拓展王伯祥教授“肝络瘀阻”学说构建中医肝病分期辨证体系

本文回顾了王伯祥教授治疗肝病尤重瘀血的学术思想和善用活血化瘀药物的临床经验,总结了该团队在“肝病血瘀证”临床和实验研究的成果,阐述了该团队在此基础上构建“毒损肝络”假说的具体内容和临床应用,提出以分期辨证取代分型辨证诊疗体系的构想。

青蒿琥酯在大鼠体内外抗肝纤维化的作用

目的观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对大鼠肝纤维化的治疗作用及其对大鼠原代肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法建立牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)免疫性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组、模型对照组及青蒿琥酯低、中、高剂量组;给药组分别给予不同剂量的青蒿琥酯灌胃,正常和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续2个月;酸水解法检测其肝组织胶原蛋白含量,测定血清白蛋白(albumin,Alb)、丙氨酸氨基转移酶(alanine amino transferase,ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)水平;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色)和胶原染色法对肝组织切片染色。分离大鼠HSCs,以培养活化HSCs。用MTT法测定HSCs增殖率,消化法测定细胞培养上清液中的羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,Western blot和RT-PCR法检测HSCs p53表达。结果与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清Alb水平降低(P<0.05),ALT、AST水平增高(P<0.05);与模型对照组相比,青蒿琥酯低、中、高剂量组血清AST水平降低(P<0.05),大鼠肝组织胶原蛋白含量降低(P<0.05)。青蒿琥酯对培养活化的HSCs有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);青蒿琥酯作用24 h后,HSCs分泌羟脯氨酸减少(P<0.05),p53 mRNA表达增加(P<0.05)。结论青蒿琥酯在大鼠体内、体外均有抗肝纤维化作用,该作用与其增加HSCs p53的表达有关。

巯基化羧甲基壳聚糖载醋甲唑胺纳米球滴眼剂的生物安全性评价

目的:研究巯基化羧甲基壳聚糖载醋甲唑胺纳米球滴眼剂的生物相容性。方法:以巯基化羧甲基壳聚糖为载体,包裹醋甲唑胺得到载药纳米球,制备成滴眼剂。采用迟发超敏试验、细胞毒性试验(MTT法和LDH法),对该滴眼剂进行生物安全性评价。结果:醋甲唑胺纳米球滴眼剂对豚鼠皮肤未出现红斑水肿现象,无致敏性,细胞毒性反应为2级,LDH释放率为37.09%,MTT试验和LDH试验IC50结果为0.24 g/m L和0.54 g/m L。结论:醋甲唑胺纳米球滴眼剂具有良好的生物相容性。

Mn-ZnS量子点室温磷光检测尿液中硫酸庆大霉素

目的:基于硫酸庆大霉素对Mn掺杂ZnS量子点的磷光增敏作用,建立一种简便且灵敏测定硫酸庆大霉素浓度的新方法。方法:在水相中合成巯基丙酸(MPA)包裹的Mn掺杂ZnS量子点,实验中考察了缓冲溶液pH和类型、反应时间及量子点浓度等因素对室温磷光检测的影响。利用荧光分光光度计通过测定Mn掺杂ZnS量子点磷光强度的变化,实现对尿液中硫酸庆大霉素以及硫酸庆大霉素注射液浓度的测定。结果:成功合成了浓度为2×10^(-2)mg/L的Mn掺杂ZnS量子点。在pH=7.4的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲体系中,静置反应时间为30min条件下,硫酸庆大霉素浓度与Mn掺杂ZnS量子点磷光强度线性关系良好且相关系数R^2=0.9985。结论:该方法灵敏、快捷,可以用于测定尿液中硫酸庆大霉素的浓度。

缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的作用

目的:分离提取缺氧预适应(HPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌的微囊泡(MVs),探讨HPC-EMVs对正常H9c2心肌细胞的作用和其Caspase 3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法:采用HPC方法诱导HUVECs释放MVs,将其和正常培养的大鼠H9c2心肌细胞孵育,通过MTT法检测细胞存活率和比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;通过Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;比色法测定培养液中Caspase 3活性以及Western blot法检测H9c2细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:HPC模型构建过程中,与缺氧/复氧(H/R)组相比,HPC组细胞存活率显著升高(P<0.01),即成功构建HUVECs的HPC模型;HPC-EMVs处理H9c2细胞结果发现,与对照组H9c2细胞相比,HPC-EMVs 30、60μg/m L组细胞存活率显著降低(P<0.001),且LDH活性和Caspase 3活性显著升高(P<0.01或P<0.001),凋亡细胞量增加,Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.001)。结论:成功采用HPC的方法诱导HUVECs释放MVs,HPC-EMVs通过影响正常H9c2细胞Caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥促凋亡作用。

美索巴莫磷酸钠在大鼠体内的药代动力学研究

目的:研究灌胃和肌内注射给予美索巴莫磷酸钠后在大鼠体内的药代动力学特征。方法:应用高效液相色谱法测定大鼠血浆中的美索巴莫浓度,以3P97药代动力学软件拟合药代动力学参数。结果:美索巴莫磷酸钠以128、256和512 mg/kg单次灌胃给药后,主要药代动力学参数t1/2分别为(0.86±0.28)、(1.50±0.47)和(2.74±1.31)h;C_(max)分别为(39.09±11.60)、(58.97±20.22)和(82.62±21.44)μg/ml;AUC_(0-t)分别为(75.00±28.58)、(175.94±94.77)和(350.05±122.99)μg/ml·h。美索巴莫磷酸钠以128、256和512 mg/kg单次肌内注射给药后,主要药代动力学参数t1/2分别为(1.15±0.45)、(1.44±0.59)和(1.95±0.82)h;C_(max)分别为(75.98±18.83)、(117.00±16.51)和(157.85±13.26)μg/ml;AUC_(0-t)分别为(145.36±53.64)、(270.57±109.38)和(467.52±210.05)μg/ml·h。结论:美索巴莫磷酸钠灌胃或肌注给药后在大鼠体内的药代动力学过程符合一级吸收一房室开放模型特点,随剂量的增加,消除半衰期t1/2、峰浓度C_(max)和曲线下面积AUC_(0-t)均有相应的增高趋势。

聚乙二醇电解质联合二甲基硅油对结肠镜检查肠道准备的影响

目的:观察聚乙二醇电解质联合口服二甲基硅油用于结肠镜检查肠道准备的临床效果,以寻找一种最有效和耐受性良好的肠道准备方法,提高肠镜检查的成功率.方法:选择2014-05/2015-05在天津海滨人民医院消化内科进行结肠镜检查的患者共400例,随机分成对照组和观察组,每组患者200例.对照组口服聚乙二醇电解质;观察组在对照组的基础上加服二甲基硅油散.利用Boston肠道准备度量表(Boston Bowel Preparation scale,BBPS)对肠道清洁度进行评分;对各肠段的气泡量进行盲法评价;比较两组患者腹痛腹胀的耐受性及息肉检出率;记录结肠镜到达回盲部所用时间.结果:(1)两组肠道清洁度比较,无显著性差异(P>0.05);(2)与对照组相比,观察组的气泡量、患者耐受情况均优于对照组,与对照组中喷洒二甲基硅油散溶液前和喷洒二甲基硅油散溶液后分别相比,观察组的息肉检出率均较高(33.50%vs 24.50%,P<0.05)、(33.50%vs 32.50%,P<0.05),差异有统计学意义;(3)结肠镜到达回盲部的时间,两组比较无统计学意义.结论:聚乙二醇电解质联合二甲基硅油可改善肠道清洁程度,减轻患者腹部疼痛感,提高耐受性,提高息肉的检出率,结肠镜检查前加服二甲基硅油能安全有效地改善肠道准备效果.

蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路对四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的抑制作用。方法:选用健康Wistar大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和秋水仙碱组。除正常组大鼠外,其余大鼠均给予自制高脂饲料饲养,每周两次皮下注射40%CC14花生油混合溶液,隔日灌胃给予30%乙醇,各给药组每日灌胃给药的同时给予正常组和模型组以等容积的蒸馏水,直至造模时间(共6周)结束后,乌拉坦麻醉大鼠并收集肝组织标本,比色法检测肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的分布情况,Western blot法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平。结果:与正常组相比,模型组Hyp含量明显升高(P<0.05);各给药组的Hyp含量显著低于模型组,且肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平显著升高(P<0.05)。结论:蒿鳖养阴软坚方可以通过激活Nrf2/NQO1通路,上调Nrf2和NQO1的表达,降低肝组织中Hyp的含量,从而发挥抑制由四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的作用。

蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用

目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用。方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组。MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸(Hyp)的含量;Western blot法检测collagenⅠ以及α-SMA蛋白表达量。结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen Ⅰ、α-SMA的表达量显著升高。蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagenⅠ和α-SMA的表达。结论:蒿鳖养阴软坚方能够显著抑制LX-2增殖,下调collagenⅠ和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用。

蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制

目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:健康Wistar大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60%提取方案组(0.09 mg·kg^(-1)·d^(-1))、先水后醇95%提取方案低、高剂量组(2.59 g.kg^(-1)·d^(-1)、8.2 g·kg^(-1)·d^(-1))、水提醇沉低、高剂量组(2.59 g·kg^(-1)·d^(-1)、8.2 g·kg^(-1)·d^(-1))及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只大鼠。酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,造模10周后处死大鼠,留取标本。酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量;Western blotting检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果。结果:(1)肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高(P<0.01);与模型组比较,先水后醇60%提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低(P<0.05)。(2)肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P<0.01)。(3)肝组织免疫组化染色结果:模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核。结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用。

蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路影响

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A(Con A)诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路的影响。方法:Balb/c小鼠随机分为正常、模型、秋水仙碱和蒿鳖养阴软坚方低、中、高剂量(1.16 g/kg、3.36 g/kg、11.58 g/kg)组。除正常组外,剩余各组均尾静脉注射1.5 mg/m L Con A,每周1次,持续10周。取小鼠肝脏作病理切片,观察肝脏的病理变化,检测肝组织羟脯氨酸浓度,免疫组化法检测肝组织Nrf2、HO-1蛋白的表达情况。结果:与模型组比较,蒿鳖养阴软坚方各剂量组能不同程度地减轻肝组织的炎症反应和降低肝组织羟脯氨酸的浓度,显著减轻肝纤维化程度(P<0.05);随着蒿鳖养阴软坚方浓度增加,Nrf2和HO-1的阳性表达逐渐增强。结论:蒿鳖养阴软坚方对Nrf2/HO-1信号通路具有激活作用,且该作用可能为其抗肝纤维化机制之一。

贝尼地平对人乳内动脉的抗痉挛作用

目的 研究第3代二氢吡啶类钙通道拮抗剂贝尼地平对氯化钾(KCl)引起的人乳内动脉收缩的拮抗作用,探讨冠状动脉旁路移植术中使用贝尼地平作移植血管解痉剂的可能性.方法 收集19例冠心病患者移植术中废弃的乳内动脉,每例裁剪为3 mm长,置于微血管张力测定仪中.两种方法研究贝尼地平对离体乳内动脉的药理反应:(1)贝尼地平对KCl预收缩血管的舒张效应(7例).用K+(KCl 40 mmol/L)预收缩乳内动脉后,加入累计终浓度为 10-11~ 10-4.5 mol/L的贝尼地平溶液.(2)贝尼地平预孵育后,对KCl收缩血管的抑制作用(6例).将同一根乳内动脉切成2段,分为实验组和对照组.实验组加入浓度10-8 mol/L贝尼地平(相当于人体内平均稳态血药浓度),对照组加入相应体积的水(对照溶剂),分别孵育 1 h,加入累计浓度的血管收缩剂KCl(5~ 120 mmol/L).贝尼地平孵育24 h后,采用酶联免疫吸附法检测caveolin 1.2蛋白的含量(3份,每份2例).结果 舒张效应实验中,贝尼地平引起KCl预收缩血管的最大舒张百分比为(87.7±4.9)%.拮抗效应实验中,经贝尼地平孵育后,血管最大收缩值为(9.1±3.4)mN,与加入相同体积水的对照组相比有统计学差异[(16.9±4.4)mN,P<0.01].贝尼地平孵育后,对KCl有很好的拮抗效应(P<0.05),caveolin 1.2含量明显降低(P<0.05).结论 贝尼地平对KCl引起的血管收缩作用有很好的拮抗作用,其对血管的舒张作用可能与caveolin 1.2的表达相关.冠状动脉旁路移植术中使用贝尼地平能有效预防和治疗血管痉挛.