Toll样受体信号通路可促进IL-17RA在神经胶质细胞中的表达

目的：研究IL-17R在神经胶质细胞中的表达是否会受到Toll样受体（TLR）信号通路的调节及可能的调节方式。方法免疫诱导B6小鼠发生实验性自身免疫性脑脊髓炎（ experimental autoimmune encephalomyelitis ， EAE），real-time PCR检测Il17ra、Il17rc在脑及脊髓组织中的表达。组织化学染色显示脊髓组织的脱髓鞘情况、IL-17 RA阳性及CD3阳性细胞的分布。在Rag1-/-小鼠中进行相同测定，以判断IL-17RA在EAE小鼠脊髓组织中的高表达是否与CD3细胞的侵润有关。以不完全弗氏佐剂（IFA）与TLR的配体相配伍替代CFA免疫B6小鼠，检测Il17ra在中枢神经系统（CNS）中的表达。自新生小鼠脑组织分离星形胶质细胞、小胶质细胞及少突胶质细胞进行体外培养，以TLR的配体进行干预，qPCR及Western blot测定其中IL-17RA的表达。进而以IL-17A及LPS协同干预体外培养的星形胶质细胞，ELISA检测培养基中CCL2、CXCL8及IP-10等趋化因子的含量。结果 EAE小鼠CNS中存在Il17 rc的高表达，脊髓组织有明显的脱髓鞘病变、大量IL-17阳性细胞分布及CD3细胞侵润。在Rag1-/-小鼠中的测定结果则提示，CNS中IL-17 RA的高表达与T淋巴细胞的侵润无关。IFA与TLRs配体相协同即可体内促进Il17rc在小鼠CNS中的表达。体外实验也证实，某些TLR配体，特别是LPS及polyI∶C，可直接上调Il17rc在星形胶质细胞、小胶质细胞及少突胶质细胞中的表达。 LPS与IL-17RA相协同可显著刺激体外培养的星形胶质细胞分泌趋化因子，其效力远高于两者的单独作用。结论某些TLR信号通路可直接刺激IL-17 RA在神经胶质细胞中的表达。所表达的IL-17R为功能性受体，可刺激胶质细胞分泌趋化因子。

基质金属蛋白酶-9调控CD73自视网膜色素上皮细胞膜表面脱落机制的初步研究

目的探讨基质金属蛋白酶（MMP）-9调控CD73自视网膜色素上皮（RPE）细胞膜表面脱落的机制。方法以脂多糖及肿瘤坏死因子-α共同干预体外培养的人RPE细胞，诱导RPE细胞膜表面CD73脱落。同时给予磷脂酶C（PLC）抑制剂ET-18-OCH，30．0gmol／L或广谱MMP抑制剂ONO-48175．0gmol／L进行干预；流式细胞仪检测RPE细胞膜表面CD73含量变化。以选择性MMP．2、MMP-9抑制剂或相应siRNA进行干预；利用基因定点突变技术改造CD73中潜在的MMP．9识别位点，在CD73^-/-。RPE细胞中过表达野生型（Wt）及突变型（Mut）CD73，检Nwt、Mut．CD73脱落情况。结果广谱MMP抑制剂可有效抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落；PLC抑制剂不能抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落。选择性抑制MMP-9活性或以siRNAT调MMP-9的表达也均可抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落。表达于CD73。RPE细胞膜表面的Wt．CD73可发生脱落，而Lys^547Phe^548编码位点突变的CD73未见脱落。结论MMP．9通过水解Lys^547Phe^548位点而参与炎症状态下CD73自RPE细胞膜表面的脱落。