VEGF、nm23在胆囊癌中的表达及与淋巴结转移相互关系的研究

目的 :研究VEGF与nm23基因在胆囊癌中的表达及其在淋巴结转移中的作用 ,并探讨两者的相互关系。方法 :采用免疫组化法 ,检测VEGF蛋白及nm23蛋白在胆囊癌中的表达。结果 :VEGF在胆囊癌中的阳性表达率为86 7 % ,明显高于正常组织 ;而nm23阳性表达率则为40 % ,显著低于正常组织 ;两者在胆囊癌组织中的表达呈负相关趋势。结论 :VEGF与nm23基因协同促进胆囊癌的淋巴结转移 。

BH3结构域拟似物BH3I-2'诱导人白血病细胞凋亡机理的探讨

目的:探讨BH3结构域拟似物BH3I-2'诱导白血病细胞发生凋亡的潜在机制,为其临床应用提供理论依据。方法:应用流式细胞仪、ELISA分析、WesternBlotting印渍技术检测BH3I-2'作用后白血病细胞K562、CEM的凋亡情况、线粒体△Ψm、ROS变化、NF-κB活性及凋亡相关蛋白表达。结果:BH3I-2'能显著诱导白血病细胞凋亡,引起细胞线粒体跨膜电位△Ψm下降、ROS生成并同时激活核转录因子NF-κB及抗凋亡蛋白的上调。结论:BH3结构域拟似物BH3I-2'通过消耗线粒体跨膜电位,诱导细胞氧自由基ROS生成,进而造成线粒体内膜损伤,触发线粒体通路引起细胞凋亡;并且也同时诱导了NF-κB、抗凋亡蛋白激活表达,提示药物诱导肿瘤细胞凋亡的同时也启动了细胞自身的保护机制。

蛋白酶体抑制剂在TRAIL诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡中的协同作用

目的:探讨合理应用蛋白酶体抑制剂PS-341协同TRAIL有效增加耐药恶性淋巴瘤细胞凋亡的内在机制,为耐药肿瘤的治疗提供新思路。方法:采用流式细胞仪、Western Blot、荧光显色技术观察PS-341与TRAIL协同作用后恶性淋巴瘤细胞CRL的凋亡情况、促凋亡蛋白Bax的表达水平以及Caspase-3的活性变化。结果:TRAIL作用细胞24h凋亡率仅为21.3%,并且出现Bax蛋白表达水平的下降,6h的表达量仅为正常量的5/9;联合使用浓度为10nmol/L PS-341后显著增加细胞的凋亡,24h凋亡指数为50.4%;6h Bax蛋白表达量为正常量的1.2倍,Caspase-3酶活性增加至122.56±1.434μmol/L·h^(-1)·mg^(-1)蛋白。结论:合理使用蛋白酶体抑制剂可通过有效抑制凋亡蛋白Bax降解,逆转恶性淋巴瘤细胞对TRAIL的药物抵抗,为合理用药提供理论依据。

腹腔镜与开腹手术治疗老年进展期胃癌比较

目的:比较腹腔镜与开腹胃癌根治术治疗老年进展期胃癌的近远期疗效、安全性及对免疫指标的影响。方法:回顾性分析96例70岁以上进展期胃癌患者的临床资料,其中52例接受开腹胃癌根治术(OG组),44例接受腹腔镜胃癌根治术(LG组),比较两组免疫指标、近远期疗效及安全性。结果:术后3 d,LG组CD3+、CD4+及CD8+均显著高于OG组(P<0.05),IL-2及IL-6显著低于OG组(P<0.05)。LG组并发症发生率13.7%,显著小于OG组32.7%(P<0.05)。随访15~60个月,两组术后相同时间的病死率、复发率、转移率均无统计学差异(P>0.05),但LG组中位生存时间37个月,长于OG组34个月(P<0.05)。结论:腹腔镜胃癌根治术治疗老年进展期胃癌,具有创伤小,安全性好,免疫功能损伤小的优点,近期疗效和中位生存期优于开腹术组。

VEGF基因表达与肝细胞癌生物学特性的研究

目的 :研究血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)蛋白及mRNA与肝细胞癌生物学特性的关系。方法 :应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及ABC免疫组化染色技术 ,检测 6 0例肝细胞癌中VEGFmRNA及蛋白表达情况 ,并分析它们与肝细胞癌临床及病理的关系。结果 :VEGFmRNA及蛋白的阳性表达率分别为 78 3%和 81 3% ,明显高于正常肝组织 (P <0 0 5 ) ;并且VEGF表达与肿瘤的病理分级、有无包膜、瘤栓、直径大小均有相关性 ;另外 ,VEGFmRNA和蛋白表达呈正相关关系。结论 :VEGFmRNA和蛋白表达水平越高 ,细胞恶性程度及侵袭、转移能力越强 。

17β-雌二醇促进肝细胞生长因子表达抑制CCL4诱导的大鼠急性肝功能损害

目的:探索17β-雌二醇(E2)抑制四氯化碳(CCL4)诱导Wistar大鼠急性肝功能损害中肝细胞生长因子(HGF)表达的意义。方法:40只Wistar雄性大鼠随机分为A、B、C和D共4组,均采用CCL4诱导肝细胞急性损伤4周。此外,A组肌注HGF100mg/(kg·d);B组肌注HGF50mg/(kg·d);C组作为对照组;D组于每日口服他莫昔芬6mg/(kg·d)。第4周结束时将全部大鼠开腹抽取门静脉血液和新鲜肝脏组织,采用生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)含量,免疫组化S-P方法检测HGF和增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况,实时荧光定量Real-TimePCR(SYBRGREEN1)技术测量大鼠肝脏组织中HGFmRNA。结果:(1)各组大鼠血清ALT和TBIL高低顺序均为:A<B<C<D,各组比较具有显著性差异(F(ALT)=407·410,F(TBIL)=144·872,P<0·05)。(2)各组大鼠肝脏组织中HGF表达强弱顺序为:A>B>C>D,各组比较差异有统计学意义(F=5·148,P<0·05);各组大鼠肝脏组织中PCNA表达强弱顺序为:A>B>C>D,各组比较差异有统计学意义(F=5·627,P<0·05)。(3)各组大鼠肝组织中HGFmRNA表达高低比较:A>B>C>D,组间比较差异有统计学意义(F=32·537,P<0·05)。(4)在所有大鼠中,HGF与PCNA表达为明显的直线正相关(r=0·370,P<0·05)。结论:E2在CCL4诱导Wistar大鼠肝功能损害中,通过增强肝组织中HGF的表达,促进了肝细胞增殖并改善了肝功能。

肝细胞癌转移活性与VEGF基因蛋白表达关系的研究

目的 分析VEGF蛋白表达与肝细胞癌转移活性的关系。方法 应用ABC免疫组化染色技术,检测60例肝细胞癌中VEGF蛋白、nm23蛋白表达情况,并分析它们之间及与肝细胞癌临床病理参数的相互关系。结果 肝癌组织中VEGF蛋白的阳性表达率为81.3％,明显高于正常肝组织(P<0.05),VEGF表达与肿瘤的病理分级有相关性;nm23蛋白的阳性表达率在癌组织中(43.3％)显著低于正常组织:VEGF与nm23蛋白表达呈负相关关系。结论 说明nm23基因的缺失和肿瘤中VEGF的过度表达具有协同作用趋势,增加肿瘤的转移活性。

凋亡蛋白Bax在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导恶性淋巴瘤细胞耐药中的调节作用

目的探讨凋亡蛋白 Bax 在恶性淋巴瘤细胞对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)凋亡抵抗中的调节作用,为临床克服肿瘤耐药提供治疗靶点。方法分别采用500μg/L TRAIL 和/或10 nmol/L 蛋白酶体抑制剂 PS-341处理恶性淋巴瘤细胞(CRL)和正常对照细胞(HRC)。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。荧光显色技术检测细胞半胱氨酸蛋白水解酶-8酶活性。Western 印迹检测细胞中 Bax 蛋白表达水平。免疫沉淀技术(IP)检测 Bax 蛋白的活性及构象变化。结果与 HRC 细胞比较,CRL 细胞对 TRAIL 存在显著抵抗,24 h 凋亡指数仅为21%,前者为32%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);同时在 TRAIL 作用过程中 CRL 细胞中 Bax 表达呈下降趋势,24 h 表达量仅为正常量的5/17。当联合使用 PS-341后,可有效抑制 Bax 蛋白降解,6 h 表达量为正常量的1.2倍,显著增加活性;同时增加半胱氨酸蛋白酶-8酶活性,6 h 为26.5 μmol·L^(-1)·h^(-1)·mg^(-1)蛋白,从而增加细胞凋亡,6 h 凋亡指数达54%,与对照组比较差异均有统计学意义(均 P<0.01)。结论促凋亡蛋白 Bax 的下调表达参与恶性淋巴瘤细胞对 TRAIL 耐药性。合理的使用蛋白酶体抑制剂可通过抑制蛋白降解,增加其活性来有效克服肿瘤耐药。

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的 明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响 ,并探讨其作用机制。方法 采用四甲基偶氮唑蓝法、3 H TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术 ,观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC 772 1的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果 三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC 772 1的生长 ,并且具有时间和剂量依赖性 ;发生作用后 ,细胞生长有明显的凋亡特征性改变 ;细胞DNA合成能力下降。结论 三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长 。

68例原发性结直肠非霍奇金恶性淋巴瘤临床分析

目的探讨结直肠原发性非霍奇金恶性淋巴瘤(NHL)的最佳治疗方案。方法对1965年7月至1998年9月收治的68例结直肠原发性NHL的临床资料进行回顾性分析。结果68例患者均行手术探查,手术切除率为96%,52例切除术后行CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、强的松)或COP(环磷酰胺、长春新碱、强的松)方案化疗,16例同时辅以局部放疗。本组患者术后病理均确诊NHL,其中B细胞源性67例,T细胞源性1例。按AnnArbor国际分期,Ⅰ期15例、Ⅱ期33例、Ⅲ期11例、Ⅳ期9例。患者5年生存率38.2%。结论结直肠原发性NHL病变大小、病期早晚、治疗方法的选择是影响其预后的主要因素。早期发现和以手术为主的综合治疗是提高患者5年生存率的关键。

17β-雌二醇促进肝细胞生长因子表达抑制大鼠肝纤维化发展

肝纤维化发展至肝硬化与性别有极为密切的联系，男、女肝硬化发病率之比为2．3～2．6：1，且女性肝硬化患者大多为绝经后妇女，提示性激素尤其是雌二醇（E2）在肝纤维化的发展中起着重要的抑制作用。我们研究了雌激素在肝纤维化发生发展中对促肝细胞生长因子（HGF）表达的影响，及HGF对肝细胞增殖和抑制纤维形成的作用。

17β-雌二醇对大鼠肝纤维化门静脉压力的作用

目的观察17β-雌二醇(E2)对四氯化碳(CCl_4)诱导大鼠肝纤维化中门静脉压力变化的作用。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为A、B、C和D共4组,均采用CCl_4诱导肝纤维化12周。另外,A组同时采用肌注E2(2 mg/kg体重),2次/周;B组采用肌注E2(1 mg/kg体重),2次/周;C组作为对照组;D组采用每日口服他莫昔芬6 mg/kg体重。第13周将全部大鼠麻醉后测定门静脉压力(PVP)、并采用实时荧光定量(Real-Time)聚合酶链反应(PCR)技术测量大鼠肝脏组织中核转录因子p65(NF-kappa Bp65)mRNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达,采用Massion染色检测大鼠肝组织中胶原纤维(CF)含量情况,并将不同组别大鼠肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA值、TGF-β1 mRNA值、CF含量以及PVP作相关性分析。结果(1)各组大鼠PVP高低为:A<B<C<D,各组比较差异有统计学意义(F=54.712,P<0.05);(2)各组大鼠肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA的表达情况为:A<B<C<D,各组比较差异有统计学意义(F=109.024,P<0.05);(3)各组大鼠肝组织中TGF-β1mRNA表达高低比较:A<B<C<D,组间比较差异有统计学意义(F=224.969,P<0.01);(4)各组大鼠肝组织CF含量比较:A<B<C<D,组间比较差异有统计学意义(F=6.929,P<0.01);(5)各组大鼠肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA值和TGF-β1mRNA值呈直线相关(r=0.724,P<0.05),TGF-β1 mRNA值和CF含量呈直线相关(r=-0.871,P<0.05),CF含量和PVP也呈直线相关(r=0.902,P<0.05)。结论E2通过抑制大鼠肝纤维化肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA的表达,减弱了TGF-β1 mRNA的表达,使得肝组织中CF含量减少,以致PVP降低。

抗内皮细胞抗体在雌激素处理大鼠肝纤维化模型中表达的意义

在肝纤维化发展过程中，存有血管内皮细胞明显的病理改变，是促进肝细胞坏死和门静脉高压形成的重要原因之一。随着肝功能Child—Pugh分级的降低，体内雌激素水平却显著性的升高，而过高水平的雌激素却具有损害内皮细胞的效应。抗内皮细胞抗体（AECA）是一种与雌激素水平相关的自身抗体，能特异性的损伤血管内皮细胞。我们检测不同剂量的17β-雌二醇（E2）及他莫昔芬处理由四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化血清中的AECA滴度变化情况，初步了解E2水平变化和肝纤维化中血管内皮细胞病变的相关性。

不同剂量雌激素处理四氯化碳诱导大鼠肝纤维化形成中肝细胞生长因子和肝细胞增殖的相关性

我们在以四氯化碳（CCl4）诱导建造大鼠肝纤维化的基础上，外用雌激素构造并保持大鼠体内不同的雌激素水平，并探索其与肝纤维化发展中肝细胞增殖的关系。

内皮抑素在雌激素干预大鼠肝纤维化中表达的变化和意义

随着肝功能Child分级的降低,肝纤维化及肝硬化患者体内雌激素水平显著升高,而血管生成受到明显抑制。血管的生成由促血管生成因子和抑血管生成因子的共同调控,内皮抑素（Endostatin）是体内最有力的抑血管生成因子。因此,我们对不同剂量的雌激素及他莫昔芬干预由CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏组织中的Endostatin基因和蛋白的表达进行检测，