肿瘤中MicroRNAs与NF-κB关系的相关研究进展

核转录因子NF-κB(Nuclear factorκB)可以调节许多参与先天免疫、获得性免疫、细胞增殖、炎症与肿瘤生长的重要基因。MicroRNAs(miRNAs)是一种由20～25个碱基组成的短小RNA分子,能够通过与mRNAs 3′末端非翻译区域的相互作用,负向调节动植物基因的表达。明确miRNAs的生物学作用及其对NF-κB的影响,对于了解复杂的免疫系统,发展癌症治疗十分必要。本文就miRNAs和NF-κB在肿瘤中的相互关系进行综述,讨论miR-146、miR-155、miR-181b、miR-21以及miR-301a在NF-κB活化及肿瘤发生过程中的作用。

胃癌中组织因子途径抑制剂2的表达及其与预后和肿瘤血管生成模式的相关性研究

目的:探讨胃癌中组织因子途径抑制剂2(tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2)表达的临床意义及其与患者预后的关系,分析TFPI-2表达与胃癌组织中内皮依赖性血管和血管生成拟态的相关性。方法:采用免疫组化对187例胃癌标本进行TFPI-2蛋白表达检测,分析其与临床病理参数的关系。通过CD34免疫组化染色评价肿瘤组织微血管密度,CD34/PAS双重染色观察胃癌中血管生成拟态的分布特征。结果:胃癌组织中TFPI-2阳性表达率约为48.1%(90/187),TFPI-2蛋白表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度及远处转移有关,而与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤最大径及临床分期无关。KaplanMeier分析表明与低、中表达组相比,TFPI-2高表达组患者总生存期和无瘤生存期明显延长。TFPI-2与血管生成模式相关性分析显示,在所有胃癌组织中TFPI-2与内皮依赖性血管呈负相关,与血管生成拟态无关。在中、高分化胃癌组织中,TFPI-2与内皮依赖性血管呈负相关,与血管生成拟态无关。在低分化胃癌中TFPI-2与血管生成拟态呈正相关。结论:随着肿瘤恶性程度的增加TFPI-2蛋白表达有所降低,TFPI-2表达与胃癌预后密切相关。在分化程度较高的胃癌组织中,TFPI-2通过抑制内皮依赖性血管,抑制肿瘤浸润和转移,具有抑制胃癌进展的作用;在恶性程度较高的低分化胃癌中,TFPI-2促进血管生成拟态的形成,提示TFPI-2在胃癌血管生成模式中可能起到双向调节作用。

伴微乳头成分的肺腺癌EGFR KRAS基因突变和临床病理学特征相关研究

目的:探讨伴微乳头成分的肺腺癌(pulmonary adenocarcinoma with a micropapillary pattern,MPPAC)EGFR、KRAS基因突变情况及其临床病理学特征。方法:根据2011年的肺腺癌新分类诊断标准,以是否伴有微小乳头状结构(micropapillary pat tern,MPP),将144例肺腺癌病例分为MPP阳性组77例和MPP阴性组77例。MPP阳性组中又按MPP所占比例分为(+、++、+++)三亚组。RT-PCR法检测两组EGFR、KRAS基因突变情况。结果:在144例肺腺癌病例中EGFR突变62例(43.1%),KRAS突变9例(6.25%),EGFR突变与性别(P=0.018)和肿瘤体积(P=0.016)有关。MPP阳性组EGFR突变率高于MPP阴性组(P<0.001);KRAS突变率低于MPP阴性组(P=0.016)。EGFR基因突变频率在MPP三亚组中无明显不同(P=0.932)。结论:伴微乳头结构的肺腺癌EGFR突变频率高于肺腺癌其它亚型,KRAS突变频率低于肺腺癌其它亚型,说明其有独特的分子生物学特点。

伴鳞样成分的甲状腺间变性癌临床病理分析

目的:探讨伴鳞样成分的甲状腺间变性癌(anaplastic thyroid carcinoma with squamoid eell component,ATC-SCC)的诊断、鉴别诊断及临床病理特征方法:回顾性分析85例少见甲状腺肿瘤的临床病理资料,通过HE切片进行形态学观察,对5例ATC-SCC,6例甲状腺鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC),8例甲状腺呈胸腺样分化癌(carcinoma showing thymus-like elements,CASTLE)和2例甲状腺降钙素阴性的神经内分泌肿瘤(calcitonin-negative neuroendocrine tumor of the thyroid gland,CNNETT)进行9项免疫组织化学染色,包括Cytokeratin(CK)、Vimentin(VM)、Chromogranin A(CgA)、Synaptophysin(SYN)、CD117、CD5、Calcitonin(CT)、Thyroglobulin(TG)和Thyroid transcription factor-l(TTF-1),并对结果进行分析结果:5例ATC-SCC中,男性2例,女性3例;年龄41～79岁,平均年龄53.2岁;肿物位于左腺叶3例,右腺叶2例。临床表现为无痛性颈部肿物。肿物通常体积较大,质地硬实,与周围组织粘连。镜下可见肿瘤组织由梭形细胞、多形性巨细胞、破骨样细胞和鳞状上皮样细胞以不同比例混合而成,并可见胞浆红染的横纹肌样细胞及大片坏死免疫组织化学染色显示5例ATC-SCC的肿瘤细胞CK和VM均阳性。鳞状上皮样细胞为主要成分时需要与SCC、CASTLE和CNNETT进行鉴别。结论:ATC-SCC多见于老年人,女性较多见,生长迅速,常扩展至甲状腺外累犯颈部软组织,预后非常差。

非小细胞肺癌中EGFR和K-ras基因突变与蛋白表达相关性的研究

背景与目的:当前表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因靶向治疗已成为晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗的研究的热点之一。本研究旨在探讨NSCLC患者中EGFR基因和K-ras(Kirsten rat sarcoma viral oncogene)基因突变的情况,分析其与蛋白表达的相关性及对吉非替尼(gefitinib)治疗的指导意义。方法:收集200例NSCLC患者新鲜组织,采用基因测序法检测EGFR及K-ras基因突变的状态;同时采用免疫组织化学法检测EGFR和K-ras蛋白的表达。结果:200例患者中,EGFR基因突变率为33%,主要发生在19号和21号外显子;K-ras基因突变率为5.5%,主要位于第12密码子;不存在同时携带有EGFR和K-ras两种基因突变的病例。腺癌尤其是含细支气管肺泡癌(bronchioloalveolar carcinoma,BAC)病理分型的患者、非吸烟患者和女性患者EGFR突变率较高。EGFR蛋白表达阳性率为16%,与总的EGFR突变无关(P>0.05),但与19号外显子突变具有统计学意义(P<0.05)。K-ras蛋白表达阳性率为52.5%,与K-ras基因突变无关(P>0.05)。15例携带有EGFR基因突变的NSCLC患者服用吉非替尼,12例(其中8例为EGFR蛋白表达阴性)有效。结论:EGFR蛋白表达与EGFR基因19号外显子突变具有一定相关性;联合检测EGFR和K-ras基因突变可用来筛选对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗敏感的人群,并预测吉非替尼治疗晚期NSCLC的疗效及预后。

最新国际肺腺癌分类方法回顾性分析具有细支气管肺泡癌特征的肺腺癌209例

目的:探讨最新国际肺腺癌分类中肺腺癌各组织学亚型与预后的相关性。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2000年1月至2005年12月间经手术切除、病理诊断为细支气管肺泡癌(bronchioloalveolar carcinoma,BAC)或伴有BAC成分的腺癌209例。按照肺癌新分类,对所有病例组织学切片进行复习和分类,同时进行临床资料的收集和随访。结果:原诊断BAC的209例病例中原位腺癌(adenocarcinoma in situ,AIS)20例,微小浸润性腺癌(minimally invasive adenocarcinoma,MIA)13例,鳞屑样生长方式为主型腺癌(Lepidic predominant adenocarcinoma,LPA)82例,乳头状和腺泡状为主型55例,实性型和微乳头为主型39例。随访发现,腺癌的组织学亚型与5年生存率有显著的相关性,AIS和MIA两组患者的5年生存率均为100%,且均无淋巴结转移;LPA患者5年生存率为54.5%;腺泡型和乳头型腺癌的患者比AIS、MIA、LPA三组预后差,而实性型和微乳头型的病例预后最差。结论:肺腺癌中AIS和MIA有独特的临床病理特征及较好的预后。对具有细支气管肺泡癌特征的肺腺癌,严格按照最新国际肺腺癌分类标准进行亚型分型,对指导临床治疗及预测预后有重要意义。

肺鳞状细胞癌伴神经内分泌分化与生物学特性及预后关系探讨

目的:初步探讨肺鳞状细胞癌的神经内分泌分化(neuroendoerine-like differentiation,ND)情况与生物学行为和预后的关系。方法:收集手术后经病理证实为肺原发鳞癌患者120例瘤组织石蜡标本,术前均未接受放化疗。采用免疫组化二步法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE),突触素(SYN)和嗜铬素A(CGA)的表达,采用x2检验分析ND与肺鳞癌生物学行为之间的关系,分别采用kaplan-meier生存曲线和COX风险比例模型进行单因素和多因素生存分析。结果:120例肺鳞癌中,CGA阳性率46.7%,NSE阳性率60.8%,SYN阳性率36.7%。鳞癌伴ND阳性率为40.8%。相关性分析结果示3种标志物之间无明显相关性。肺鳞状细胞癌伴ND与肿瘤细胞分化程度及瘤体分期(T分期)有关,肿瘤细胞分化越差,瘤体分期越高,ND阳性率越高。SYN的阳性表达与患者的年龄、性别及肿瘤细胞的分化程度有关,年龄越高,女性,肿瘤细胞分化越差,SYN阳性表达率越高。单因素生存分析结果经Log-Rank检验示SYN(x^2=3.961,P=0.047)及术后化疗(x^2=4.447,P=0.035)与患者的术后生存率有关,而ND与患者术后生存率无明显相关性(x^2=0.524,P=0.469)。Cox多因素生存分析结果示患者的年龄(OR=0.459,P=0.029),SYN阳性表达(OR=2.114,P=0.036),CGA阳性表达(OR=0.558,P=0.066)和术后化疗(OR=1.866,P=0.091)与患者预后相关,可作为可切除肺鳞癌患者的独立预后因素。结论:肺鳞癌伴神经内分泌分化与肿瘤细胞分化程度及瘤体分期有关,SYN和术后化疗是评价可手术患者预后的两个重要指标。

TTF-1及CK在肺小细胞癌中的表达及预后意义

目的:研究甲状腺转录因子-1(thyroid transcription factor-1,TTF-1)和广谱角蛋白(pan-cytokeratin,CK)在肺小细胞癌(small eelllung carcinoma,SCLC)中的表达,初步探讨其作为SCLC预后判断分子标志物的可能性。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2006年1月至2008年12月间,经手术切除、病理证实的SCLC 65例,采集病例相关临床病理资料。免疫组化EnVision二步法分别检测TTF-1及CK在SCLC中的表达,并对结果进行分析。结果:TTF-1和CK在SCLC中阳性表达率分别为61.5%(40/65)和69.2%(45/65)。Kaplan-Meier分析显示,TTF-1表达阳性者预后优于表达阴性者(Log-rank,P=0.012)。CK不同表达两组间生存差异无统计学意义。多因素分析显示,TTF-1表达、淋巴结转移、pTNM分期为影响SCLC患者术后生存的预后因素。结论:TTF-1与SCLC预后密切相关,可能成为SCLC临床预后良好的标志物。CK在判断SCLC预后中的地位尚需进一步探讨。

肝细胞肝癌组织中Bcl-2核表达及MMP-2和MMP-9表达与术后复发转移及预后的关系

目的:探讨抗凋亡蛋白Bcl-2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9在肝细胞肝癌中表达的关联性,及其与复发、转移和预后的关系方法:以石蜡包埋组织切片,免疫组织化学SP法染色检测97例肝细胞肝癌,分别在复发与转移组49例和非复发与转移组48例中分析Bc1-2核表达和MMP-2、MMP-9表达的情况结果:复发与转移组Bcl-2核表达高于无复发与转移组(x^2=7.912,P=0.005),复发转移组MMP-9表达高于无复发转移组(x^2=6.545,P=0.011),Bcl-2核表达阳性细胞率与MMP-9阳性细胞率存在相关性,而与MMP-2无关Bcl-2核表达组患者生存时间较短,差异具有统计学意义。结论:Bcl-2核表达阳性患者更易出现复发与转移,且与MMP-9过度表达存在关联性,表明Bcl-2入核可能对肿瘤转移的相关生物学功能具有调节作用,可作为评价HCC复发与转移、不良生存预后的候选临床标志。

非小细胞肺癌原发灶与淋巴结转移灶中KRAS和EGFR基因状态的比较及其临床意义

目的:比较表皮生长因子受体(EGFR)基因和KRAS基因在非小细胞肺癌原发灶及其淋巴结转移灶之间突变状态的差异,并分析其与吉非替尼治疗非小细胞肺癌(NSCLC)疗效之间的关系。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2010年5月至2010年11月间手术切除的80例NSCLC病例标本,利用直接测序和实时荧光定量PCR的方法分别检测原发灶和相应淋巴结转移灶中EGFR基因第18、19、20、21外显子及KRAS基因第12、13密码子的突变情况;其中5例在淋巴结转移灶中检出EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)敏感型基因突变的患者接受了吉非替尼的新辅助靶向治疗。结果:80例患者中,检出原发灶携带KRAS和EGFR基因突变分别为1例和21例,检出转移灶携带KRAS和EGFR基因突变分别为7例和26例;分别有6例(7.50%)和7例(8.75%)患者其KRAS和EGFR基因状态在原发灶和转移灶之间不一致。直接测序法和实时荧光定量PCR法的检测结果一致。在5例接受吉非替尼治疗的患者中仅1例原发病灶中未检出EGFR-TKI敏感型基因突变,并表现为疾病进展。结论:部分NSCLC患者中KRAS和EGFR的基因状态在肿瘤转移过程中会发生改变,在给予患者靶向治疗时不应忽视这一现象的存在。实时荧光定量PCR法比直接测序法更适用于临床的快速检测工作。

平滑肌肉瘤中血管生成拟态的初步研究和预后相关性分析

目的:研究平滑肌肉瘤中是否存在血管生成拟态,阐述血管生成拟态的临床意义及相关机制。方法:收集临床和预后资料完整的平滑肌肉瘤组织切片45例,复习切片明确诊断后进行CD34和PAS双重染色,证实肿瘤组织中血管生成拟态的结构,分析血管生成拟态相关的临床意义。结果:45例平滑肌肉瘤中25例(55.6%)具有血管生成拟态。有转移患者和无转移患者血管生成拟态阳性率差别有统计学意义(P<0.05),生存的患者和死亡的患者血管生成拟态阳性率差别也有统计学意义(P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析提示有无血管生成拟态肿瘤患者生存时间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:平滑肌肉瘤中存在血管生成拟态,血管生成拟态是平滑肌肉瘤患者预后的不利因素,有血管生成拟态的患者易发生转移,预后比无血管生成拟态的患者差。

1138例肺部肿物术中冰冻诊断结果分析

目的:通过对1 138例肺部肿物的冰冻切片进行回顾性分析,探讨术中冰冻对肺部肿物诊疗的价值。方法:收集并整理1138例肺部肿物术中冰冻切片及其诊断结果,并与相应石蜡切片及诊断结果进行比较,总结分析肺部肿物冰冻诊断的特点和常见误诊原因。结果:1 138例肺部肿物的术中冰冻诊断准确率为96.2%(1 094/1 138),误诊率为3.8%(44/1138);误诊比例最高的三个病种分别为炎性假瘤(31.8%)、硬化性血管瘤(18.1%)及结核病(13.6%)。结论:术中冰冻切片诊断对肺部肿瘤的性质确定具有重要意义。正确的冰冻诊断需要全面的临床资料和足够的病变组织;病理医师要有良好的病理基础和冰冻切片诊断的丰富经验及较全面的临床、影像学知识才能保证诊断的可靠性。

维生素D与乳腺癌骨转移研究进展

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，骨转移发生率约为65％～75％。一旦发生骨转移，将伴有病理性骨折、脊髓压迫、高钙血症、剧烈疼痛等，严重影响患者生存质量。近来研究发现维生素D不仅能降低乳腺癌患病率、复发率和死亡率，还可降低乳腺癌骨转移的发生率。现将相关研究作如下综述。

ALK^＋弥漫大B细胞淋巴瘤的研究进展

ALK+弥漫大B细胞淋巴瘤(anaplastic lymphoma kinase-positive diffuse large B-cell lymphoma,ALK+DLBCL)是弥漫大B细胞淋巴瘤的一种罕见的亚型,具有特殊的免疫母细胞或浆母细胞样的形态学特点,免疫表型独具特征,细胞遗传学异常,在儿童和成人都可发生。此病虽然罕见,但是其临床过程具有侵袭性且预后不良,因此明确认识该疾病的特点是诊断的关键。ALK+DLBCL对传统化疗方案反应性差,最近推出的小分子ALK抑制剂可能对这种疾病的患者提供了一个潜在的新的治疗选择。

伴微乳头结构的肺腺癌恶性潜能机制研究

目的:探讨伴微乳头成分的肺腺癌(pulmonary adenocarcinoma with a micropapillary pattern,MPPAC)上皮间质转化和增殖调亡特征,为临床评价其恶性潜能提供理论依据。方法:根据2011年发表的肺腺癌新分类诊断标准,以是否伴有微小乳头状结构(micropapillary pattern,MPP)将120例肺腺癌病例分为64例MPP阳性组,56例MPP阴性组。免疫组织化学法检测Vimentin、E-cadherin、Capase-3、pEGFR的表达。结果:120例肺腺癌病例中pECFR在女性(P=0.035)、非吸烟(P=0.017)患者中高表达。Vimentin在MPP阳性组的表达(28.1%)高于MPP阴性组(16.1%)并且其多表达于微乳头结构腔内散落的细胞;Caspase-3在MPP阳性组高表达(P=0.001)。结论:微乳头结构的腔内散落细胞表现间质表型有利于癌细胞浸润转移,伴乳头结构的肺腺癌有其独特的分子生物学特征。

RNAi抑制CAR基因对人肺鳞癌细胞系NCI-H520裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:建立RNAi抑制柯萨奇病毒腺病毒受体(coxsackievirus and adenovirus receptor,CAR)基因表达的肺鳞状细胞癌NCI-H520稳定表达细胞系,将CAR基因沉默的NCI-H520细胞移植于裸鼠体内构建移植瘤模型,观察裸鼠体内成瘤率及对瘤体生长等方面的影响。方法:将针对CAR mRNA序列设计的小干扰RNA重组质粒分别以脂质体转染至NCI-H520细胞,并经G418抗性筛选得到稳定细胞系;用平板克隆形成实验观察RNAi抑制CAR基因表达对NCI-H520细胞增殖的影响;通过动态观察瘤体的生长,进一步验证CAR对肺癌的增殖是否有促进作用。结果:筛选出抑制CAR基因表达效果最佳的一组shRNA,并建立了能稳定而有效抑制CAR基因表达的肺鳞癌NCI-H520细胞系。平板克隆形成实验显示,shRNA-2抑制CAR基因表达后NCI-H520细胞的增殖能力有所下降,但其差异无统计学意义(P>0.05);且在肿瘤形成实验中,实验组瘤重显著低于对照组(P<0.01)。结论:裸鼠肺癌移植瘤模型构建成功,为今后肺癌的研究奠定基础。利用RNAi有效抑制了CAR基因的表达,并抑制NCI-H520细胞在裸鼠体内瘤体的生长,CAR有望成为肺癌基因治疗的靶点之一。

多西环素对小鼠黑色素瘤基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达和活性的抑制作用

目的观察多西环素对小鼠恶性黑色素瘤模型MMP-2、MMP-9表达和活性的作用。方法C57／BL小鼠47只建立黑色素瘤模型，随机分为给药组和对照组。给药组每日腹腔注射盐酸多西环素，对照组给予等量生理盐水。7d后处死给药组和对照组小鼠各10只。继续给药14d后处死剩余小鼠，比较两个时间点多西环素对MMP-2、MMP-9、VEGF表达的影响。并用检测MMP-9、MMP-2酶原、活性MMP-2的活性变化。结果多西环素给药7d抑瘤率为52．36％，给药14d抑瘤率为35．63％。给药组的MMP-2、MMP-9表达均低于对照组，而VEGF的表达高于对照组。给药组的MMP-9和活性MMP-2的条带酶解量以及活性MMP-2与MMP-2酶原比值均低于对照组，但两组间MMP-2酶原条带酶解量差异无统计学意义。结论多西环素可以抑制恶性黑色素瘤小鼠移植瘤的生长，其作用机制可能和抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。

利用石蜡包埋组织进行BIOMED-2标准化IG/TCR基因重排检测在淋巴瘤诊断中的意义

目的 探讨利用石蜡包埋组织（FFPE）标本进行BIOMED-2标准化IG/TCR基因重排检测在淋巴瘤诊断中的可行性以及提取DNA的扩增最大片段与IGH V-J不同引物区域阳性检出率之间的关系.方法 从50例患者FFPE标本中提取DNA.采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并应用PCR片段分析法进行IG/TCR基因重排的克隆性分析.结果 ①DNA由原浓度（100～500ng/μl）稀释至50～100 ng/μl后,30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者蜡卷标本DNA扩增最大片段（300～400bp）含量由10.0％提高到90.0％ （P＜0.01）,IGH＋IGK阳性率由46.7％提高至83.3％,差异有统计学意义（P=0.006）;石蜡切片标本DNA扩增最大片段均在300 bp以上,IGH＋IGK阳性率为96.7％.蜡卷标本与石蜡切片标本IGH＋IGK阳性率差异无统计学意义（P=0.195）.②在DNA高浓度时,提取的DNA扩增最大片段以100或200 bp为主,短片段IGH FR3的检出率比长片段IGH FR1更加稳定.③13例外周T细胞淋巴瘤患者标本TCRG＋TCRB均为阳性,对照组7例反应性淋巴组织增生患者IG/TCR未见克隆阳性.结论 DNA浓度的稀释是唯一提高DNA最大片段扩增比例及克隆性检出率的方法;短片段IGH FR3的检出率几乎不受DNA浓度的影响.利用FFPE标本进行BIOMED-2标准化IG/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有指导意义.