nNOS-NOS1AP复合体在瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用

目的评价神经元型一氧化氮合酶(nNOS)-一氧化氮合酶1衔接蛋白(NOS1AP)复合体在瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠40只,体质量240~260 g,2~3月龄,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)静脉输注生理盐水0.1 ml·kg^(-1)·min^(-1)60 min;瑞芬太尼组(R组)静脉输注瑞芬太尼1.0μg·kg^(-1)·min^(-1)60 min;nNOS-NOS1AP抑制剂ZLc002组(C+Z组)和瑞芬太尼+ZLc002组(R+Z组)每天腹腔注射ZLc00210 mg/kg,连续3 d,然后分别静脉输注生理盐水0.1 ml·kg^(-1)·min^(-1)或瑞芬太尼1.0μg·kg^(-1)·min^(-1)60 min。分别于静脉输注前24 h和输注结束后6、24、48 h(T0-3)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。最后一次痛阈测定结束后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用RT-PCR法检测脊髓nNOS、NOS1AP、G蛋白信号传导激活蛋白1(Dexras1)的mRNA表达;生物素转化法提取亚硝基化蛋白,Western blot法测定nNOS、NOS1AP、总体和亚硝基化Dexras1的表达;免疫共沉淀法检测nNOS-NOS1AP共表达;测定脊髓NO含量。结果与C组比较,R组T1-3时MWT降低,TWL缩短,脊髓nNOS、NOS1AP及其mRNA表达上调,nNOS-NOS1AP共表达和NO生成增加,亚硝基化Dexras1表达上调(P<0.05),C+Z组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与R组比较,R+Z组T1-3时MWT升高,TWL延长,脊髓nNOS-NOS1AP共表达和NO生成减少,亚硝基化Dexras1表达下调(P<0.05),nNOS、NOS1AP及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);4组间脊髓Dexras1及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏的机制可能与上调脊髓nNOS和NOS1AP的表达,促进二者相互作用,介导NO生成和Dexras1亚硝基化修饰有关。

脊髓DMT1亚硝基化修饰与瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏机制的关系

目的探讨脊髓二价金属离子转运体1(DMT1)亚硝基化修饰与瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏机制的关系。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠40只, 2~3月龄, 体质量240~260 g, 采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg^(-1)·min^(-1) 60 min;瑞芬太尼组(R组)尾静脉输注瑞芬太尼1.0 μg·kg^(-1)·min^(-1) 60 min;L-NAME组(C+L组)腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME 30 mg/kg, 10 min后尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg^(-1)·min^(-1) 60 min;瑞芬太尼+L-NAME组(R+L组)腹腔注射L-NAME 30 mg/kg, 10 min后尾静脉输注瑞芬太尼1.0 μg·kg^(-1)·min^(-1) 60 min。分别于静脉输注前24 h、输注结束后6、24和48 h(T0~3)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。最后一次测定痛阈后麻醉状态下处死大鼠, 取L4~6脊髓标本, 采用实时定量PCR法检测脊髓nNOS和DMT1 mRNA的表达;生物素转化法提取亚硝基化蛋白质, Western blot法检测nNOS、总体DMT1和亚硝基化DMT1的表达;分光光度法测定脊髓NO含量;原子吸收分光光度计法测定脊髓铁含量。结果与C组比较, R组T1~3时MWT降低, TWL缩短, R组和R+L组脊髓nNOS及其mRNA和亚硝基化DMT1表达上调, NO和铁含量升高(P<0.05);C+L组各指标差异均无统计学意义(P>0.05);与R组比较, R+L组T1~3时MWT升高, TWL延长, 脊髓nNOS及其mRNA和亚硝基化DMT1表达下调, NO和铁含量降低(P<0.05);与C+L组比较, R+L组T1~3时MWT降低, TWL缩短, 脊髓nNOS及其mRNA和亚硝基化DMT1表达上调, NO和铁含量升高(P<0.05);各组脊髓DMT1 mRNA和总体DMT1表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓nNOS激活引起NO生成增加, 介导DMT1亚硝基化修饰, 可能与瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏的机制有关。