组中阳性表达高于在高分化组及非淋巴结转移组中的表达，在中低分化组中的表达分别为28例（70．00％）、28例（70．00％）、30例（75．00％）、30例（75．00％），在淋巴结转移组中的表达分别为29例（72．50％）、29例（72．50％）、29例（72．50％）、31例（77．50％），钙黏着蛋白则与之相反，分别为15例（37．50％）、16例（40．00％）。且Twistl与bcl．2、神经钙黏素、波形蛋白的表达呈正相关（相关系数分别为0．303、0．249、0．348，P〈0．05），与钙黏着蛋白的表达呈负相关（相关系数为-0．547，P〈0．05）；免疫共沉淀结果显示bcl-2、Twistl间可互相作用。结论bcl-2和Twistl在舌鳞癌中高表达，两者形成复合体可能参与调控舌鳞癌EMT过程。

趋化因子CXC亚家族受体4调控口腔鳞状细胞癌上皮间质转化介导淋巴转移的体外实验

目的 探讨趋化因子CXC亚家族受体4（CXC subfamily receptor4,CXCR.4）调控口腔鳞状细胞癌上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）介导淋巴转移的作用和机制.方法 应用免疫组化SP法检测CXCR-4及EMT相关因子在60例口腔鳞状细胞癌中的表达,分析CXCR-4的表达与口腔鳞状细胞癌患者临床病理特征之间的关系及其与EMT相关因子的相关性.利用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默CXCR-4在人舌鳞状细胞癌细胞Tscca中的表达,应用PCR及蛋白质印迹法检测沉默效果.通过Transwell、划痕实验、流式细胞术、蛋白质印迹法检测沉默后细胞侵袭、迁移能力、凋亡及EMT相关因子表达的情况.结果 CXCR-4、神经钙黏素、Twist、Snail在淋巴转移组高表达,β-联蛋白、钙黏着蛋白在非淋巴结转移组中高表达.且CXCR-4与Twist、Snail、神经钙黏素的表达呈正相关（相关系数分别为0.300、0.256、0.333,P＜0.05）,与β-联蛋白的表达呈负相关（相关系数为-0.497,P＜0.05）.沉默CXCR-4的舌癌细胞迁移、侵袭能力减弱,凋亡率增加,神经钙黏素、基质金属蛋白酶2、9表达下降（神经钙黏素：F=20.999,P=0.002;基质金属蛋白酶2：F=47.156,P=0.000;基质金属蛋白酶9：F=142.317,P=0.000）,钙黏着蛋白表达升高（F=111.022,P =0.000）.结论 CXCR-4可能通过调控EMT的发生,促进口腔鳞状细胞癌的淋巴转移.

原发癌灶定位与甲状腺微小癌颈侧区淋巴结转移关系研究

目的探究原发灶定位与甲状腺乳头状微小癌(PTMC)颈侧区淋巴结转移的关系;评估超声检查预测颈侧区淋巴结转移的准确率。方法回顾性分析2014年1月至2015年12月天津医科大学肿瘤医院收治的134例PTMC病人的临床资料;均行中央区淋巴结清扫+改良颈侧区淋巴结清扫。依据超声定位分组;分析癌灶位置与颈侧区淋巴结转移的关系。结果颈侧各分区淋巴结转移发生率分别为:Ⅱ区30.6%、Ⅲ区50.7%、Ⅳ区57.5%、Ⅴ区11.3%。癌灶位于中上极者颈侧区淋巴结转移发生率高于癌灶位于下极者(89.7% vs. 75.7%;P=0.038);靠近外侧者较内侧者更易出现颈侧区淋巴结转移(93.7% vs. 81.4%;P=0.049)。超声检查判定Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ区淋巴结转移的敏感度分别为43.9%、85.3%、85.7%、14.3%;特异度为91.4%、57.6%、35.1%、99.1%。超声预测Ⅲ、Ⅳ区淋巴结转移敏感度较高;Ⅱ、Ⅴ区淋巴结转移特异度较高。结论癌灶位置与甲状腺微小癌颈侧区淋巴结转移密切相关;超声可为临床确定颈侧区淋巴结的清扫范围提供依据。

微小RNA-98靶向N-Ras调控涎腺腺样囊性癌侵袭和迁移

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-98对涎腺腺样囊性癌（SACC）细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法运用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-98在SACC新鲜组织及细胞株中的表达。利用生物信息软件预测出miR-98的靶基因为N-Ras。免疫组织化学法检测N-Ras在SACC组织标本中的表达并分析其临床意义。上调/下调SACC细胞株miR-98的表达后，应用噻唑盐（MTT）法、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验检测miR-98对SACC细胞增殖、迁移及侵袭影响。并采用双荧光素酶报告基因系统、RT-qPCR和Western blot检测miR-98与N-Ras的靶向关系。结果miR-98在SACC组织中及ACC-M细胞中呈低表达，N-Ras在SACC组织中呈高表达，其表达与肿瘤T分期和临床分期相关。转染miR-98 mimics后，ACC-M细胞的增殖能力降低，发生侵袭的细胞数由（158.0±5.5）个减少至（92.0±4.7）个（t＝15.800，P＝0.000），细胞24 h迁移距离由（0.42±6.30） mm减少至（0.25±6.00） mm（t＝4.630，P＝0.001）；而当miR-98被抑制后，SACC-83细胞的增殖能力增强，发生侵袭的细胞数[（123.0±10.6）]个比对照组[（88.0±4.0）个]增多（t＝5.254，P＝0.006），细胞24 h迁移距离由（0.15±7.50） mm增加（0.38±8.80） mm（t＝9.109，P＝0.000）。此外双荧光素酶报告基因系统、RT-qPCR和Western blot均证实miR-98能够调控N-Ras的表达。结论miR-98可以作用于N-Ras，进一步调控SACC细胞的侵袭和迁移能力。