卵巢癌腹腔微环境中肿瘤相关巨噬细胞表型特点及其TLR表达谱的研究

目的:探讨卵巢癌腹水微环境中肿瘤相关巨噬细胞(TAM)浸润情况及其表型特征和TAM的Tol样受体表达情况。方法:应用免疫组织化学方法及流式细胞术检测卵巢癌及妇科良性病变腹水中CD68+TAM及其亚型的比例情况。应用Real-timePCR检测不同亚型TAM的Tol样受体的表达情况。结果:23例卵巢癌腹水细胞CD68+TAM平均值为73.6个/HP,20例良性病变平均计数为50.2个/HP。两组间CD68+TAM浸润差异无统计学意义(P>0.05)。CD68+TAM在卵巢癌及对照组腹水中所占比例无差异,分别为31.7%和18.8%(P>0.05)。卵巢癌腹水中M2型TAM占全部巨噬细胞54.3%,明显高于对照组10.0%(P<0.05);对照组M1型TAM占优势,为53.3%,明显高于卵巢癌组的30.5%(P<0.01)。不同亚型巨噬细胞Toll样受体表达差异无统计学意义。结论:卵巢癌腹腔微环境中同时存在M1和M2型TAM,但M2型TAM在卵巢癌中占优势,而M1型TAM在良性病变中占优势。Toll样受体不能区分M1-TAM与M2-TAM。

siRNA抑制Sema4C基因表达对人乳腺癌细胞恶性行为的影响

目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制轴突导向蛋白分子(Semaphorin4C,Sema4C)基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移、侵袭及增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:根据Sema4C基因设计序列特异性的siRNA(Serna4C-siRNA),在脂质体介导下转染MDA-MB-231细胞,Western blot方法检测基因封闭效应,利用细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验及CFSE流式细胞仪方法检测细胞转染前后迁移、侵袭及增殖能力的变化,Western blot检测磷酸化AKT(p-AKT)在转染前后细胞中表达的变化。结果:转染Sema4C-siRNA 72小时后,乳腺癌MDA-MB-231细胞株(MDA-MB-231/Si)Sema4C蛋白表达明显下降,与未转染细胞MDA-MB-231相比,MDA-MB-231/Si细胞体外迁移能力减弱,侵袭及增殖能力明显下降;p-AKT表达水平在MDA-MB-231/Si细胞中明显降低。结论:Sema4C-SiRNA转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞可下调细胞中Sema4c蛋白表达水平,Sema4C-siRNA对MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭和增殖有抑制作用。

顺铂与多西紫杉醇同步放化疗治疗中晚期宫颈癌64例疗效观察

目的探讨治疗中晚期宫颈癌同步放化疗的化疗药物选择。方法64例中晚期宫颈癌患者同步放化疗随机分成顺铂组(30例)及多西紫杉醇组(34例),两组在同样放疗的基础上,顺铂组同步给予顺铂40mg/m^2,每周1次,化疗6周;多西紫杉醇组同步给予多西紫杉醇25mg/m^2,每周1次,化疗6周。放疗方法:两组患者均采用^(60)Co全盆对穿两头照射野DT30Gy后,改为^(60)Co盆腔四野照射并后装治疗。观察两组的治疗效果和不良反应,并进行比较。结果外照射结束时两组的有效率分别为96.67%及100%,差异无显著性(P>0.05),两组4年生存率分别为56.67%及73.52%,差异有显著性(P<0.05),局部复发率分别为10.00%及5.88%,差异有显著性(P<0.05),远处转移率分别为8.82%及5.88%,差异有显著性(P<0.05)。顺铂组有较明显的骨髓抑制和消化道反应,而且肾功损害明显,差异有显著性(P<0.05)。结论多西紫杉醇同步放化疗能明显提高患者的生存率,降低局部复发率及远处转移率,副作用相对较轻。

抑制ERK和Akt激酶对曲古柳菌素诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响

目的:探讨抑制胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)和蛋白激酶B(Akt)对曲古柳菌素(TSA)诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:常规培养OVCAR-3卵巢癌细胞株,分为对照、TSA、TSA+PD98059和TSA+Y294002四组,其中TSA组为TSA 2.5μM处理24 h,TSA+PD98059组和TSA+Y294002组采用5μM PD98059或Y294002预处理1 h后,2.5μMTSA处理24 h。MTT法分析各组细胞生存情况,Western blot法检测P53及细胞色素C蛋白的表达,分光光度法检测Caspase-9,Caspase-8和Caspase-3活性。结果:MTT分析结果显示,与对照组比较,TSA处理后显著降低OVCAR-3细胞的存活率(P<0.05);与TSA单独处理比较,采用5μM PD98059或Y294002预处理可以进一步降低OVCAR-3细胞的存活率(P<0.05)。Western bot分析结果显示TSA处理可以显著增加OVCAR-3细胞中P53及细胞色素C蛋白的表达,增加OVCAR-3细胞Caspase-9,Caspase-8和Caspase-3活性;对比TSA单独处理,TSA和Y294002联合应用可以增加OVCAR-3细胞中P53及细胞色素C蛋白的表达,提高Caspase-9,Caspase-8和Caspase-3的活性(P<0.05),而TSA和PD98059联合应用无这种效果。结论:TSA可以诱导卵巢癌OV-CAR-3细胞凋亡,其机制可能与上调P53及细胞色素C蛋白表达,激活Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3和线粒体凋亡途径有关。抑制Akt可以通过以上机制进一步促进TSA诱导的细胞凋亡。

EGFRvⅢ的表达对吉非替尼作用卵巢癌SKOV3细胞敏感性的影响

目的:探讨EGFRvⅢ的表达与卵巢癌SKOV3细胞对化疗药吉非替尼敏感性之间的关系,为临床治疗并合理选用抗肿瘤药物提供参考。方法:将质粒pcDNA4/TO-EGFRvⅢ稳定转染入SKOV3细胞,并用zeocin抗生素筛选出稳定表达EGFRvⅢ蛋白的细胞株(命名为SKOV3-EGFRvⅢ),用MTT法检测转染稳定株和原始株在吉非替尼作用下细胞的存活能力。然后,以吉非替尼分别对2株细胞建立的裸鼠异体肿瘤模型进行治疗,通过测量肿瘤体积大小评价肿瘤模型对吉非替尼的敏感性。结果:通过Western blot鉴定,SKOV3-EGFRvⅢ稳定株建立成功;MMT法结果表明SKOV3-EGFRvⅢ细胞在吉非替尼的作用下,其死亡率低于原始细胞株,且吉非替尼对SKOV3-EGFRvⅢ细胞建立的裸鼠肿瘤模型的抑制效果明显低于原始细胞株。结论:EGFRvⅢ的过表达导致卵巢癌SKOV3细胞及其体外移植肿瘤模型对化疗药吉非替尼的敏感性减弱。

上皮性卵巢癌脑转移的现状分析

脑部是上皮性卵巢癌转移的少见部位,但近20年来发生率有所提高。多数患者以头痛症状就诊,诊断依赖于CT或MRI影像学检查。目前尚无一个统一的治疗规范,采取手术和放化疗在内的综合治疗可以使患者受益。特别对于单发脑转移灶者,以手术为主的综合治疗可以改善患者预后。立体定向放疗的应用为该治疗提供了新的前景。该病的预后差,相关预后因素尚有争议,目前一致认为患者一般情况良好和未合并颅外病灶有利于预后。

高迁移率族蛋白1及晚期糖基化终产物受体在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的研究高迁移率族蛋白1（HMGBI）和晚期糖基化终产物受体（RAGE）在宫颈鳞状细胞癌（CSCC）组织中的表达及其与临床病理间的关系，探讨HMGB1／RAGE信号通路在CSCC转移中的作用。方法采用荧光实时定量PCR、免疫组化及Western blot方法分别检测CSCC组织和正常宫颈鳞状上皮组织中HMGBI、RAGE基因及蛋白的表达。结果HMGB1在CSCC中的表达水平高于正常宫颈鳞状上皮组织（P〈0．05），其在CSCC组织中的表达与肿瘤分期、侵袭及转移明显相关（P〈0．05），而与肿瘤大小、分化程度无关（P〉0．05）。RAGE mRNA的表达与CSCC转移明显相关（P〈0．05）。转移组中的HMGBI mRNA和RAGEmRNA表达水平呈显著相关性。结论HMGB-1与CSCC发生、侵袭和转移相关，RAGE与CSCC转移相关，HMGBI／RAGE信号通路在CSCC转移过程中可能发挥重要作用。

HIF-lα、VEGF和Sema4D蛋白在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

实体肿瘤在发展过程中，因体积增大、血液供应不足而出现缺氧，缺氧又通过关键的转录因子——缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor，HIF）使肿瘤血管增生、转移等恶性行为更加明显［1］。HIF－1α在恶性肿瘤发生、发展中所发挥的作用主要与其调节的下游基因，

沉默轴突导向蛋白4D基因对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

摘要：目的 探讨沉默轴突导向蛋白4D（Sema4D）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响,并验证Sema4D干扰RNA对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 针对Sema4D基因构建短发夹RNA（shRNA）重组载体pshRNA Sema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒,并行酶切鉴定和测序分析.采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法筛选RNA干扰效果最佳的重组载体,通过脂质体介导转染卵巢癌SKOV3细胞（重组载体组）,并以空载体组（转染空载体pcDNA3.1质粒）和未转染组（未作任何处理）为对照.采用RT-PCR法和Westem blot法分别检测转染前后SKOV3细胞中Sema4D mRNA和蛋白表达,并榆测转染前后SKO3细胞的增殖、侵袭和转移能力.建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,将满足成瘤标准的15只裸鼠随机分为pshRNASema4D组（重组载体组）、空载体组和未转染组,每组5只,分别向瘤块内注射pshRNASema4D-B（50μg/次）、空载体（50μg/次）和磷酸盐缓冲液（PBS,100μl/次）,每3 d注射1次,共3周,观察移植瘤生长情况.结果 酶切鉴定和测序分析证实,靶向Sema4D的3个ShRNA重组载体pshRNASema4D-A、pshRNASema4D-B和pshRNASema4D-C质粒构建成功.RT-PCR法筛选显示,重组载体pshRNASema4D-B质粒干扰效果最佳.重组载体组转染24、48和72 h时,SKOV3细胞中Sema4DmRNA的相对表达水平分别为0.401.4±0.051、0.120±0.035和0.014±0.015,重组载体组转染72 h时的Sema4D mRNA相对表达水平明显低于空载体组（0.521±0.019）和未转染组（0.536±0.040,P〈0.05）.Western blot法检测显示,重组载体组转染24、48和72 h时,细胞中Sema4D蛋白的相对表达水平分别为0.196±0.023、0.074±0.015和0.040±0.014,重组载体组转染72 h时的Sema4D蛋门相对表达水平明显低于空载体组（0.275±0.009）和未转染组（0.282±0.015,P〈0.05）.与空载体组和未转染组比较,重组载体组细胞增殖、侵袭和迁移能力受到抑制（P〈0.05）.注射pehRNASema4D-B后,裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤块重量较空载体组和未转染组明显降低（P〈0.05）.结论 RNA干扰技术能成功沉默SKOV3细胞中Sema4D基因的表达,通过下调Sema4D基因的表达呵抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭及转移,Sema4D干扰RNA能抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,Sema4D基因可能成为人卵巢癌基因靶向沉默治疗的重要候选基因之一.

第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因对人卵巢癌A2780细胞侵袭和迁移能力的影响及相关机制

目的探讨第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因（PTEN）对人卵巢癌A2780细胞侵袭和迁移能力的影响及相关机制。方法将携带外源性人PTEN基因的野生型质粒（WT—PTEN）和磷酸酶域突变型质粒（C124A—PTEN）转入人卵巢癌细胞株A2780中，利用Transwell小室法和划痕愈合实验检测转染前后细胞侵袭和迁移能力的变化，应用Western blot检测各组细胞PTEN及其下游相关蛋白表达的变化。以空载体质粒和未转染细胞作为对照。结果细胞侵袭实验显示，WT-PTEN／A2780、C124A—PTEN／A2780、GFP／A2780和A2780细胞穿透Matrigel胶的细胞数，分别为（24．3±2．5）个、（43．7±3．8）个、（44．7±2．1）个和（45．0±3．0）个，WT-PTEN／A2780细胞的穿膜数明显少于其他各组（P〈0．05）。划痕愈合实验显示，WT—PTEN／A2780、C124A-PTEN／A2780、GFP／A2780和A2780细胞的迁移距离分别为（54．1±3．7）μm、（78．7±3．4）μm、（78．1±3．1）μm和（76．8±3．5）μm，WT-PTEN／A2780细胞的迁移速度明显慢于C124A—PTEN／A2780、GFP／A2780和A2780细胞（P〈0．05）。WT-PTEN／A2780细胞中基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白的表达明显低于C124A．PTEN／A2780、GFP／A2780和A2780细胞（P〈0．05）。结论野生型PTEN可有效抑制A2780细胞的侵袭和迁移，该抑制作用与A2780细胞中MMP-9表达下调有关。

卵巢上皮性癌组织中轴突导向蛋白4D的表达与微血管密度的关系

卵巢上皮性癌（卵巢癌）的病死率居妇科恶性肿瘤的首位，总的5年生存率仅为30％左右，其原因与癌组织血管丰富，易发生转移导致患者预后不良密切相关。卵巢癌组织中的微血管密度（microvessel density，MVD）是评价血管生成的重要指标。轴突导向蛋白（semaphorin）最初是在研究神经系统发育过程中发现的，参与轴突导向、纺锤体形成及神经信号通路的传导。semaphorin家族共有20多个成员，

卡铂按不同AUC给药对晚期卵巢上皮癌患者药动学参数的影响

目的:为指导卡铂的合理使用和个体化治疗提供参考。方法:采用高效液相色谱-紫外法。色谱柱为Kromasil C18柱,流动相为H2O,柱温为30℃,流速为1 ml/min,检测波长为230 nm,进样量为50μl。选择符合条件的晚期卵巢上皮癌患者10例,均分为两组,分别使用两种剂量卡铂(AUC=4或AUC=6)联合紫杉醇进行化疗;以尿苷为内标物,测定血浆中卡铂的质量浓度,绘制药-时曲线,计算两组药动学参数。结果:血浆中卡铂检测质量浓度在1.56～100μg/ml范围内同卡铂与内标物峰面积之比呈良好的线性关系(r=0.999 0);卡铂平均相对回收率为98.91%,RSD=3.96%(n=5);两种给药剂量下的单次给药计算出的卡铂的药动学参数AUC(0-t)、AUC(0-∞)、MRT(0-t)、VRT(0-t)、cmax差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究建立的体内卡铂血药浓度测定方法准确、快速、简便;卡铂药动学参数与剂量相关,AUC=6时卡铂在体循环中的血药浓度更高。