反义miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究

目的探讨as—miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-FU化疗敏感性的效果。方法透析法制备5-FU／PAMAM载体，透射电镜观察形态，紫外分光光度计检测载药率和包封率；流式细胞仪检测转染效率并分析细胞凋亡比例；MTT法检测共转染后细胞生长抑制效果；免疫荧光检测Ki67和Bcl-2蛋白表达；Transwell检测细胞侵袭能力变化。结果纳米微粒形态规整；平均包封率为66．21％，平均载药量为31．77％；PAMAM转染效率为70．53％；共转染组细胞生长显著抑制（F=273．345，P=0．000）；凋亡比例升高（F=43．21，P=0．000），Ki67、Bcl-2表达均下调；细胞侵袭能力显著下降。结论PAMAM可以有效同载as—miR-21和5-FU，且更加有效地抑制U251脑胶质瘤细胞的体外生长并增加对5-FU的化疗敏感性。

反义微小RNA-21寡核苷酸抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的体外研究

目的 探讨反义微小RNA-21寡核苷酸（antisense oligonucleotide micro RNA-21,AS-miRNA-21）抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的效果和机制.方法 实验分3组,①空白对照组 ②无义寡核苷酸转染组 ③AS-miRNA-21转染组.寡核苷酸介导转染反义寡核苷酸敲低Tb3.1细胞miRNA-21表达.使用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）鉴定转染后Tb 3.1细胞miRNA-21表达水平 甲基噻唑基四唑（MTT）法检测转染后Tb 3.1细胞生存率 流式细胞术检测转染后Tb3.1早期凋亡 Matrigel基质生长实验检测转染后Tb 3.1细胞生长形成球形集落能力 Transwell体外迁移实验检测转染后Tb 3.1细胞迁移能力 蛋白质印迹法检测转染后Tb3.1细胞增殖核抗原（antigen KI-.67,Ki67）、B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma 2,Bcl-2）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（phosphatase and tensin homolog,PTEN）、基质金属蛋白酶2、9（matrix metalloproteinase 2/9,MMP-2、MMP-9）和组织基质蛋白酶抑制因子蛋白1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1）蛋白表达.结果 荧光实时定量PCR显示转染后miRNA-21表达水平下调 转染第4天,AS-miRNA-21转染组肿瘤细胞生长速度[（53.43±11.83）%]低于其他两组[（91.32±8.02）%和100%]（F=27.02,P=0.00） 细胞凋亡率显著升高[（12.23±2.92）%,F=26.641,P=0.001] AS-miRNA-21转染组细胞生长不能形成球形克隆且通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数小于空白对照组（F=268.231,P=0.000） Ki67、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达下调,PTEN和TIMP-1蛋白表达上调.结论 敲低miRNA-21后Tb3.1人舌癌细胞增殖与侵袭能力被抑制,并为探索miRNA-21调控人舌癌发生机制提供实验依据.

聚酰胺-氨纳米微粒介导5-氟尿嘧啶联合小RNA-21抑制乳腺癌细胞生长的研究

目的 观察聚酰胺-氨（PAMAM）纳米微粒介导5-氟尿嘧啶（5-Fu）联合小RNA-21抑制乳腺癌细胞MCF-7生长的效果.方法 透析法制备5-Fu/PAMAM,孵育法同载miR-21抑制剂;透射电镜观察形貌;紫外分光光度计检测载药率和包封率;流式细胞仪检测转染效率及细胞凋亡;噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭能力变化.结果 5-Fu/PAMAM形貌规整,包封率为（66.21±4.11）%,载药率为（31.77±0.73）%,转染效率为（60.54±6.97）%;联合治疗组肿瘤细胞生长缓慢,在观察截止期时生存率（55.85±3.71）%;联合治疗组细胞凋亡率（18.32±2.42）%,与对照组比较明显增多（F=58.326,P〈0.01）;联合治疗组视野内细胞数目仅为（18.96±3.14）个,侵袭能力显著降低（F=16.409,P〈0.01）.结论 PAMAM可以实现5-Fu和miR-21的同载,并有效抑制乳腺癌细胞的体外生长.

脑胶质瘤中miR-21以及EGFR信号通路异常表达的相关性研究

目的 探讨不同病理级别国人脑胶质瘤中miR-21表达;miR-21编码基因扩增与突变;miR-21与EGFR信号通路关键成员表达关系.方法 荧光实时定量PCR法和荧光原位杂交法测定不同病理级别人脑胶质瘤标本中miR-21表达;半定量PCR法检测miR-21编码基因拷贝数并测序PCR产物;免疫组织化学染色法检测胶质瘤标本EGFR、pAKT和PTEN表达水平.结果 荧光实时定量PCR与荧光原位杂交miR-21表达随着胶质瘤病理级别的升高而增加（F=35.516;P=0.000）;不同病理级别中人脑胶质瘤中miR-21编码基因拷贝数差异无统计学意义（F=1.219;P=0.305）;miR-21表达与EGFR（rs=0.710,P=0.000）、pAKT（rs=0.638,P=0.000）表达呈正相关,与PTEN表达呈负相关（rs=-0.286,P=0.027）.结论 miR-21在国人脑胶质瘤中过表达且与EGFR信号通路关键成员表达相关.

不同AKT1与AKT2表达状态的胶质瘤的生存分析

目的 探讨AKT1与AKT2在脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的相关性.方法 免疫荧光法检测手术切除的50例胶质瘤组织标本中AKT1及AKT2的表达水平,确定两者表达的相关性并与生存期进行相关性分析.结果 Log - rank单因素检验,年龄≥50岁、KPS评分＜ 80分和WHO Ⅲ～Ⅳ级患者的生存期显著缩短.胶质瘤组织中AKT1及AKT2在WHOⅢ～Ⅳ级的表达率显著高于WHO Ⅰ～Ⅱ级,两者表达存在正相关,且与患者的生存期呈负相关.结论 AKT1与AKT2的表达状态对预测患者的生存期具有一定的临床价值.