雄激素受体在不同分子亚型乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨乳腺癌组织雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达,分析其在各分子亚型中表达的特点及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测AR在335例乳腺浸润性导管癌石蜡包埋组织中的表达,结合66月随访情况,分析AR在五个分子亚型中表达的特点。结果乳腺癌组织中AR阳性率较高,达72.5%,尤其在ER阴性PR阴性乳腺癌病例,AR常常显示阳性(占53.2%)。较多(61.0%)basal-like型乳腺癌AR显示阴性,提示预后欠佳。在luminal Al、uminal B、basal-like以及normal-like亚型中AR阳性组出现局部复发、远处转移或死亡比例较AR阴性组少(P=0.019,0.044,0.034和0.032),生存曲线也显示了AR阳性患者预后较好(P=0.006,0.013,0.036和0.010)。结论检测乳腺癌AR的表达水平有助于改进和细化乳腺癌的分子分型,为指导个体化治疗提供理论依据。

纳米炭与美兰在乳腺癌前哨淋巴结活检中的应用

近20年来乳腺癌发病率呈上升趋势，在许多国家已成为发病率最高的妇科肿瘤。NSABP—B32、ALMANAC等多中心随机临床试验研究结果表明，前哨淋巴结活检（sentinellymphnodebiopsy，SLNB）可准确地提供腋窝淋巴结分期，获得与腋窝淋巴结清扫（ALND）等同的临床信息，同时有效避免了ALND带来的诸多并发症，因此SLNB已成为有适应证患者的首选治疗。但SLNB的检出率、准确性及诸多因素对结果的影响仍然是研究的热点，许多问题尚无定论。美兰价格低廉，是目前国内最常用的SLNB示踪剂，但易对SLNB的结果产生影响。本研究采用纳米炭混悬注射液和美兰行乳腺癌SLNB，综合评价这2种染料应用于乳腺癌SLNB效果的优劣。

Annexin a2对人乳腺癌MDA-MB-231增殖的影响及分子机制

目的研究Annexin a2的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、细胞周期分布和克隆形成能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法采用小干扰RNA(siRNA)技术下调人乳腺癌细胞中Annexin a2基因的表达,利用MTT比色法、流式细胞术、平板克隆形成实验观察Annexin a2表达水平下降后乳腺癌细胞增殖、周期分布和克隆形成能力的变化;利用免疫共沉淀和免疫荧光分析在MDA-MB-231细胞中与Annexin a2相互作用的蛋白。结果 Western blot证实siRNA干扰后MDA-MB-231细胞中Annexin a2蛋白表达水平明显下降;同时细胞增殖和克隆形成能力显著下降,细胞G0/G1期比例增高,G2/M和S期比例下降;免疫共沉淀发现Annexin a2与信号转导和转录激活因子3(STAT3)存在相互作用。结论 Annexin a2蛋白水平下降可以明显抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和克隆形成能力,Annexin a2与STAT3相互作用有可能参与乳腺癌细胞的增殖调节。

乳腺癌骨转移预后相关因素分析

目的分析乳腺癌术后骨转移患者的预后相关因素。方法收集2001年12月～2006年12月天津医科大学附属肿瘤医院收治的乳腺癌术后首次发生远处转移且为骨转移的患者376例,回顾性分析其临床病理资料,并进行单因素和多因素逐步回归性分析。结果本组死亡260例,中位生存时间为33.0个月。单因素分析显示,肿瘤大小、病理类型、组织学分级、分子分型、乳腺癌术后是否规范化疗以及是否相继出现内脏转移与骨转移预后有关(P均<0.05);多因素分析显示,肿瘤分子分型、组织学分级、术后是否规范化疗和相继有无内脏转移与骨转移后预后有关(P均<0.05)。结论分子分型差、肿瘤组织分级高、术后未行规范化疗以及相继出现内脏转移是骨转移预后不良的独立危险因素。

乳腺导管内癌治疗方式研究进展

乳腺癌是高度异质性的疾病,不同病理类型预后也不相同。乳腺导管内癌是指乳腺导管内上皮细胞的异常增生,但尚未突破基底膜。2003年WHO认为其不典型增生发展到浸润性癌之间的中间状态,将其定义为癌前病变〔1〕。但不经治疗的情况下约有53%的导管内癌发展为浸润性癌〔2〕。因此,针对导管内癌的治疗是必要的。

CD20+B和CD3+T淋巴细胞在乳腺浸润性导管癌和髓样癌中的表达及与预后的关系

目的检测CD20+B、CD3+T淋巴细胞在乳腺浸润性导管癌和髓样癌中的表达分布,探讨淋巴细胞浸润与浸润性导管癌预后的关系。方法利用免疫组织化学链霉素亲和素生物素法检测128例浸润性导管癌,44例髓样癌中CD20、CD3的表达,分析表达差异与预后的关系。组间采用KruskalWallisTest,组内采用卡方检验进行分析。结果 (1)CD20+B、CD3+T这两种淋巴细胞在浸润性导管癌中分布均是瘤周多于瘤内,在髓样癌中淋巴细胞表达高于浸润性导管癌(P<0.05)。(2)浸润性导管癌中CD20+B、CD3+T淋巴细胞浸润越多,无病生存率越高(P<0.05)。(3)CD20+B淋巴细胞与组织学分级、肿瘤pTNM分期、淋巴结状态、复发情况呈负相关(P<0.05);CD3+T淋巴细胞与组织学分级、淋巴结状态、复发状态呈负相关(P<0.05)。结论 CD20+B、CD3+T淋巴细胞在浸润性导管癌和髓样癌中表达差异有显著性,在浸润性导管癌中其浸润程度与预后相关。

EHD2下调促进乳腺上皮细胞转化的研究

目的研究EHD2与肿瘤的关系及其表达抑制对乳腺上皮细胞转化能力的影响。方法取3例浸润性乳腺导管癌及其配对癌旁正常组织，通过WesternBlot比对EHD2的蛋白表达水平。siRNA干扰非癌乳腺上皮细胞HBI，100的EHD2蛋白表达水平，研究EHD2下调对细胞悬浮性克隆生长能力的影响。结果EHD2在癌组织中的蛋白表达均高于正常乳腺组织（F=5．389，P〈0．05）；siRNA干扰EHD2表达明显降低（t=101．458，P〈0．005），HBL100细胞的悬浮生长克隆数显著增加（t=88．754，P〈0．000）。结论EHD2可能是新乳腺抑癌基因，它的表达缺失可能引起正常上皮细胞的恶性转化。

肿瘤整形外科在乳腺肿瘤治疗中的作用

坚持乳腺癌治疗原则的基础上,整形外科是提高病人生活质量的重要部分,包括有保乳手术,乳房切除后自体组织或乳房假体的乳房重建,对侧乳房修整以及局部晚期乳腺癌手术后胸壁缺损的修复等。良好的肿瘤整形外科医生应具备肿瘤外科医生的知识与技能。

雄激素抑制雌激素受体阴性雄激素受体阳性乳腺癌细胞增殖相关微小RNA的筛选及其功能学研究

目的筛选雌激素受体阴性（ER-）雄激素受体阳性（AR＋）乳腺癌细胞中AR相关的微小RNA（miRNA），并研究其细胞功能学。方法选择MDA—MB-453乳腺癌细胞，雄激素二氢睾酮作用后miRNA芯片杂交筛选出明显上调的miRNA，对其中的let-7a采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT—qPCR）进行验证；通过转染let-7a特异性反义寡核苷酸使let-7a下调4倍，通过构建质粒和细胞转染实验使let-7a上调〉8倍；噻唑蓝（MTT）和流式细胞术检测转染后细胞增殖和细胞周期的变化。结果miRNA芯片筛选出明显上调的miRNA只有let-7a、b、c、d4个，RT—qPCR结果显示1et-7a上调近13倍；细胞转染后，在let-7a低表达组，MTT检测结果显示，细胞增殖活性增高，至第4天之后与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），流式细胞术检测结果显示对照组和实验组细胞G，期分别为（72．30±3．16）％和（63．24±3．63）％，S期分别为（19．12±4．45）％和（31．00±4．56）％，G，期细胞比例减少，S期细胞比例增加，差异有统计学意义（P〈0．05），在let-7a高表达组，则出现相反的结果。结论let-7a能够抑制ER—AR＋乳腺癌细胞增殖、使细胞周期阻滞在G1-S期，可能在雄激素抑制ER-AR＋乳腺癌细胞生长过程中发挥主要作用。

雄激素受体在乳腺癌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

目的检测雄激素受体（AR）在乳腺癌细胞中的表达，并观察雄激素刺激对乳腺癌细胞增殖的影响。方法选择雌激素受体（ER）阳性的MCF-7和ER阴性的MDA．MB-453乳腺癌细胞，体外培养，Westernblot技术检测两乳腺癌细胞株中AR蛋白的表达，MTT法检测用1×10-7、1×10-8和1×10-9mol／L不同浓度的雄激素二氢睾酮（DHT）分别干预48、96、144h后的细胞增殖，并应用流式细胞术检测DHT刺激乳腺癌细胞72h后细胞周期的变化。结果两个乳腺癌细胞株经DHT作用后AR蛋白表达均增多，DHT通过AR抑制MCF-7和MDA．MB-453两个乳腺癌细胞株的生长，各时间段不同浓度组比较A值差异无统计学意义（P〉0．05），细胞周期结果显示G．期细胞比例增高，S期细胞比例降低。结论雄激素受体途径对ER阳性的MCF-7和ER阴性的MDA．MB-453乳腺癌细胞均有抑制生长作用，可能通过抑制细胞由G，期到S期转化来实现的。

不同片段的NPM1-EGFP融合表达载体的构建和表达

目的构建不同片段的NPM1与绿色荧光蛋白(EGFP)的真核融合表达质粒,检测其在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达和定位。方法 RT-PCR法从人乳腺癌MDA-MB-231细胞cDNA中扩增不同片段的NPM1,产物经电泳分离、切胶纯化后,分别采用XhoⅠ和EcoRⅠ进行酶切,然后与同样酶切后的pEGFP-C3载体进行连接反应,将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,挑取克隆,提取质粒并酶切鉴定。将酶切及测序鉴定后的pEGFP/NPM1质粒采用脂质体介导后将其转入MDA-MB-231细胞中,通过Western blot技术检测其蛋白的表达。倒置荧光显微镜观察其亚细胞定位。结果酶切鉴定和基因测序结果显示不同片段的pEGFP-NPM1融合表达质粒构建成功,并可在MDA-MB-231细胞内表达,倒置荧光显微镜下可以清晰显见融合蛋白的亚细胞定位。结论 NPM1及其不同结构域的真核重组质粒构建成功,在细胞中成功表达,并可以用于分析其亚细胞定位,从而为进一步研究NPM1在乳腺癌发生发展中的作用奠定基础。